常用培养基及添加剂的配制.docx

1、常用培养基及添加剂的配制1牛心脑浸汁-辅助琼脂：（BHI-S）BHI 琼脂 100mL氯化血红素-维生素K1 1mL脱纤维蛋白血（兔血） 5-10mL2 胰蛋白水解物-大豆琼脂（TS）胰蛋白水解物 （或胰蛋白胨） 1.5g大豆胨 0.5gNacl 0.5g酵母提取物 0.5g盐酸半胱氨酸液 0.4mL琼脂 2.0g蒸馏水加至 100mL3Gifu厌氧培养基：（GAM）胰蛋白胨 1.0g大豆胨 0.3g多价蛋白胨 1.0g酵母提取物 0.5g肝浸汁 10mLVPI盐溶液 0.2g牛肉浸膏 5mL盐酸半胱氨酸 0.4mL旈基乙醇酸钠 0.03g葡萄糖 1.0g琼脂 1.8-2.0g刃天青 （0.1

2、%） 0.5g蒸馏水加至 100mL4Rogosa 乳杆菌选择培养基（LS）胰蛋白水解物 （或胰蛋白胨） 2.0g酵母提取物 1.0g琼脂 4g葡萄糖 4.0g (储存液)磷酸二氢钾 1.2g 12g枸橼酸三铵 0.4g 4g硫酸镁（MgSo4 7H2O） 1.0g 10g硫酸锰（MnSo4 4H2O） 0.4g 4g硫酸亚铁（FeSo4 7H2O） 0.08g 0.8g醋酸钠（CH3COONa 3H2O）(乙酸钠) 5g 50g冰乙酸（99.5%） 0.264mL 2.64mL聚山梨酯 -80 0.2g 2gDH2O 200mL 200mL（每100mL培养基加10mL）5TPY培养基胰蛋白

3、胨 3.0g酵母提取物 0.8g葡萄糖 2.0g磷酸二氢钾 1.2gK2HPO4 3H2O 0.4gNaCO3 0.4gNaCl 0.4gDH2O 200mL琼脂 2.5g /200mL6普通血琼脂培养基 （BA）牛肉浸膏 （0.5-1.0）g蛋白胨 1.0gNaCl 0.5gK2HPO4 2.0g酵母提取物 0.5g葡萄糖 1.0g琼脂 1.8g蒸馏水加至 100mL7轻唾培养基（MS）胰蛋白胨 1.0g示胨 0.5g蔗糖 3-5g（可根据需要将蔗糖量增至20g）葡萄糖 0.1gK2HPO4 3H2O 0.53g琼脂 2.0g0.1%曲利本蓝 7.5mL0.1%结晶紫 0.8mL蒸馏水加至

4、100mL8轻唾-杆菌肽琼脂（MSB）MS琼脂 （蔗糖含量为20%） 100mL杆菌肽溶液（200U/mL） 0.1mL灭菌MS琼脂50左右时加入杆菌肽溶液，混匀倒板9轻唾-磺胺二甲嘧啶琼脂（MS磺胺琼脂）MS琼脂 100mL*磺胺二甲嘧啶（5%） 1.0mL*1%的亚碲酸钾溶液 0.28mL灭菌MS琼脂冷却至25时加入*10TYCSB琼脂胰蛋白酶水解物 1.0g酵母提取物 0.5g盐酸半胱氨酸溶液 0.4gK2HPO4 3H2O 0.53g蔗糖 20g琼脂 2gDH2O 100mL灭菌后冷却至 50-55时加入杆菌肽溶液 （200U/mL）0.1mL,混匀倒板11Rogosa 乳杆菌选择培养

5、基（LS）胰蛋白水解物 （或胰蛋白胨） 1.0g酵母提取物 0.5g磷酸二氢钾 0.6g枸橼酸三铵 0.2g葡萄糖 2.0g 硫酸镁（MgSo4 7H2O） 0.5g 硫酸锰（MnSo4 4H2O） 0.2g 硫酸亚铁（FeSo4 7H2O） 0.04g 醋酸钠（CH3COONa 3H2O）(乙酸钠) 2.5g 冰乙酸（99.5%） 0.132mL 聚山梨酯 -80 0.1g 琼脂 1.8gDH2O 100mL LS盐溶液的组成：MgSo4 7H2O 5.57gMnSo4 2H2O 1.20gFeSo4 7H2O 0.34gDH2O 50 mL混合上述成分并加热使之溶解。高压（121）灭菌15

6、分钟备用。100mL乳杆菌选择培养集中加入0.5mL LS盐溶液即可12放线菌分离和富集培养基：1） Beigheor-CoIman 培养基：（FC）BHI 基础培养基 100mL聚乙烯吡咯烷酮 1.0g盐酸半胱氨酸 0.4mL琼脂 1.8g灭菌冷却至50左右加入无菌氟化钠溶液（25g/L）1mL,硫酸粘菌素溶液（1g/L）0.5mL，无菌马血清5mL,混匀倒板2） 明胶-甲硝唑-硫酸铬选择培养基（GMS）营养明胶琼脂 100mL硫酸铬（CdSO4 8H2O）溶液（2g/l） 1.0mL甲硝唑（1g/l） 1.0mL将上述成分（除甲硝唑外）混合并加热使之溶解，高压（121）灭菌15min,待冷

7、却至50左右加入无菌甲硝唑溶液1mL,混合均匀后倾注于平板。3） Tarozzi肉汤培养基牛肉浸汁 50mL蛋白胨 1.2gNacL 0.3gK2HPO4 0.2g混合上述成分并补充蒸馏水（加热至80左右）至100mL,煮沸10min,冷却后校正PH值为7.5，用罗素暗管（15mm*150mm分装，每管8mL,然后加入0.1%的硫基乙醇酸钠溶液2mL和新鲜的豚鼠或牛肝切割片（2cm1cm 1cm 大小并经盐水洗净）。最后将装有上述物质的螺旋管高压（121）灭菌15min后备用13韦荣球菌选择琼脂：（VS）胰蛋白酶水解物 0.5g酵母提取物 0.1g硫基乙醇酸钠 0.075g50%的乳酸钠溶液

8、（2.0-2.5）mL聚山梨酯-80 0.1g琼脂 2.0gDH2O 100mL混合上述成分并加热使之溶解，待冷却后调PH为7.8，11520min或121 15min 高压灭菌。待冷却至50-55时，加入万古霉素溶液（7.5mg/L）1mL和脱纤维兔血或马血5mL混合均匀并倾注平板备用说明：1） 不含万古霉素和琼脂的乳酸盐培养基可作为韦荣球菌的富集培养基2） 用新霉素（100mg/l）代替万古霉素加入乳酸盐琼脂中，组成韦荣球菌-新霉素琼脂，可用于分离韦荣球菌。但要注意，其它两种革兰氏阴性厌氧球菌（发酵氨基酸球菌和艾氏巨球菌）均可在此培养基上生长14拟杆菌选择琼脂（KVB琼脂）BHI琼脂 10

9、0mL氯化血红素-维生素K1溶液 1.0mL卡那霉素储存液 1.0mL万古霉素储存液 1.0mL无菌脱纤维动物血 5mL将BHI琼脂融化并冷却至50左右，加入其它几种成分混匀后倾注于平板备用说明：1） KVB琼脂还可用TS琼脂或布氏菌血琼脂作基础，配制方法同上2） 用冻融血代替脱纤维马血或兔血配制成卡那霉素-万古霉素溶血琼脂（KVL-BA），这种拟杆菌选择培养基也可用于普雷沃菌和卟啉单胞菌，并有利于产黑色素细菌落的形成3） 在KVBA琼脂和KVLBA琼脂上，除拟杆菌属细菌可生长外，二氧化碳噬纤维菌也可生长15拟杆菌胆汁七叶苷琼脂（BBE）TS琼脂或BHI琼脂 100mL牛胆盐 2g七叶咁 0.

10、1g*枸盐酸铁胺 0.05g*Hemein（5mg/mL） 0.2mL*庆大霉素溶液（40mg/mL） 0.25mL*消毒后冷却至50左右加入16梭杆菌培养基1）梭杆菌选择琼脂（FS）BHI琼脂培养基 100mLFS 添加液 1.0mL将BHI琼脂100mL加热使之融化，待冷却至55左右加入FS添加液混匀并倾注于平板FS添加液的配制：35mg结晶紫溶于越40mL蒸馏水中并加热煮沸灭菌，待冷却至50左右加入硫酸新霉素150mg,，万古霉素25mg.混匀后置冰箱内保存2） 梭杆菌选择培养基（CVE）胰蛋白胨 1.0g酵母提取物 0.2gNaCL 0.5gK2HPO4 3H2O 5g可溶性淀粉 2.

11、0g盐酸半胱氨酸 0.05g琼脂 2.0g结晶紫溶液（5mg/mL） 0.1mLDH2O 100mL17 颊纤毛菌分离鉴定培养基1） 结晶紫红霉素琼脂（CVEA）胰蛋白酶水解物 1.0g酵母提取物 0.5gNaCl 0.5g葡萄糖 0.2g色氨酸 0.02g琼脂 1.8-2.0g结晶紫溶液（5g/l） 0.1mLDH2O 100mL高压灭菌冷却至50-55，加入红霉素溶液（4g/L）0.1mL和脱纤维兔血5mL,混合后倾倒平板2） Kasai培养基胰蛋白胨 1.0g酵母提取物 0.2gNaCl 0.5gK2HPO4 3H2O 5.0g可溶性淀粉 2.0g盐酸半胱氨酸 0.05gDH2O 100

12、mL18 WFF琼脂培养基（沃林菌属鉴别培养基）胰蛋白酶水解物（BBL） 1.5g酵母提取物 0.5g丙酮酸钠 0.2g甲酸钠 0.15g琥珀酸钠 0.01g延胡索酸纳 0.015gNacL 0.5g琼脂 2.0gHemein (500mg/mL) 1.0mLDH2O 100mL19 伴放线放线杆菌选择琼脂1） TSBV琼脂TS琼脂 100mL*马血清 10mL*杆菌肽溶液（7.5g/L） 1.0mL*万古霉素溶液（0.5g/L） 1.0mL*TS琼脂高压灭菌后冷却至50-55左右加入杆菌肽溶液，万古霉素溶液和无菌马血清，混合均匀后倾注于平板2） TSMB琼脂TS琼脂 100mL*孔雀石绿溶液

13、（8g/L） 0.1mL*杆菌肽溶液（12.8gL） 1.0mL*脱纤维羊血（或马，兔血） 5.0mL*将TS琼脂高压灭菌后冷却至50-55左右加入孔雀石绿溶液，杆菌肽溶液和脱纤维血，混合后倾注平板20 克林霉素-硝酸盐（CKA）BHI琼脂 100mLKNO3溶液（200g/L） 1.0mL克林霉素溶液（50mg/L） 1.0mLHenein (500mg/L) 1.0mL注意:将BHI琼脂加热并使之融化后立即加入KNO3溶液和氯化血红素溶液混匀，待冷却至50左右时加入克林霉素溶液混匀倾注于平板21TPY培养基（双歧杆菌分离选择培养基）胰蛋白酶水解物 1.0g植物胨 0.5g葡萄糖 0.5g酵

14、母提取物 0.25g聚山梨酯-80 0.1mL盐酸半胱氨酸 0.05gK2HPO4 0.2gMgCl2 6H2O 0.05gZnSO4 7H2O 0.025gCaCl2 0.015gFecl3 微量琼脂 1.5-1.8gDH2O 100mL注意：混合上述溶液高压灭菌，PH6.5，待冷却至50-55时加入卡那霉素，新霉素和草履虫霉素22改良双歧杆菌选择琼脂 （BSA）番茄汁 20mL蛋白胨 1.5g酵母浸膏 0.6g葡萄糖 2.0g可溶性淀粉 0.05g聚山梨酯-80 0.1gNacl 0.5g琼脂 2.0gDH2O 80mL注意：混合上述溶液高压灭菌，PH6.8,待冷却至50时加入BS添加液5

15、mL.(PB配方见附录培养基常用溶液。添加液及抗生素药物溶液的配置)23优杆菌选择培养基：（改良ES）BHI琼脂 100mLES溶液 5.0mL注意：将已经高压灭菌的BHI琼脂加热融化，冷却至50左右加入ES溶液（ES配方见附录）24PSS培养基（消化链球菌分离培养基）胰蛋白胨 1.0g酵母提取物 1.0g 蔗糖 0.1gVPI盐溶液 5.0mL盐酸半胱氨酸溶液（0.kg/L） 0.4mL七叶咁 0.1gDH2O 100mL注意：混合上述成分并加热使之溶解，调PH至7.6左右，115高压灭菌15minl冷却至50左右加入马血清5.0mL,A液（0.45%叠氮纳，30%谷氨酸钠，10020min

16、灭菌）2mL及B液（吖啶橙0.01%,j结晶紫0.0065%，硫酸铵1.65%，用灭菌蒸馏水配置）2mL,混合后加入平板25沙氏葡萄糖蛋白胨琼脂（SA）葡萄糖 4.0g蛋白胨 1.0g琼脂 1.8-2.0gDH2O 100mL注意：将SA中的葡萄糖改为麦芽糖（2%），并加入氯霉素或庆大霉素40g/L-50g/L或防线线菌酮0.5g/L可作为选择琼脂26 Hayflick培养基（支原体选择培养基）牛心浸出液 100mL蛋白胨 1.0gNacl 0.5g琼脂 1.5g注意：混合上述成分并加热使之溶解，校正PH7.8-8.0,高压灭菌，冷却至80左右加入小牛血清或马血清2mL,25%的鲜酵母浸出液1mL,1%的乙酸砣0.25mL,青霉素甲盐溶液（200000U/mL）0.05mL及20%的葡萄糖溶液0.5mL(注意无菌操作)，混合均匀后倾注于平板说明：Hayflick不加琼脂即可配成液体培养基，如加入酚红水溶液（0.002%）可指示支原体是否生长，支原体利用葡萄糖产酸，其培养液变黄27PYG液体培养基（主要用于细菌代谢酸产物分析，也可作为增菌的富集培养基）胰蛋白胨 1.0g酵母提取物 1.0g葡萄糖 1.0gVPI盐溶液 4.0mLDH2O 100mL注意：如用于厌氧菌培养物需加入盐酸半胱氨酸溶液（0.5kg/L）0.1mL和0.1%刃天青溶液0.25mL