尿11项检测干化学测定的原理.docx

1、尿11项检测干化学测定的原理干化学测定的原理 干化学法尿pH检查的原理是采用酸碱指示剂法，其测试膜块区含有甲基红(pH4。66。2)和溴麝香草酚蓝(pH6.07.6)。两种酸碱指示剂适量配合可反映尿pH4.59。0的变异范围.二、干化学法检查尿pH的注意事项 (1）检测时尿标本必须新鲜,放置过久细菌分解尿液成分可导致pH改变,大多数细菌如变形等，分解尿素产生氨，可使尿液呈碱性；但在少数情况下，细菌也分解尿液成分产生酸性物质，使尿q偏酸。(2）当肾脏分泌的尿液含有过多的碳酸氢盐和碳酸缓冲对时，如果尿液放置时间过久,尿液中?氧化碳会自然扩散到空气中，使尿pH增高。3)在测定过程中,应严格按规定的时

2、间将试剂带浸泡尿液标本中，浸尿时间过长，尿pH呈减低4)在使用多项试剂带进行测定时,要认真阅读使用说明，严格按说明书进行操作，试剂带上不能浸量的尿液标本，防止试剂带相互之间的“溢出”（runover）现象，影响尿pH测定.5）尿液pH主要反映肾脏在维持血浆和细胞外液正常氢离子浓度方面的能力，而干化学法测定只4半定量的实验结果。因此在临床观察结果时，不要单从尿pH测定值分析，要结合临床其他资料驻数据,综合分析才能得出正确的判断。方法原理:干化学法尿pH检查的原理是采用酸碱指示剂法,其测试膜块区含有甲基红（pH4。66.2)和溴麝香草酚蓝(pH6。07.6）。两种酸碱指示剂适量配合可反映尿pH4。

3、59。0的变异范围。临床意义：1、尿pH检测了解体内酸碱平衡情况在代谢性酸中毒、痛风、糖尿病、肾结石、型肾小管酸中毒、白血病和坏血病时，常有强酸性尿。碱中毒及原发性醛固酮增多症、肾小管酸中毒(、型）、泌尿系变形杆菌感染时,可呈碱性尿。2、观察尿pH变化，指导临床用药，预防肾结石的形成和复发，减轻泌尿系微生物的感染研究证明，某些肾结石的形成与尿pH变化密切相关，如在尿pH降低时容易形成酸性结石;而在尿PH增加时容易形成碱性结石。因此，临床对于某些患者有形成酸性结石(如尿酸和胱氨酸结石）倾向S时如果给药使尿pH保持碱性或至少尿pH在6。5以上,就不会形成酸性结石.相反，临床对于某些患者有形成碱性结

4、石(如磷酸钙结石）倾向时，如果给药使尿pH保持酸性，也就不会形成碱性结石。此外，碱性尿可促进某些微生物的生长发育,同样使尿液呈酸性也可预防细菌的生长,减少泌尿系统的感染.尿pH检测不仅可了解体内酸碱平衡情况，还可监控尿pH变化对其他膜块区反应的干扰作用，如尿蛋白测定、尿比重检查受尿pH影响很大,因此，当尿pH明显升高或减低时，要考虑同时检测尿比重、尿蛋白结果：是否可靠或用其他方法进行检测. 。第二节 尿比重(比密)测定尿液比重（比密)(specificgravity，SG)是指尿液与纯水的重量之比,是尿中溶解物质浓度的指标。溶解于尿液中的固体物质，主要是尿素和氯化钠，前者反映食物中的蛋白质含量

5、,后者反映食物中的含盐量，在正常生理情况下,尿比重与排出的水分、盐类和尿量有关.尿比重测定可以估计肾脏浓缩功能.由于尿比重还受年龄、饮水量、出汗等因素的影响,故多次测定比单次测定更能反映肾脏浓缩功能。尿比重测定在临床使用的方法较多,如称重法、浮标法（尿比重计法)、液滴落下法、超声波法、折射仪法，于化学试剂带法，等等.由于干化学试剂带法具有简便、快速,测定尿比重不受非离子成分如葡萄扰，且同时给出多项尿液参数结果,现已广泛使用。但由于试验结果划分范围跨度大,敏感性较比学法测比重只能用于健康人及初诊病人筛选试验。根据美国NCCLS文件，折射仪法为尿比重检测的参考方法。 一、干化学法测试的原理 。干化

6、学试剂带法测定尿比重的膜块中主要含有两种成分(表32)：一种是电解质共聚体，即甲氧乙面丁烯二酸（methoxyethylenemaleic acid）共聚合体（图31）;另一种是酸碱指示剂溴麝香草酚蓝（PH6。o76)。除这两种物质外，还含有其他物质如缓冲剂等。其测试原理模式见图3-2。二、干化学法尿比重检查注意事项 （1)尿液标本必须新鲜,不能含有强碱、强酸等物质(如奎宁、嘧啶等药物)，这些物质的存在都会直接影响试剂带测定尿比重。当尿液pH70时，应该在干化学法测定结果的基础上增加0005作为由强碱尿损失的补偿.其补偿机理是:当尿液pH7o时，尿液必将存在着氢氧根离子（OH)，它的存在会中和

7、掉由尿液离子成分使电解质聚合体释放出来的氢离子(H），导致氢离子不与酸碱指示剂反应，结果偏低。在强酸性尿液时，干化学法测定尿比重结果明显偏高，但在一般情况下尿液不可能呈强酸性，所以影响不如碱性尿那么直接。表33显示不同尿pH对尿比重的影响。（2)尿比重计法、折射仪法和干化学法是采用不同的原理测定尿液比重，测定的结果必将有一定的定鲍差距，如尿液中非离子型化合物(如葡萄糖、造影剂等)，可导致比重计和折射法测定结果偏 (3)尿蛋白浓度增高时，由于蛋白分子本身是两性电解质，即本身既有电荷又有固体量，所以对三下按都有影响，以干化学法最为明显，折射仪法次之，。比重计法影响最小。教科书规定，每增加logL质

8、，折射仪法应在原测定值的基础上减去o005，比重计法碎去0003。尿蛋白干扰干化学法测定原指示剂呈现颜色而使结果偏高。表35显示不同浓度尿蛋白对尿比重的影响。(4）干化学法不宜用于新生儿尿比重检查，这可能是由于新生儿尿比重太低，仅在1002004之间的缘故。 (5)由于干化学法所测尿比重结果间隔较大,不能反映较小的比重变化,因此只能用于过高或过低汞比重病人的筛选，对于病理性特别是系统观察的病例仍以折射仪法更为理想. NCCLS建议以折射仪法作为干化学法测定尿比重的参比方法,浮标法(比重计法)测定尿比重不再使用。折射仪法可用去离子水或蒸馏水和已知浓度溶液监测其测量结果是否准确，如蒸馏水比重应为0

9、00；0513mol儿氯化钠溶液，比重应为1015；0856mol儿氯化钠溶液,比重应为1022；263mol儿蔗糖溶液，比重应为1034。 三、尿比重检查的临床意义 尿比重的参考值在10151025之间，早晨第一次尿标本的比重最高，通常1020；在多次随机尿标本中,尿比重在1025以上，提示肾浓缩功能正常。（1）尿比重的高低主要取决于肾脏的浓缩功能，它与尿内所含溶质的多少成正比，而与尿量成反比，并与尿液的颜色深浅平行.尿比重增高:表示尿液浓缩，见于急性肾炎、蛋白尿、糖尿病、高热、大量出汗、脱水、心功能不全、流行性出血热少尿期等.尿比重减低：表示肾脏浓缩机能减退，见于尿崩症、慢性肾炎、精神性多

10、饮多尿症、原发性醛固酮增多症、流行性出血热多尿期及恢复期。尿比重比较固定：尿比重变化不大，一般固定在1010左右,呈等张尿，表示肾实质有严重损害。（2)用尿比重和尿量的动态变化来监测肾结石病人的尿物理变化,可用于指导病人饮食习惯，预防病人结石的再次形成。(3)尿比重的高低不仅直接反映肾脏浓缩功能，而且还能监测全自动尿沉渣分析仪对红细胞形态析是否受尿比重的影响(尿比重偏低，可使红细胞形态由均一性向多形性转变)。第三节尿蛋白测定一测定原理尿液蛋白质的测定方法采用的是指示剂蛋白质误差法，即在一定的条件下（PH为。时），溴酚蓝产生出阴离子，与带阳离子的蛋白质（主要是白蛋白)结合发生颜色变化。二、干化学

11、法测定尿蛋白的注意事项 干化学法测定尿蛋白操作简单快速、敏感性高，但该法是利用尿蛋白与某些染料相结合而产生的歹色变化来测定蛋白含量，因此在使用中,无论用哪一种方法进行尿蛋白定性检查，都必须重视下列问题。(一)尿液pH 尿液标本必须新鲜，变质的尿液会使尿pH发生变化,或者尿液本身过酸、过碱都会影响实验结吴当病人服用奎宁、奎宁丁和嘧啶等药物时，引起尿液呈强碱尿(pH9o），超过了试剂带本身的缓冲耄力，会使干化学法出现假阳性结果；而用磺基水杨酸法和加热乙酸法作尿蛋白定性时，因尿液过碱，远熏蛋白质的等电点出现假阴性结果。鉴别方法是用稀醋酸将尿液pH调至56后再进行实验，借以区爷是否由于强碱尿而导致干化

12、学法的假阳性，或磺基水杨酸法和加热乙酸法的假阴性。同样，当尿滞pH4g24h，可见于噔兰肾小球肾炎及红斑狼疮性肾炎、肾病综合征等.以上分类是相对的，当病变同时累及肾小球及肾亏；乙低分子量、高分子量蛋白质均增多,此时动态观察24h尿蛋白量有助病程观察及疗效判断。（五)蛋白尿的选择性叫。年Blainly等首先提出了蛋白尿选择性的概念作为判断肾小球损伤严重程度的指标。选择性学法测定尿中的中分子量蛋白质和高分子量蛋白质的比值来确定的.有关选择性蛋白尿、非选择性蛋白尿及选择性蛋白尿指数（SPl)将在以下章节介绍。第四节 尿糖测定 严格地说，尿糖测定应该是尿葡萄糖测定。正常人尿内可有微量葡萄糖，尿内含糖量

13、为o565mmol24h，定性试验为阴性。尿糖定性试验常用班氏法、葡萄糖氧化酶法和干化学法. 一、干化学法测试的原理 干化学试剂带法测定尿糖的膜块中主要含有葡萄糖氧化酶、过氧化物酶和色源及其他物质。不同家采用色源有异（表313），主要有两类：采用碘化钾作色源(如美国Ames公司的Clinitek“200型采用联甲苯胺作色源(如德国宝灵曼公司的MiditronR型)。测定尿糖的原理是：膜块内葡萄糖氧化酶(GOD）作用于尿液中葡萄糖,使其形成葡萄糖醛酸和过氧化氢(H20：）,后者再被过氧化氢酶(POD）售化释放出O，后者使色源呈现不同的颜色变化。三、尿糖测定的临床意义尿糖一般是指尿液中葡萄糖而言，

14、其来源于血液中的葡萄糖.正常人肾脏的肾糖阈值是90180mgd1）。一般情况下血糖浓度相对比较恒定，空腹血糖为444666mmolL,进食必一999mmo儿,由肾小球滤过的葡萄糖几乎全部可被肾小管重吸收，只有极微量部分由尿北为056167mmol，浓度为028083mmolL，用任何常规性检查均不能测出。葡萄糖是否会出现于尿中，一是要看血糖浓度，二是要看肾小管重吸收的能力，即肾糖阈值. 尿中是否出现葡萄糖取决于三个因素:C动脉血液由葡萄糖浓度；每分钟流经肾小球的血浆量；近端肾小管上皮细胞重吸收葡萄糖的能力，即肾糖团:弩糖团可随肾小球滤过率和肾小管葡萄糖重吸收率的变化而变化.当肾小球滤过率减低时

15、，可导致肾糖阔提高；而肾小管重吸收率减少时，则可引起肾糖阈降低。葡萄糖尿除可因血糖浓度过高引起外，也可因肾小管重吸收能力降低引起，后者血糖可正常。 （一）生理性糖尿生理性糖尿为一过性糖尿，是暂时性的，排除生理因素后恢复正常.1饮食性糖尿 短时间内食用大量糖所致,糖的同化存在着个体差异,但健康人一次进食葡萄糖200g以上即可产生糖尿。 ， 2应急性糖尿 又称一过性糖尿。原因是颅脑外伤、脑血管意外、情绪激动等情况下，延脑血糖中枢受刺激，导致肾上腺素、胰高血糖素大量释放，因而可出现暂时性高血糖和糖尿. 3妊娠性糖尿 以妊娠中末期多见，由于肾小球滤过增加,肾小管的重吸收相对减少；另外，妊娠末期和哺乳期

16、间可因乳腺产生乳糖过多而至乳糖尿. （二）病理性糖尿 1真性糖尿 真性糖尿是由于胰岛素绝对或相对不足，血糖浓度超过肾糖阈值而从尿中排出所致。尿糖检查不仅是诊断糖尿病的重要依据，也是指导临床医生胰岛素使用量的依据之一，判断疗效的主要指标之一。但如果并发肾小球硬化症，则肾小球滤过减少，肾糖阈升高,此时血糖虽已超过般的肾糖阈值,尿糖却表现为阴性.但于进食后2h由于负载增加，则可见血糖升高,尿糖阳性。对于此类糖尿病患者，不但需同时做空腹血糖、尿糖检查，进食后2h尿糖检查，还需进一步做糖耐量试验等检查，以明确诊断。 2肾性糖尿 。 肾性糖尿是由于肾小管对葡萄糖的重吸收功能减退，肾糖阈降低而引起的糖尿.如

17、家族性糖尿(先天性近曲小管重吸收功能缺陷），无明显症状。新生儿糖尿是因近曲小管功能尚未完善。以上均应与真性糖尿病相区别,其鉴别要点为肾性糖尿时空腹血糖及糖耐量试验结果均正常. 3其他糖尿 生长激素、甲状腺素、肾上腺素、皮质醇、胰高血糖素都可使血糖浓度上升而引起糖尿。甲状腺功能亢进,甲状腺素分泌过多，使消化道肠壁的血流加速和糖的吸收增快，因而在饭后血糖增高，出现糖尿;肢端肥大症，可因生长激素分泌旺盛而致血糖升高，出现糖尿；嗜铬细胞瘤，可因肾上腺素和去肾上腺素大量分泌，致使磷酸化酶活性增强，促使肝糖原降解为葡萄糖，引起血糖升高而出现糖尿；兴氏(Cushing)综合征,可因皮质醇分泌增多，使糖原异生

18、旺盛，抑制己糖激酶和对胰岛素作用,因而二理糖尿。此外，肝功能障碍时血糖升高也可见糖尿。第五节 尿酮体的测定 。一、千化学法测定的原理 二、千化学法测定尿酮体的注意事项 (1)由于尿酮体中的丙酮和乙酰乙酸都具有挥发性，乙酰乙酸更易受热分解成丙酮，尿液被细菌污诞亏，酮体消失.因此,尿液必须新鲜，及时送检,以免因酮体的挥发或分解,出现假阴性结果或偏低筹吴： (2)干化学法对乙酰乙酸的敏感性为50100mgL，对丙酮的敏感性为400700mgL，不与p羟三鬟发生作用。但各大厂家生产的试剂带存在差异，对酮体测定成分不同，应加以注意。注意干化学法与酮体粉法的敏感度差异，同一病理标本，两种方法可能出现截然不

19、同的结果,分析结果时应特别注意。（3）不同病程酮体成分的变化会给检测结果带来差异。不同病因引起的酮症其酮体的成分可不同，即使同一病人在不同病程也可有差异.在糖尿病酮症酸中毒早期，酮体的主要成分是伊羟丁酸，乙酰乙酸很少或缺乏，此时测量可导致对总酮体量估计不足;在糖尿病酮症酸中毒症状缓解之后，乙酰乙酸含量反而比急性期初始含量高。因此检验人员必须注意病程发展，与临床医生共同分析实验结果的可靠性，这就是分析后质控的重要内容. 三、尿酮体测定的临床意义 正常情况下，由肝脏产生的酮体经血液运送到其他组织，氧化成二氧化碳和水并产生能量。当糖代谢发生障碍时，脂肪的分解代谢增多,这时肝内酮体产生的速度超过肝外组

20、织利用的速度，血中酮体增加，称酮血症；过多的酮体从尿排出，称酮尿，可大概分为以下4种情况. （一）糖尿病酮症酸中毒 由于糖利用减少,分解脂肪产生酮体增加而引起酮症.未控制或治疗不当的糖尿病出现笋中毒或昏迷时,尿酮体检查极有价值。应与低血糖、心脑疾病酸中毒或高血糖渗透性糖尿病昏迷相区别.酮症酸中毒时尿酮体阳性，而后者尿酮体一般不增高.但应注意糖尿病酮症者肾功能严重损伤而肾阈值增高时，尿酮体亦可减少，甚至完全消失. (二）非糖尿病性酮症 如感染性疾病(肺决、伤寒、败血症、结核等发热期),严重呕吐、腹泻,长期饥饿、禁食,全身麻醉后等，均可出现酮症，这些情况相当常见.妇女孕期因妊娠反应呕吐、进食少，体

21、脂降解代谢明显增多，发生酮症而致酮尿。（三）中毒如氯仿、乙醚麻醉后、磷中毒等（四）服用双胍类降糖药服用降糖灵时，由于药物有抑制细胞呼吸的作用,可出现血糖正常、尿酮体阳性的现象第六节 尿胆红素、尿胆原检查 胆红素是血红蛋白分解代谢的中间产物，是胆汁中的主要成分，其代谢产物有尿(粪)胆原等.当各种原因造成胆红素产生过多,或肝细胞摄取、结合及排泄等过程发生障碍时，均可导致血、尿、粪便中胆红素及其代谢产物(尿胆原等）的改变.对这些物质进行检验，可协助临床诊断。 一、千化学法测定的原理 尿胆红素试剂带的主要组成见表3-19。其测定原理，是在强酸介质中直接胆红素与二氯苯胺重氮盐起偶联反应生成红色的复合物（

22、图312）；其反应过程，是重氮盐作用胆红素中央使其裂开，再结合形2分子的偶氮胆红素而呈现颜色变化。尿胆原测定原理:根据干化学试剂带组成的不同,其测定方法有所差异。试剂带的组成及其特性见.美国Ames公司采用，在强酸条件下尿胆原和对-二甲氨基苯甲醛发生醛化反应，生成樱红色缩靶图313）；德国宝灵曼公司采用，在强酸条件下尿胆原和对甲氧基苯重氮四氟化硼发生重氮盐偶生成胭脂红色化合物.二、千化学法测定的注意事项 (1）标本必须新鲜，以免胆红素在阳光照射下成为胆绿素，尿胆原氧化成尿胆素。 (2）尿液中含高浓度维生素C和亚硝酸盐时，抑制偶氮反应,使尿胆红素呈假阴性;当患者接受大剂量氯丙嗪治疗或尿中含有盐酸

23、苯偶氮吡啶的代谢产物时，可呈假阴性。 （3）尿液中一些内源性物质如胆色素原、吲哚、胆红素等,可使尿胆原检查结果出现假阳性，一些药物(如吩噻嗪）也可产生颜色,干扰实验。 （4）正常人尿胆原排出量每天波动很大，夜间和上午量少，午后则迅速增加，在午后24时达最高峰;同时尿胆原清除率与尿pH，相关,pH50时，清除率为2mlmin,pH80时，增加至25m1min。因此有学者提倡预先给患者服用碳酸氢钠碱化尿液，收集午后24时（2h排出量)进行测定，以提高检出率。 (5）对于阻塞性黄疸尿胆原减少的病人，不能使用干化学法进行测定,因为大多数尿液试剂带都没有设制检测尿胆原阴性这一项。三、尿胆红素、尿胆原检查的临床意义 胆色素(bilepigments)是指血红素的一系列代谢产物，包括胆红素、胆绿素、胆素原族和胆素族化合物.胆素原族和胆素族化合物种类较多，命名交叉重复,临床上常简化为：凡是粪便中的胆素原族化合物统称为粪胆原；其氧化产物胆素族化合物统称为粪胆素；存在于尿液中的同类化合物,则相应地称为尿胆原和尿胆素。 胆红素是血红蛋白的代谢产物，衰老红细胞破坏后释放出的血红蛋白经分解产生的胆红素约占胆红素总量的80,其余20来自其他血红素蛋白，包括肌红蛋白、过氧化物酶、过氧化氢酶及大多数细胞色素等的分解代谢。正常成人每天形成250300mg