1、各种缓冲液的配制方法各种缓冲液的配制方法-各种缓冲液的配制方法Na2HPO4-柠檬酸钠缓冲液PHLNa2HPO4 (ml)L柠檬酸钠 (ml)PHLNa2HPO4 (ml)L柠檬酸钠 (ml)Na2HPO4。2H2O,分子量= L溶液含L柠檬酸. H2O,分子量= L溶液含L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液(L)PHL柠檬酸(ml)L柠檬酸钠(ml)PHL柠檬酸(ml)L柠檬酸钠 (ml)柠檬酸. H2O,分子量= L溶液含L柠檬酸钠. 2H2O,分子量=;L溶液含 g/L醋酸缓冲液(L,18)PHLNaAC(ml)LHAC(ml)PHLNaAC(ml)LHAC(ml) H2O,分子量= L溶液含L(
2、1)醋酸盐溶液的配制:醋酸醋酸钠缓冲液 取醋酸钠,加冰醋酸20ml,再加水稀释至250ml,即得。 醋酸醋酸钠缓冲液 取无水醋酸钠20g,加水300ml溶解后,加溴酚蓝指示液1ml及冰醋酸6080ml,至溶液从蓝色转变为纯绿色,再加水稀释至1000ml,即得。 醋酸醋酸钠缓冲液 取2mol/L醋酸钠溶液13ml与2mol/L醋酸溶液87ml,加每1ml含铜1mg的硫酸铜溶液,再加水稀释至1000ml,即得。醋酸醋酸钠缓冲液 取醋酸钠18g,加冰醋酸,再加水稀释至1000ml,即得。 醋酸醋酸钠缓冲液 取醋酸钠,加水50ml使溶解,用冰醋酸调节pH值至,再加水稀释至100ml,即得。 醋酸醋酸钠
3、缓冲液 取醋酸钠,加1mol/L醋酸溶液20ml溶解后,加水稀释至500ml,即得。用醋酸和醋酸钠配制的缓冲溶液的PH=PKa+lgC(NaAc)/C(HAc)(在此,C(HAc)指醋酸的浓度,C(NaAc)指醋酸钠的浓度,Ka是醋酸的解离常数=*10-5(乘10的-5次方),PKa=-lgKa=,将PH=代入,可得C(NaAc)/C(HAc)= 通常我们配制时会使C(HAc)=L,或是C(HAc)=L等。若是配制C(HAc)=L,则C(NaAc)=L 称量醋酸钠固体质量为82*=46克 量取冰醋酸体积为*1000/=。 将称好的醋酸钠和量好的冰醋酸加入1000mL水中溶解、搅拌均匀即可。 当
4、然若想配制其它的浓度,也可照公式计算即可,通常缓冲溶液不能配的太稀,否则缓冲能力要下降,太浓的话又浪费试剂。苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液PHLNaOH(ml)L苯二甲酸氢钾(ml)加水至(ml)L苯二甲酸氢钾溶液:称取在硫酸干燥器中干燥过24小时的苯二甲酸氢钾溶于水中,稀释至500ml。磷酸缓冲液(L)PHLNa2HPO4 (ml)LNaH2PO4 (ml)PHLNa2HPO4 (ml)LNaH2PO4 (ml)58Na2HPO4 .2 H2O ,分子量=, L溶液含LNaH2PO4 . 2 H2O ,分子量=, L溶液含LNaH2PO4 . H2O,分子量=, L溶液含LNa2HPO4 .1
5、2 H2O,分子量=, L溶液含L磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法 PBS PBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4,pH PBS缓冲液():NaCl 137mmol/L,KCl L,Na2HPO4 L, KH2PO4 L称7.9g NaCl,0.2g KCl,0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4)和1.8g K2HPO4,溶于800 ml 蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至,最后加蒸馏水定容至1 L。保存于4冰箱中即可。需要注意的是,通常所说的浓度0.01 M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓
6、度,而非Na 离子或K 离子的浓度,Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。母液的配制: 0.2M Na2HPO4:称取 71.6g Na2HPO4-12H2O,溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO4:称取 31.2g NaH2PO4-2H2O,溶于1000ml 水各种浓度PB(pH=的配制:先配 0.2M PB (pH=,100ml):取19ml L的 NaH2PO4, 81ml L 的 Na2HPO4, 即可。然后 只需将0.2M PB (pH=按相应比例适当稀释 即可,如:0.1M PB(PH=) :取 500ml 0.2M PB,加水稀释至 1000ml 即可。0.01M P
7、B (PH=):取50ml 0.2M PB,加水稀释至 1000ml 即可。0.02M PB (PH=):取100ml 0.2 M PB,加水稀释至 1000ml 即可。 若需要 NaCl的话,加入 NaCl 至%(g/100ml)即可。另:其它各种另 PH值的 0.2M PB(100ml)配方 :pH 0.2M NaH2PO4(ml) 0.2M Na2HPO4(ml) 92 8 90 10 85 15 51 49 45 55 38 62 33 67 28 72 23 77 19ml 81ml 16 84 13 87 7 93 0.01M 磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法称取8g NaCl、0.
8、2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至,最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034105Pa)高压下蒸气灭菌(至少20分钟),保存存于室温或4冰箱中。需要注意的是,通常所说的浓度0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na 离子或K 离子的浓度,Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话,则需要在配置的时候分别加入100 u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。 PH H2O 1000 1000 1000 1000 NaCl Na2HPO4 NaH2PO4
9、 根据经验来看,新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在之间,可是在温度的影响下,尤其在夏天,其电离常数发生了改变,在经过昼夜的时间后,PH值会明显改变(我亲自测过偏酸)。所以做实验的同学可要注意了,PH值可能会影响实验结果,甚至可能导致阴性。所以务必记得这个时候和天气,要加强实验条件控制问题。每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS,如果发生偏酸或偏碱,注意重新换新液。 PBS缓冲液 称取NaCl 8g,KCl 0.2g,Na2HPO412H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g,溶于900ml双蒸水中,用盐酸调pH值至,加水定容至1L,常温保存备用。PBST缓冲液 取300l Tween-
10、20 加入PBS 100ml中,混匀后即刻使用。现用现配。 如果是把所有固体加大十倍,配置为浓缩液,工作时候十倍稀释,那么,在刚配好浓缩液时,PH在左右,明显偏酸。不能用盐酸调。虽然可以用氢氧化钠颗粒调,但是有更方便的方法。 十倍稀释以后,PH自动升高到所需要的值。不需要其它任何处理。这个可以先取少量试一试,配好之后再测一次 的PBS配方详细1. NaCl 137mmol/L,KCl L,Na2HPO4 L, KH2PO4 L 2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。3. 滴加浓盐酸将pH值调节至,然后加入去离子水将溶液定容至1 L。4. 高温高压灭菌后,室温保存。注意:上述
11、PBS Buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution,PBS)的配制: 甲液:L Na2HPO4溶液 :称取磷酸氢二钠9.465g 7.099g,加蒸 馏水至1000ml ; 乙液:L KH2P04溶液: 称取磷酸二氢钾, 9.07g 6.803g,加蒸馏水至1000m1。 将甲乙液分装在棕色瓶内,于4冰箱中保存,用时甲、乙两液各按不同比例混合,即可得所需pH的缓冲液,见下表: pH 甲液ml 乙液mI 你要配制pH=的PBS,可用甲、乙液各50ml混合即可。硼酸缓冲
12、液(L硼酸盐)PHL硼砂(ml)L硼酸(ml)PHL硼砂(ml)L硼酸(ml)硼砂,分子量=,L溶液=L硼砂含L硼酸,分子量=,L溶液含L硼砂易失去结晶水,必须在带塞得瓶中保存;硼砂溶液也可以用半中和的硼酸溶液代替盐酸-氯化钾缓冲液PHLHCl(ml)LKCl(ml)加水至(ml)PHLHCl(ml)LKCl(ml)加水至(ml)100100100100100100100100100100100100LKCl溶液:溶氯化钾于水中,稀释至500ml苯二甲酸氢钾-盐酸缓冲液PHLHCl (ml)L苯二甲酸氢钾(ml)加水至(mi)PHLHCl (ml)L苯二甲酸氢钾(ml)加水至(mi)10010
13、0100100100100100100100L苯二甲酸氢钾溶液:称取在硫酸干燥器中干燥过24小时额苯二甲酸氢钾溶于水中,稀释至500ml磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液PHLNaOH(ml)L磷酸二氢钾(ml)加水至(ml)PHLNaOH(ml)L磷酸二氢钾(ml)加水至(ml)1001001001001001001001001001002500100100L磷酸二氢钾溶液:溶磷酸二氢钾于水中,稀释至500ml硼酸-氯化钾-氢氧化钠缓冲液PHLNaOH(ml)L硼酸-氯化钾(ml)加水至(ml)PHLNaOH(ml)L硼酸-氯化钾(ml)加水至(ml)100100100100100100100100100100100100L硼酸-氯化钾溶液:溶硼酸和氯化钾于水中稀释至500ml
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