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1、关于中药中有效成分多糖的提取药学专业毕业设计毕业论文毕 业 作 业题目 关于中药中有效成分多糖的提取 分校 医药协会电大 指导教师 学生姓名 学号 完成日期 2012年05月 关于中药中有效成分多糖的提取摘要：近年来，中药天然药物在世界范围内越来越受重视，我国是中药的发源地，中药天然药物资源丰富，在过去几十年中，有关糖的化学和生物学研究取得了长足进步，也重新唤起了药学家对这类化合物的兴趣，使得基于糖类的药物研究得到了较大发展1目前中药多糖药理作用研究比较活跃，而其分子量和分子量分布及化学结构确定成为进一步深入研究多糖特异性和构效关系以及药效机理的基础。本文归纳总结了多糖分子量和分子量分布及化学

2、结构研究的方法。以龙葵为例进行了提取、分离、纯化实验，对其糖的确定进行了分析。关键词：中药化学， 糖类，中药多糖， 分子量， 分子量分布， 化学结构，测定方法，茯苓多糖，提取，影响因素索引一中药化学中药化学是一门应用于现代化学理论和方法研究中药有效成分的学科。其内容主要是研究单味中药有效成分的提取、分离、理化性质、检识、结构测结构改造以及中药化学成分与中药制剂的关系等。本论文主要是对中药中有效成分糖类尤其是多糖的研究，对其分子量和分子量的分布及结构的测定进行分析。多糖通常是由几百甚至几千个单糖组成的高分子均聚物或共聚物，其能被水解为多个单糖。多糖存在于植物和动物之中，在高等植物和藻类中，它们是

3、细胞壁或细胞内部的组分；在细菌和真菌中，它们可能既是细胞组分，又是新陈代谢的产物。多糖分子量很大，其性质也大大不同于单糖和低聚糖。现代研究发现茯苓、黄芪、猪苓、枸杞、柴胡、人参、香菇、云芝、银耳、灵芝、冬虫夏草等中药其生物活性成分之一是多糖，具有免疫调节、抗辐射、抗凝血、降血糖、降血脂等功效，而它们的生理活性与多糖分子量和分子量分布及化学结构有密切关系。以龙葵为例进行了提取、分离、纯化实验，对其糖的确定进行了分析。二糖类概述糖和它的衍生物广泛分布在植物界，占构成植物有机体物质的85%-90%，它是植物光合作用的产物，是植物细胞与组织的重要营养物质和支持物质。常见的有葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、

4、菊糖、粘液质、树胶、果胶、淀粉、纤维素等，它们在普遍存在，是最常见的一类化学成分，有的可直接供药用，如蜂蜜、饴糖、葡萄糖等。中药中的糖类包括单糖、低聚糖和多聚糖类。单糖是糖的最小单位，低聚糖是含2-9个单糖分子的聚糖类，多聚糖又称多糖，是由10个以上或更多单糖分子聚合而成的高聚糖，分子量较大，已失去一般单糖的性质。重要中的多糖大致分为二类，一类为水不容物，在动、植物体内主要起支持组织作用，如植物中的半纤维素和纤维素，动物甲克中的甲壳素等。另一类为动植物体内贮藏的营养物质，如淀粉、菊糖、粘液质、果胶、树胶等2。三中药多糖分子量和分子量分布中药多糖是生物大分子，属高分子化合物，其分子量的测定方法有

5、绝对法、当量法和相对法。表示其分子量大小的方式有重均分子量（Mw），数均分子量（Mn），粘均分子量（M）和Z均分子量（Mz）。多糖大多数情况下Mn M Mw Mz 。多糖的分子量分布是指多糖中各种不同的分子量组分在总量中所占的各自的分量，一般用分子量分布指数表示，即重均分子量与数均分子量的比值（=Mw / Mn） ，比值愈大，说明分子量分布愈宽，当1时，是分子量均一体系。对于生物大分子多糖来说，其分子链的长短可以是不同的，在衡量其分子量时，往往是一个平均数。重均分子量是按分子重量统计平均的分子量，测定方法有光散射法、超速离心沉降速度法以及凝胶渗透色谱法等。数均分子量就是依据总体分子的的个数，求

6、出分子量来的，数均分子量测定方法有端基分析法、气相渗透法、沸点升高冰点降低法、膜渗透压法、凝胶渗透色谱法等。中药多糖主要测数均分子量和重均分子量。目前常用体积排阻色谱法（包括凝胶渗透色谱法和高效凝胶渗透色谱法）测定多糖分子量和分子量分布。2005年版中国药典部中收载了用高效凝胶渗透色谱法测定多糖分子量及分子量分布方法。高效凝胶渗透色谱法它是根据在凝胶柱上不同分子量的多糖与洗脱保留时间(tR)成一定关系的特性，先用各种已知分子量的多糖制成标准曲线，然后由样品的保留时间(tR)从曲线中求得分子量。高效凝胶渗透色谱法测定多糖分子量多采用示差折光检测器，示差折光检测器是一种通用型检测器，在液相色谱检测

7、中多应用于对紫外-可见光没有吸收的化合物分析，只要被检测的化合物的折光指数与液相溶剂体系有差别即可被检测。高效凝胶渗透色谱中主要使用的是刚性凝胶柱，包括高交联度(40)苯乙烯-二乙烯基苯共聚物微球，常用的商品型号为TSK-Gel、Progel-TSKH-Type柱等；多孔球形硅胶，常用的商品型号为T5K- SW柱等；羟基化聚醚多孔微球，常用的商品型号为TSK -PW等。6采用色谱柱为TSK-G4000PWXL(7.8 mm30.0 cm),示差折光检测器，分析测定了13 批样品，得到四维灵芝液中多糖组分高效凝胶色谱图谱、多糖组分平均分子量。采用色谱OHPakSB-805HQ(8 mm300 m

8、m)，示差折光器检测器，测得红毛五加多糖各组分的重均分子量。采用色谱柱为TSK-GELG3000PWxl,测定云芝多糖的重均分子量、数均分子量及分子量分布指数。应用SUGAR KS-804色谱柱，示差折光器检测器，测定宁夏黄芪多糖重均分子量、数均分子量及分子量分布指数。用凝胶色谱分析柱为Ohpak SB-805HQC(300 mm8 mm), 示差折光器检测器，测定了香菇多糖的平均分子量。四以龙葵为例简述其糖的组成1 龙葵简介龙葵（Solanum nigrumL.）为茄科植物龙葵的全草，是我国传统的中草药。现代药学研究表明，龙葵中含有多种类型的化学成分，有抗肿瘤、抗炎、抗过敏、抗菌、解热镇痛等

9、药理作用。龙葵广泛分布于世界温带和热带 地区，在我国也遍布各地，来源广泛，药材资源丰富，且加工简单，不需要炮制，应用方便，疗效显著，毒副作用小。2实验步骤（1）提取和分离 将采集的龙葵多糖鲜样切碎后，用95%乙醇浸泡2个月，晒干。取干燥的龙葵1kg，加10kg蒸馏水。沸水浴中加热6h，共2次。过滤，浓缩至850ml，在浓缩液中加入850ml95%乙醇，离心，干燥，得棕色固体A（7.6g）。（2）纯化 除蛋白质和其他杂质 取固体A2g，加水溶解，采取Sevag法除蛋白质，然后经反复溶解，醇析，得固体B0.8g。DEAE-纤维素柱层析 上样量为固体B0.8g，上样体积为16.2ml，以1mollN

10、aCl为上限溶液进行梯度洗脱。出现5个峰，其中2、5为主峰。分别收集2和5峰，浓缩后用无水乙醇沉淀，干燥，得SNL-1 180mg、SNL-2 264mg。凝胶G-100柱色谱 SNL-1、SNL-2的上样量和上样体积分别为180mg、264mg和6ml、8ml.以蒸馏水进行洗脱，收集其中单峰区域部分，浓缩后，加入无水乙醇，沉淀干燥。得SNL-1 12mg、SNL-2 18mg。3糖的组成确定完全水解 称多糖SNL-1 5.6mg、SNL-2 18mg，分别加入1.3135molLH2SO40.5ml和1.0ml，充氮气除氧封管，均于100度水解8h.水解液用碳酸钡中和，过滤，上HPLC定量分

11、析单糖含量，测定结果见表：多糖完全水解液分析结果标准品保留时间/minSNL-1保留时间/minSNL-2保留时间/minL-鼠李糖D-木糖L-阿拉伯糖D-甘露糖D-葡萄糖D-半乳糖4，404.9755.3336.1926.0486.74212334.4174.9225.3176.39212345.4836.3484实验讨论由表可知，SNL-1由L-鼠李糖、D-木糖、L-阿拉伯糖和 D-葡萄糖组成，摩尔比为4.9：1：2.9：13；SNL-2由D-葡萄糖、L-阿拉伯糖组成，摩尔比为13.3：1。SNL-1和SNL-2均以葡萄糖残基为主连接而成。从龙葵的水提取液中分离得到两种多糖SNL-1、SN

12、L-2，分别经比旋光度法、凝胶色谱法分析，证实均为单一组分。 五结论中药能统筹兼顾，从整体综合调节，使人体达到一个平衡，在预防、保健、慢性病康复等方面有独到的功效，也应努力发挥其所长，中药的科学运用离不开仪器等先进手段。通过对中药多糖的分子量和结构的研究，对多糖这一高分子化合物有了进一步了解。多糖分子量的研究是其性质研究的一项重要工作，在糖的分子量和分子量的分布研究中能够对对GPC和 HPGPC的操作提高认识；而在结构的测定中，有这些科学的方法，更细致、更科学的对多糖进行分子和结构方面的研究，不仅对其研究的原理、方法理解的更透彻，而且对仪器的运用也熟练了很多。多糖类化合物广泛存在于动物细胞膜和

13、植物、微生物的细胞壁中，是由醛基和酮基通过苷键连接的高分子聚合物，也是构成生命的四大基本物质之一。通过本论文的多糖的结构的研究，进一步知道多糖的性质，进而得到多糖的生物活性和一些基本功能。通过对龙葵多糖提取、分离、纯化的操作和研究，使我对于实验的操作有了一定的提高，对于实验的后处理更加熟练，这也正是和我的工作相联系的地方。确定了其糖的组成对于了解其药理作用有很大的帮助。近年来对于龙葵的研究主要集中在其抗肿瘤的作用上，龙葵糖蛋白（150103）可通过阻断NF-抗凋亡路先、激活caspase级联反应及促进NO的释放促进肿瘤细胞的凋亡。研究表明，核转录因子（NF-）是细胞存活相关基因,可抑制细胞凋亡

14、。在临床应用中龙葵多与其他抗癌药物合用，在治疗原发性肝癌的研究中，治疗组在恢复肝细胞功能，提高中位生存期均有重要作用。【参考文献】1彭司勋，等 药物化学进展 化学工业出版社，2003；2唐得时，等 中药化学 人民卫生出版社，1986； 3孙庆胜，蒋 滢.南瓜多糖的提取纯化及其分析J.济宁医学院学报，1999，22(4):374陈洪亮，李德发，常碧影，等.芦荟多糖的提取及结构分析J.兽药与饲料添加剂，2002，7(2):1.5盖英萍，牟志美，冀宪领，等.桑叶多糖的提取与分析J.蚕业科学，2005，31(1):31.6戴敬，鲁静，刘文英，等.高效凝胶色谱法测定四维灵芝液中多糖组分的分子量J.药物分析杂志，2003，23(3):204.7郭辉，张红旭，王慧，等.用高效凝胶色谱法测定红毛五加多糖组分的分子量J.中国药师，2005，8(7):551.8姜素琴，姜雄平.高效凝胶色谱法测定云芝多糖的分子量及其分布J.江苏药学与临床研究，2002，10（2）：17. . .