API含量测定验证方案1.docx

1、API含量测定验证方案1API含量测定验证方案1CCC制药有限公司验证方案起草、审核、批准表起草部门起草人职称职务日期质检部审核部门审核人职称职务日期质保部批准人签名日期质量副总经理打算验证时刻2008年9月验证小组人员名单组长姓名部门职务1、概述52、试验所需仪器53、试剂和样品54、色谱条件55、溶液配制56、专属性试验67、溶液稳固性试验68、线性试验79、回收试验710、周密度试验811、检出限和定量限912、含量测定方法评判101、概述通过对API含量测定方法的验证，得到可信任的和准确的数据，用于药品的含量测定，从而验证该方法的可行性。2、试验所需仪器分析天平（灵敏度为 0.01mg

2、 ）型号 编号 有效期液相色谱仪 型号 编号 有效期3、试剂和样品乙腈 HPLC级API标准品 USP标准品API有关物质A USP标准品有关物质B USP标准品有关物质C USP标准品4、色谱条件色谱柱： 4.6mm10cm C8 柱，其填料粒径为3.5微米检测波长：254nm流速：1.0 ml/min进样量：20l柱温：40流淌相：A溶液和B溶液不同比例的混合溶液。（见下表）其中， 稀释液水：乙腈（60：40） A溶液水：乙腈（70：30） B溶液水：乙腈（50：50）时刻（分钟）A溶液B溶液洗脱方式0-6.510050050线性梯度6.5-1050050100线性梯度10-200100衡

3、梯度20-20.101001000线性梯度20.1-281000衡梯度5、溶液配制系统习惯性溶液：取API标准品和API有关物质A和有关物质B标准品，周密称定，用稀释液配制成0.05mg/ml的溶液。标准溶液：取适量API标准品，用乙腈溶解，超声处理，得到1.0mg/ml的溶液。 取4ml该溶液置于10ml容量瓶中，用水稀释至刻度。用稀释液进一步稀释，即得浓度为0.04mg/ml的溶液。供试溶液：取本品约20mg，置于50ml容量瓶中，周密称定，用20ml乙腈溶解（能够超声处理），然后用水稀释至刻度。吸取1ml此种溶液置于10ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀即得。6、专属性试验取系统习惯

4、性溶液注入色谱系统，记谱色谱图，API有关物质B（离API峰最近的杂质峰）与API峰的分离度应不小于1.5，各杂质峰分离良好，同时取稀释液作空白溶液，注入色谱系统，记谱色谱图，在API出峰处无干扰峰显现。同时与API降解试验结果对比，各降解产物峰在API峰处无干扰，不阻碍API测定。7、溶液稳固性试验取本品约20mg，置于50ml容量瓶中，周密称定，用20ml乙腈溶解（能够超声处理），然后用水稀释至刻度。吸取1ml此种溶液置于10ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀即得制成供试品溶液。取供试品溶液分别于0小时，2小时，4小时，6小时，8小时注入色谱系统，记谱色谱图，记录API峰面积，8小时内

5、API峰面积的相对标准偏差（RSD%）不大于2.0%。时刻(h)02468RSD（%）API峰面积8、线性试验200%标准贮备溶液：取API标准品20mg，周密称定，置50ml容量瓶中，用20ml乙腈溶解（能够超声处理），然后用水稀释至刻度。周密吸取10ml此种溶液置于50ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀即得浓度为0.08mg/ml的200%的标准贮备溶液。160%标准溶液：周密移取8.0ml的200%标准储备溶液置10ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，混匀即得。120%标准溶液：周密移取6.0ml的200%标准储备溶液置10ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，混匀即得。100%标准溶液：

6、周密移取5.0ml的200%标准储备溶液置10ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，混匀即得。80%标准溶液：周密移取4.0ml的200%标准储备溶液置10ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，混匀即得。40%标准溶液：周密移取2.0ml的200%标准储备溶液置10ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，混匀即得。20%标准溶液：周密移取1.0ml的200%标准储备溶液置10ml容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，混匀即得。分别取上述线性供试品溶液注入液相色谱仪，记录API峰面积，以API的峰面积对其浓度进行一元线性回来，其有关系数（R）不小于0.999。线性溶液20%40%80%100%120%160%200%

7、浓度（mg/ml）0.0080.0160.0320.040.0480.0640.08峰面积线性方程Y=ax+b有关系数r2=r=9、回收试验（标准加入法） 标准溶液：按方法要求制备供试品溶液：按方法要求制备120%加标供试品溶液：以线性试验中120%的标准溶液替代稀释液配制供试品溶液，平行制备三份。100%加标供试品溶液：以线性试验中100%的标准溶液替代稀释液配制供试品溶液，平行制备三份。80%加标供试品溶液：以线性试验中80%的标准溶液替代稀释液配制供试品溶液，平行制备三份。测试法：分别吸取上述配制好的溶液，按前述色谱条件进样，记录API峰面积，按下式运算回收率，要求回收率在98%102%

8、范畴内，9个回收率的RSD%应不大于2.0%。供试品样品号1平均值峰面积100%标准溶液样品号123456平均值峰面积80%加标供试品样品号123峰面积回收率%100%加标供试品样品号123峰面积回收率%120%加标供试品样品号123峰面积回收率%回收率的RSD%10、周密度试验（系统周密度，重复性和方法中间周密度试验）方法重复性-1：第一天（不同人或不同仪器），按5中供试品配制方法，平行配制六份样品，按含量测试法进行测定，六份样品检测结果的相对标准偏差（RSD）不大于2.0%。方法重复性-2：翌日（不同人或不同仪器），按5中供试品配制方法，平行配制六份样品，按含量测试法进行测定，六份样品检测

9、结果的相对标准偏差（RSD）不大于2.0%。每次新奇配制标准溶液和供试品溶液。方法中间周密度：两次方法重复性的12个结果的RSD%应不大于3.0%。系统周密度：两次方法重复性试验的标准溶液的6次重复进样峰面积的RSD%应不大于2.0%。标准溶液重复进样结果样品份数n123456平均值RSD%系统周密度-1系统周密度-2含量%样品份数n123456平均值RSD%方法重复性-1方法重复性-2中间周密度11、检出限和定量限对线性溶液中20%的标准溶液的S/N进行评判，定量限S/N应不小于10，检出限S/N应不小于3。 式中：CDL检出限（g/ml） CQL定量限（g/ml）C样品浓度（g/ml）S/

10、N信噪比123信噪比定量限保证浓度检出限保证12、含量测定方法评判附：我们的有关提咨询： 1、上面5中标准溶液的配制是直截了当从USP31中翻译过来的，但我们觉得那种讲法专门繁琐，同时标准溶液和样品溶液配制方法不一致，我们觉得直截了当按它的供试品溶液配制方法配制标准品挺好的，后面验证时我们也是就按供试品溶液配制法配的标准溶液。不知是否妥当，请你们参考一下。有关物质验证时也涉及到那个咨询题。2、含量方法中间周密度12个数据的RSD%多少合适，有关物质呢？我们往常做国内只做过6个数据的评判。3、原料药的回收试验如何做啊，请指点一下。上面我们是按你们给我们残留溶剂的方案套用过来的。我们往常做国内一样都不做原料药的回收试验，而是直截了当从周密度等其他验证项目中推论而得。我们只做过制剂的向空白辅料里加原料的回收试验。4、我们的含量和有关物质差不多上按USP31方法做的，是不是实际上只需做周密度，溶液稳固性，专属性，降解试验就能够了?5、我们看了一下Q2A，含量测定时是不是不需做检出限和定量限？6、在上面的含量方案里我们把所有验证内容都理出来了，依旧请你们一一给我们批阅一下，把你们的建议给我们提出来。专门的感谢！