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1、临床分子生物学检验复习提纲 Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】临床分子生物学检验复习提纲临床分子生物学检验1.DVA的一级结构是由哪种化学键连接两条单链间：碱基氢键；相邻碱基间：范德华力；脱氧核苷酸间：3-5磷酸二酯键2.可以出现在人体循环系统中的游离核苷酸是脱氧核苷酸，核糖核酸3.原核生物DNA的复制方式是型半保留复制4.核小体结构中的组蛋白是哪些蛋白各自的作用有H2A、H2B、H3、H4：核心颗粒，形成核小体。H1：连接线上，锁定核小体、参与包装5.PCR体系中抑制Taq酶活性的物质有哪些过量加入什么会减少Mg2+浓度导致Taq

2、酶活性降低游离的Mg2+浓度；dNTP、引物和模板DNA等中的磷酸基团，螯合剂如EDTA均可与镁离子结合减少Mg2+浓度。6.PCR扩增时，链的延伸从什么地方开始对于引物是哪一端模板链呢从引物的3端开始，方向5到3；模板DNA序列的3端；3端7.在波长260nm的紫外线下，A值=1时双链DNA的浓度大约相当于50ug/ml的双链DNA。（40ug/ml的单链DNA或单链RNA ，33ug/ml的单链寡聚核苷酸）（紫外分光光度法，核酸浓度的鉴定）计算公式：双链DNA 50A260样本稀释倍数 1000（ug/ul）单链DNARNA 40A260样本 稀释倍数 1000（ug/ul）单链寡聚核苷酸

3、DNA 33A260样本 稀释倍数1000（ug/ul）8.关于基因的定义正确的是能编码有功能的蛋白质多肽链或合成RNA所必需的全部核酸序列，是核酸分子的功能单位。是遗传的结构和功能单位。一个基因大都包括编码蛋白质多肽链或RNA的编码序列，保证转录和加工所必须的调控序列（启动子，增强子），5端、3端非编码序列。9.地中海贫血患者的基因缺陷主要是基因突变中的点突变酶的特性有有很高的耐热稳定性酶量增加使反应特异性下降，酶量过少影响反应产量；Taq DNA聚合酶无3 5外切酶活性，因而无校正功能，在复制新链的过程中会发生碱基错配 ；Taq DNA聚合酶在每次循环中产生的移码突变率为1/30000，碱

4、基替换率为1/8000，因此扩增的片段越长，错配的机率越高。 11.实时荧光定量PCR技术中非特异性荧光染色技术SYBR Green I12.人类基因组DNA多态性的形式限制性片段长度多态性（RFLP）；短序列重复序列（STR）;单核苷酸多态性（SNP）13.常用于菌种鉴定的分子标志物是16sRNA14.真核生物染色体的DNA三级结构不是闭环双链超螺旋结构的是15.原核生物RNA聚合酶的特性有原核生物细胞中只有1种RNA聚合酶，可参与合成mRNA、tRNA和rRNA。RNA聚合酶催化聚合反应时需要Mg2+或Mn2+。该酶无校正功能。16.PCR反应的特异性取决于引物17.DNA的变性是指在某些

5、理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。变性后其它理化性质变化：增色效应 粘度下降比旋度下降 浮力密度升高酸碱滴定曲线改变 生物活性丧失18.参与DNA复制的酶有哪些（1）DNA聚合酶（2）拓扑异构酶：:兼具内切酶和连接酶活力，能迅速将DNA超螺旋或双螺旋紧张状态变成松驰状态，便于解链。 (3）DNA解链酶（4）单链结合蛋白(SSB)：结合在解开的DNA单链上，防止重新形成双螺旋。 (5）引物酶和引发体 ：启动RNA引物链的合成。 (6）DNA连接酶19.第一个分离到的抑癌基因是视网膜母细胞瘤基因 （Rb基因）年简悦威采用Southen分子杂交技术检测出了什么疾病镰状细胞贫血症21.核

6、酸的分离和纯化中，沉淀DNA的常用试剂是常用的有机溶剂有： 乙醇、异丙醇、聚乙二醇常用的盐类有： 醋酸钠、醋酸钾、醋酸铵、氯化钠、氯化钾、氯化镁等。22.通过紫外分光光度法可对核酸纯度进行鉴定，怎么鉴定反过来是否成立否通过A260与A280的比值来判断有无蛋白质的污染。在TE缓冲液中： 纯DNA的A260A280比值为； 纯RNA的A260A280比值为 【注意事项：（1）蛋白质及酚的污染均可使比值下降，可通过蛋白质在280nm的高吸收峰与酚在270nm的高吸收峰来鉴别。（2）RNA污染可致DNA样品的比值高于。（3）比值为的DNA溶液不一定是纯DNA溶液，可能兼有蛋白质、酚、RNA的污染。（

7、4）是高质量的RNA的标志，但由于RNA二级结构的不同，其读数可能会在之间波动。（5）RNA溶液的pH值会影响A260A280的读数，在水溶液中A260A280的比值比在Tris缓冲液（）的读数低。因此，精确测定RNA的浓度应使用水溶液，精确测定RNA的纯度应使用Tris10mmol/L（）溶液。】23.对于等位基因突变位点已被阐明的一些遗传病，可以采用基因诊断的方法是直接诊断：Southern 印迹技术多重PCR技术PCR-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）等位基因特异性寡核苷酸（ASO）DNA芯片技术（DNA chip）单链构象多态性（SSCP）变性梯度凝胶电泳（DGGE）DNA序列

8、分析（DNA sequencing）24.限制性内切酶的（通常指类）特点是（类限制性核酸内切酶识别序列特点）回文结构 CCTAGG切口 ： 平端切口 - 平末端粘端切口 - 粘性末端【同功异源酶： 来源不同的限制酶，能识别和切割同一位点。 同尾酶： 有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相同，但切割DNA后产生相同的粘性末端】例如: 淀粉液化芽胞杆菌 （Bacillus amyloliguefaciens）H株 第1种限制性内切酶，命名为Bam H25以mRNA为模板合成cDNA的酶是（RTPCR内容）逆转录酶法DNA测序时ddNTP（双脱氧核苷酸，少一个羟基）的作用是ddNTPs 是反应终止剂，

9、可以当作正常碱基参与复制，一旦链入DNA中，其后就不能再继续连接。27Southern印迹法的步骤有待测核酸样品的制备琼脂糖凝胶电泳分离待测DNA样品电泳凝胶预处理转膜探针标记预杂交Southern杂交洗膜放射性自显影检测芯片技术的本质核酸分子杂交技术29.影响限制性内切酶活性的物质有乙醇、EDTA、SDS、酚、氯仿和Mg2+等某些高浓度金属离子,均会降低限制酶的催化活性,甚至使限制酶不起作用. 30.大肠杆菌（原核生物）基因组的特点DNA较小；基因数目较少；通常为一条环状双链DNA（dsDNA）；只有一个DNA复制起始点；GC含量差异很大；基因组DNA位于细胞中央的核区，无核膜，形成类核结构

10、；结构基因中无内含子；多数为单拷贝基因，编码rRNA、tRNA的基因为多拷贝；具有编码同功酶的基因。31.乙肝病毒（病毒）基因组特点分子较小，基因数少；双链DNA病毒（逆转录：是一类特殊类型的单链正链RNA病毒，含有RNA指导的DNA聚合酶，能使RNA反转录生成DNA。）【每种病毒只含一种核酸（RNA或DNA），可为双链或单链、环状或线性】基因组中有基因重叠现象；有操纵子结构和相关基因丛集；少或无重复序列；基因组中编码序列占90%以上；含有不规则结构基因。32检测目标是RNA的杂交技术是Northern印迹杂交32.检测目标是DNA的杂交技术是Southern印迹杂交、反向点杂交（RDB）、原

11、位杂交33.细胞内寿命最短的RNA是mRNA34.细胞内含量最多的RNA是rRNA35.细胞内具有调控功能的RNA是miRNA37.PCR结果电泳图的阅读，各个条带分别代表的意义哪些是marker, 哪些是有效条带38.哪些是非特异扩增哪些是引物二聚体产生这些条带的原因1DNA模板浓度过高 引物浓度过高，形成引物二聚体 Taq DNA聚合酶酶量过多 dNTP浓度过高 Mg2+浓度过高 退火温度过低 延伸时间过长C+G碱基含量在引物中比例过高2【引物二聚体是在PCR反应中，两条引物上的互补碱基相结合形成的聚合体，这种聚合体出现了，就相当于原本可以扩增的原料链减少了，即会导致扩增的效率降低。】其中

12、很重要的一个就是引物自身的原因，也就是设计的引物特异性不好，不能有效的和模板进行结合，而出现引物自身配对结合的情况其次还可能是PCR体系及反应条件的问题，如果PCR体系中引物、镁离子以及酶浓度过高，模板量过低，退火时间过长等，都容易产生二聚体39.根据碱基互补原则计算DNA中ATGC各种的含量40.和人类线粒体基因组有关的疾病有哪些（了解）耳聋，糖尿病链的合成方向5 342.抑癌基因的作用（存在于正常细胞内的一类可抑制细胞过度生长与增殖的基因，从而有潜在抑癌作用，当这类基因发生突变、缺失或失活时，可引起细胞恶性转化而导致肿瘤的发生。）1诱导终末分化2维持基因稳定3触发衰老，诱导细胞程序性死亡4

13、抑制蛋白酶活性或改变DNA甲基化酶活性5调节血管形成6促进细胞间联系43.参与原核生物转录终止的因子是因子【原核生物转录的终止有两种主要机制.一种机制是需要蛋白质因子（Rho）的参与,称为依赖因子(factor)的转录终止机制,另一种机制是在离体系统中观察到,纯化的RNA聚合酶不需要其他蛋白质因子参与,可使转录终止,称为不依赖因子的转录终止机制.】44.原核生物DNA聚合酶具有的酶活性有主要用于修复DNA5 3聚合酶活性与延伸能力3 5外切酶活性与校对功能（保真性）5 3外切酶活性与切口平移45.编码血红蛋白链第六位谷氨酸的密码由GAG突变为GTG所引起的血红蛋白病为镰刀状红细胞贫血46.PC

14、R反应中的污染最主要的来自于污染主要来自于：扩增产物的污染（为最主要的来源）、试剂及器材污染、标本间的交叉污染、实验人员的污染等。【污染是导致PCR假阳性的主要原因。】47.翻译的基本方式（基本过程/进位、转钛、移位）成为什么循环核糖体循环48.核酸的分离与纯化的步骤有哪些第一步是什么1核酸的释放2核酸的纯化3核酸的浓缩和沉淀4核酸的鉴定与贮存49.基因诊断的方法对感染性疾病进行诊断的主要优点是快速、灵敏、特异等优点50.原核生物DNA聚合酶具有的酶活性有5 3聚合酶活性与延伸能力3 5外切酶活性与校对功能（保真性）5 3外切酶活性与切口平移51.影响融解温度（Tm值）的因素/影响DNA变性的

15、因素有1Tm值取决于核酸分子的G-C含量2温度；溶液PH值；变性剂（如尿素、酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等）52.基因诊断的间接诊断策略中的不确定性的原因是遗传标志所带的信息有限新突变基因重组家系成员不够完整53.在基因组DNA的提取过程中为了保护DNA一级结构的完整性而应该采取的措施有苯酚的使用：（1）使用还原酚：氧化酚可使DNA断裂。重蒸酚并加入8-羟基喹啉（2）使用水饱和酚：酚可溶解510%水，从而溶解一定的核酸。用Tris-HCl缓冲液饱和酚并调节酚的pH。异戊醇的使用：在苯酚/氯仿抽提过程中加入异戊醇，使苯酚氯仿异戊醇=25241，异戊醇可减少抽提时产生泡沫，利于有机相与水相的分离。54.检测基因点突变的检测方法有PCR-RFLPPCR-ASOPCR-SSCPDGGE(变性梯度凝胶电泳)融点曲线分析PCR-序列分析55.探针的全程标记的方法有缺口平移法；随机引物法；化学法全程；全程RNA探针标记