高效液相色谱常见问题与解决方法汇总Word下载.docx

1、7、修理或更换控制器8、保护柱阻塞8、清洗或更换保护柱9、在线过滤器阻塞9、清洗或更换在线过滤器D、压力持续偏低1、流速设定过低1、调整流速2、系统漏液2、确定漏液位置并维修3、色谱柱选择不当3、选择恰当的色谱柱4、柱温过高4、降低温度5、控制器失常5、维修或更换控制器E、压力不断上升1、见列表CF、压力降为零1、见列表A、BG、压力不断下降，但不回零1、见列表DH、压力波动1、泵中有气体1、a、溶剂脱气 b、从泵中除去气体2、单向阀损坏2、更换单向阀3、泵密封损坏3、更换泵密封4、脱气不充分4、a、溶剂脱气b、改变脱气方法（使用在线脱气法等）5、系统漏液5、确定漏液位置并维修6、使用梯度洗脱

2、6、由于流动相粘度的变化引起的压力波动2 漏液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题，就必须将接头取下，检查是否损坏（例如，卡套损坏、密封表面有杂质）；损坏的接头应该更换掉。A、接头处漏液1、接头松动1、拧紧2、接头磨损2、更换3、接头过紧3、a、拧松，再重新拧紧b、更换4、接头被污染4、a、拆下清洗5、部件不匹配5、使用同一品牌的配件泵漏液1、单向阀松动1、a、拧紧单向阀（不必拧的过紧）b、更换单向阀2、接头松动2、拧紧接头（不必拧的过紧）3、混合器密封损坏3、a、更换混合器密封b、更

3、换混合器4、泵密封损坏4、维修或更换泵密封件5、压力传感器损坏5、维修或更换压力传感器6、脉冲阻尼器损坏6、更换脉冲阻尼器7、比例阀损坏7、a、检查隔膜，如果漏液立即更换b、检查手紧接头，损坏的立即更换8、放空阀的损坏8、a、拧紧放空阀b、更换放空阀进样阀漏液1、转子密封损坏1、重新安装或更换进样阀2、定量环阻塞2、更换定量环3、进样口密封松动3、调整4、进样针头尺寸不合适4、使用恰当的进样针5、废液管中产生虹吸5、保持废液管高于废液液面6、废液管阻塞6、更换或疏通废液管D、色谱柱漏液1、尾端接头松动1、拧紧接头2、卡套内有填料2、拆下、清洗卡套、重新安装3、筛板厚度不合适3、使用合适的筛板（

4、参考下表）筛板选择指导物质粒径筛板孔径3-4u0.5u5-20u2uE、检测器漏液1、流通池垫片损坏1、a、避免过大的背景压力（压力降）b、更换垫片2、流通池窗破碎2、更换窗口3、手紧接头漏液3、拧紧或更换4、废液管阻塞4、更换废液管5、流通池阻塞5、重新安装或更换3 液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。A、峰拖尾1、筛板阻塞1、a、反冲色谱柱b、更换进口筛板c、更换色谱柱2、色谱柱塌陷2、填充色谱柱3、干扰峰3、a、使用更长的色谱柱b、改变流动相或更

5、换色谱柱4、流动相PH选择错误4、调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰5、样品与填料表面的溶化点发生反应图5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂b、更改色谱柱峰前延1、柱温低1、升高柱温2、样品溶剂选择不恰当2、使用流动相作为样品溶剂3、样品过载3、降低样品含量4、色谱柱损坏4、见A1、A2峰分叉1、保护柱或分析柱污染1、取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。2、样品溶剂不溶于流动相2、改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为

6、样品溶剂。峰变形1、样品过载1、减少样品载量早出的峰变形1、样品溶剂选择不恰当1、a、减少进样体积b、运用低极性样品溶剂F、早出的峰拖尾程度大于晚出的峰1、柱外效应1、a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）b、使用小体积的流通池G、K增加时，脱尾更严重1、二级保留效应，反相模式1、a、加入三乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品）d、更换一支柱子2、二级保留效应，正相模式2、a、加入三乙胺（或碱性样品）c、加入水（或多官能团化合物）d、试用另一种方法3、二级保留效应，离子对3、加入三乙胺（或碱性样品）H、酸性或碱性化合物的峰拖尾1、缓冲不合适1、a、

7、使用浓度50-100mM的缓冲液b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液I、额外的峰1、样品中有其他组份1、正常2、前一次进样的洗脱峰2、a、增加运行时间或梯度斜率b、提高流速3、空位或鬼峰3、a、检查流动相是否纯净b、使用流动相作为样品溶剂c、减少进样体积J、保留时间波动1、温控不当1、调好柱温2、流动相组分变化2、防止变化（蒸发、反应等）3、色谱柱没有平衡3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱K、保留时间不断变化1、流速变化1、重新设定流速2、泵中有气泡2、从泵中除去气泡3、流动相选择不恰当3、a、更换合适的流动相b、选择合适的混合流动相L、基线漂移1、柱温波动。（即使是很小的温度变化

8、都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。）1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器2、流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。3、流通池被污染或有气体3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用盐酸）4、检测器出口阻塞。（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）4、取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。5、流动相配比不当或流速变化5、更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相

9、组成及流速。6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时6、用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成7、检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂8、样品中有强保留的物质（高K值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。8、使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。9、使用循环溶剂，但检测器未调整。9、重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。10、检测器没有设定在最大吸收波长处。10、将波长调整至最大吸收波长处M、基线噪音（规则的）1、在流动

10、相、检测器或泵中有空气1、流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。2、漏液2、见第三部分。检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。3、流动相混合不完全3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）4、减少差异或加上热交换器5、在同一条线上有其他电子设备5、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。6、泵振动6、在系统中加入脉冲阻尼器N、基线噪音（不规则的）1、漏液图1、见第三部分。检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液。2、流动相污染、变

11、质或由低质溶剂配成2、检查流动相的组成。3、流动相各溶剂不相溶3、选择互溶的流动相4、检测器/记录仪电子元件的问题4、断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。5、系统内有气泡5、用强极性溶液清洗系统6、检测器内有气泡6、清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器7、流通池污染（即使是极少的污染物也会产生噪音。7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池8、检测器灯能量不足8、更换灯9、色谱柱填料流失或阻塞9、更换色谱柱10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常10、维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置O、宽峰1、流动相组成变化1、重新制备新的流动相2、流动相流速太低2、调节流速

12、3、漏液（特别是在柱子和检测器之间）3、见section3。检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。4、检测器设定不正确4、调整设定5、柱外效应影响a、柱子过载b、检测器对反应时间或池体积响应过大c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大d、记录仪响应时间太长图5、a、小体积进样（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀释样品b、减少响应时间或使用更小的流通池c、使用内径为0.007-0.01的短管路d、减少响应时间6、缓冲液浓度太低6、增加浓度7、保护柱污染或失效7、更换保护柱8、色谱柱污染或失效，塔板数较低8、更换同样类型的色谱

13、柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。9、柱入口塌陷9、打开柱入口，填补塌陷或更换柱子10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰10、选择其它类型的色谱柱以改善分离效果11、柱温过低11、提高柱温。除非特殊情况，温度不宜超过7512、检测器时间常数太大12、使用较小的时间常数P、分离度降低1、流动相污染或变质（引起保留时间变化）1、重新配置流动相2、保护柱或分析柱阻塞2、去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞，可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏，建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。

14、Q、所有的峰面积都太小1、检测器衰减设定过高1、减少衰减的设定2、检测器时间常数设定太大2、设定较小的时间常数3、进样量太少3、增大进样量4、记录仪连接不当4、使用正确的连接R、所有的峰面积都太大1、检测器衰减设定过低1、采取较大的衰减2、进样过多2、减少进样量3、记录仪连接不正确3、正确连接记录仪4以下问题在使用进样阀过程中有可能发生。手动进样阀，转动不灵1、更换或调整转子密封2、转子太紧2、调整转子的松紧度手动进样阀，载样困难1、进样阀安装不当1、重新安装2、清洗或更换定量环3、进样器污染3、清洗或更换进样器4、管路阻塞4、清洗或更换管路自动进样阀，不能转动1、无压力（或电源）1、提供恰当

15、的压力（电源）3、进样阀安装不当3、重新安装自动进样阀，其它问题1、阻塞1、清洗或更换阻塞部件2、机械故障2、见随机维修手册3、控制器故障3、维修或更换控制器5由气味、景象和声音可以发现的问题，你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。你最好养成习惯，每天花上几分钟运用你的感官（除了味觉）来“感觉”你的液相色谱是否存在问题，这样可以帮助你迅速找到问题所在。例如：在你看到漏液之前，你可能首先闻到它的气味。大部分的问题是可以通过眼睛看到。溶剂的气味1、漏液1、见section32、溅出2、a、检查废液瓶是否已满b、找到溅出的部位并清洗干净热气味1、仪器过热1、a、检查并调节通风设施b、检查并调节

16、温度设定c、关掉仪器，查找维修手册读数不正常1、压力不正常1、见section22、柱温箱问题2、a、检查并调节设定b、参照用户手册3、检测器灯失效3、更换灯灯警告1、压力超出极限值1、a、检查是否阻塞b、检查并调节极限值的设定2、其它警示灯2、见用户手册警告音1、溶剂泄漏/溅出1、找到并解决2、其它警告音刺耳的短音或长音1、轴承失效1、见用户手册2、润滑不够2、进行恰当的润滑3、机械故障3、见用户手册6常见故障及日常维护下表中列出了液相色谱常见的一些问题，右侧中则列出的日常维护的方法可以减少问题出现的频率。括号中的数字是建议进行维护的时间间隔。用户手册则提供您更多的维护方法。溶剂瓶问题维护1、进口筛板阻塞1、a、更换（3-6个月）b、过滤流动相，0.5u滤膜2、气泡2、流动相脱气泵1、气泡1、流动相脱气2、泵密封损坏2、更换（3个月）3、单向阀损坏3、过滤流动相，运用在线过滤，准备备用单向阀进样阀1、a、不要拧的过紧b、过滤样品色谱柱1、a、过滤流动相c、运用在线过滤或保护柱2、柱头塌陷2、a、避免使用PH8的流动相（针对大部分硅胶的柱子）b、使用保护柱c、使用预柱（饱和色谱柱）检测器1、灯失效，检测器响应降低，噪音增大1、更换（6个月）或准备备用灯2、流通池有气泡2、a、保持流通池清洁b、池后使用反压抑制器c、流动相脱气一般1、腐蚀/摩擦损坏1、在不使用时保持系统缓冲液的清洁