铺薄层板经验汇总Word文档下载推荐.docx

1、二、楼上的讲得很好，我再补充两点切身体会：（1）CMC-Na溶液煮了以后不能再用冷水兑，否则，几天以后就会变绿，起霉。（2）如果有抽滤装置你可以直接把CMC-Na溶液滤过，就可以不必等它沉淀再取上清液了（嘿嘿，我是急性子），还有两个好处一是节省CMC-Na溶液，二是倒滤过的CMC-Na溶液的时候不必担心会把下层的不溶物倒出来了！） 三、本人的工作经验：薄层层析制板1. 配制4%5%的羧甲基纤维素（CMC）：称取CMC，溶于冷水中，边加热边搅拌，直至成为清澈、透明的溶液。2. 40%硅胶：按CMC溶液的量、按40%的比例称取薄板层析硅胶，倒入大研钵中，与CMC溶液混合，充分研磨成均匀糊状。3.

2、加入几滴乙醇或丁醇，可起到消泡的作用。4. 将载玻片置于平台上，用药匙舀取糊状硅胶，均匀地铺在载玻片表面。5. 自然干燥后，放入烘干箱烘12小时以上。再在105110活化，活化时间为0.51小时，冷却后即可使用。四我也来谈一下自己的一点经验吧。CMC-Na：硅胶为2.5：1较好，楼上师兄说的3：1应该也可以，但是硅胶配的过稀时后果很严重，板子在晾干时会出现许多裂缝，象万寿菊样的开花状，完全不能用。此乃本人的惨痛经历，当时不知道是硅胶过稀的原因，还以为冬天太冷板子给冻裂了，又作了一批放在暖气房，还是照裂不务。浪费了整整一瓶GF254啊（做的是制备板用量较大）。有个问题至今不明白，请教各位大虾，晾

3、干的板子放在烘箱里怎么全炸裂了，有什么方法可以避免板子炸裂。楼上的兄弟，我也有过同样的遭遇。当时板子铺得太厚，后来加长研磨的时间就好了。首先我想说的是手工铺制的板子，只适宜于定性分析，不宜于分离定量。手工铺板的要点我认为有如下几点：1.手工铺制的板子常用的有：硅胶G板和硅胶CMC板。前者是煅石膏（石膏经140烘烤34小时）与硅胶按11.3：10混合均匀。每份硅胶G加水23份调成糊状，即可使用。后者的操作各位大虾已有论述。2.载板要求平滑清洁。在使用前一定要处理干净，用洗涤液或肥皂水洗涤，再用水冲洗干净，烘干；3.CMC-Na要用蒸馏水为溶剂，加热溶解后，放冷，最好滤过使用；消泡剂可直接与CMC

4、-Na溶液混合使用；4. 我在做时，先在研钵中加CMC溶液，再加硅胶，按同一方向研磨，这样更容易调匀不易包埋硅胶颗粒；稠度以用研棒粘取，成连珠状不成线状下滴为好；配制时遵循现配现用、少量多次的原则，因其易干影响铺制效果。薄层色谱法实践技巧 目的：1. 药典：薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与事宜的对照物按同法所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。2. 如果你是做鉴别的话，薄层的系统适用性主要是做检测限和分离度；3. 如果你是做含量测定，比如说用薄层扫描法，薄层的系统适用性应该做线性范围、同板精密度、

5、异板精密度、回收率；4. 手工铺制的板子，只适宜于定性分析，不宜于分离定量；5. 化学药一般是作有关物质，需要一定的载药量，所以要适当增加厚度；6. 中药一般较难分离，需要薄板，以增加分离度；7. 手工铺制的板子常用的有：硅胶G板和硅胶CMC-Na板。8. 如果你铺板目的是做分析用的话，肯定得很仔细用心；如果仅是天然药化那种粗略检查过柱子得到的馏分纯度，那就没有必要这么复杂了，也就是说速度可以快点，板的要求也没有必要这么高；9. 单纯的手铺板，技巧要求很高的，如果有铺板器（也是完全手动的那种），铺出的板子基本上可以保证均一的。10. 要喷硫酸乙醇并定量的最好铺水板；铺水板是最考技术的，主要是碾

6、磨技术，大家可以探讨一下；11. 硫酸乙醇显色作定量分析的品种，但凡加了CMC-Na的板都易烘糊，尤其是温度高于100度时，后改用不加CMC辅的水板来作，就不会有烘糊现象，故也可推论CMC易于与硫酸起糊化反应。感觉辅水板关键是硅胶G与水的比例要达1：3.5左右，而且研磨后要尽快涂布，不能易于凝固而难于涂布。展开：12. 药典：展开容器 应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密的盖子，底部应平整光滑，或有双槽。上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭。水平展开用专用的水平展开缸。13. 药典：将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点

7、5mm为宜（切勿将样点侵入展开剂中），密封顶盖，待展开至规定距离，除另有规定外，一般为815 cm，溶剂前沿达到规定的展距，取出薄层板，晾干，按正文项下的规定检测。14. 展开剂的选择（分离单体）：（1）粗分，也就是当你的样品极性范围比较大的时候，可以直接采用极性较小的流动相。然后将前沿、原点以及前沿及原点间的硅胶分别刮下，提取。这样，样品就被分为几个部分，而各个部分的极性相差也比较小了。然后再将这几部分分别进行下面的细分TLC。（2）细分。经过粗分之后，我们一般对各个部分的极性都能够做到心中有数了。比如，被冲到前沿的样品，要采用更小极性强度的流动相，而死吸附部分，则需要较大强度的流动相。我们

8、在初步确定了流动相的极性强度之后，可以自己设计几个溶剂系统。在选择流动相的组成的时候，可以参考snyder的溶剂分类，从质子受体，质子给体和偶极作用的溶剂中各选择一种，然后再选择一个强度调节剂。当然，也可以参考文献中采用的流动相。选好了要用的流动相，就可以根据我们初步确定的极性强度得到流动相的配比了（如果是二元流动相的话）。如果是三元及以上的流动相，可以采用Glajch和Youngstrom的七种溶剂系统的方案进行选择流动相的配比。然后从中选择分离效果比较好的组合。最开始可以采用微量圆环法（将样品点在中间，然后将流动相用毛细管从原点向圆周扩散）和小板实验法来摸索，然后再应用于大的制备TLC。我

9、也曾直接采用圆环法，也称为环形展开，来进行制备的。本来是应该有专门的U形展开室来展开，但是因为我们这里没有这个设备，所以我一般采用简易的方法：即将样品点在中央，然后用尖头的滴管源源不断的向圆心滴加流动相的。样品会分出不同的同心圆而得到分离。这样的好处有三：（1）只要操作小心，各个同心圆真的就非常圆，即不会出现线性层析中的边缘效应等。（2）分离效果更好，拖尾现象小于线性层析。（3）由于圆心式展开的Rfc是线性展开的Rf的平方根，要大于线性展开的Rf，所以分的更开。弊端在于将各个组分从板上刮下的时候需更小心才不会使之混杂。15. 当展开剂极性差别很大时，特别是极性大的成分所占比例很小时，往往会出现

10、溶剂脱混现象。在这种情况下，展开槽 饱和与不饱和差别没有显著性差异，薄层板上往往会出现类似分层的现象，所以只有换展开系统来调整。16. 甲醇用量较小，而甲醇又易挥发，容易产生边缘效应，要特别注意展开剂的平衡和层析缸的密封。17. 如果经过一次展开后,展开槽内仍剩下足够的展开剂,可以展开第二块板子吗？个人认为最好不要。一般来说为得到较好的分离效果，应先饱和一下，第二次使用如果还要饱和就会造成另一侧残留的展开剂附着在板子上，造成影响。而且有机溶剂一般较易挥发。18. 自己手铺的薄层板怎么都没有买来的高效板好用，用过之后也可以用极性大些的展开剂将展开的点，二次展开跑过，这样就可以重复利用了。显色：1

11、9. 药典：显色装置 喷雾显色要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用专用的玻璃器皿或用适宜的玻璃缸代替；蒸气熏蒸显色可用双槽玻璃缸或适宜大小的干燥器代替。20. 说关于薄层板加热变黑的问题，其实很容易解决：当喷完显色剂后不用在放烘箱里烘了，可以用电吹风在板子背面吹吹就能显色了。我们实验室里一般都采用此法，简便、快洁如果一非想使用烘箱烘的话，一定要用带玻璃窗的，当看到显色了就取出，不然不好控制显色时间，时间过长，CMC容易碳化变黑。21. 根据我的经验，薄层版变黑与CMCNa的浓度过大有关，如果你留意的话，你会发现，当显色剂中有浓硫酸时，加热时间稍长就会变黑（其他显色剂是没事的），

12、我老师说这是因为浓硫酸把CMCNa炭化了，其实这种情况你只要适当降低CMC-Na的浓度就可以了，当然如果不加CMC-Na的话容易把板弄破。22. 显色剂：称取100mgDC红色19号（染料索引号No 45170）溶于150ml二乙醚、70ml 95乙醇和15ml水。此溶液可保存一周。薄层板喷布显色剂R6后，立即在366nm下观察和记录。问题与应用：23. 板子会裂口，一则可能是因为硅胶的比例太大，二则可能是，板子要在常温下晾干后，再在烘箱中活化。如果铺完不久就在较高温度下，裂口的几率就比较高的。24. 板铺好后，自然凉干最好，一定是要从玻板后看也是干的，注意一定要放平，最好控制空气流动；然后再

13、放到烘箱中活化，这样就不会有裂开的现象了； 如果直接铺好后或者只是硅胶表面是干的，放进烘箱都会有裂开的。25. “晾干的板子放在烘箱里怎么全炸裂了，有什么方法可以避免板子炸裂。” 你的板没有完全干透，表面看是干了，但是最中间的没有干，所以你直接放入105度的烘箱烘，当然会炸裂了，所以应该先用低温大约40度左右烘30分钟左右，再用105度活化，就可以解决这个问题了。26. 板子炸裂也可能是CMC-Na中有絮状沉淀所致。27. 但凡加了CMC的板都易烘糊，尤其是温度高于100度时，若改用不加CMC辅的水板来作，就不会有烘糊现象，但不加CMC辅的板又太软，点样时容易点出洞，有个好办法是将CMC的浓度

14、调至0.1%，这样就不易烘黑的。28. 系统适用性：如果你是做鉴别的话，薄层的系统适用性主要是做检测限和分离度。如果你是做含量测定，比如说用薄层扫瞄法，应该做线性范围，同板精密度，异板精密度，回收率。CMC-Na溶液的配制：29. 药典规定CMC-Na浓度为0.20.5，实际操作中0.40.5最为实用；CMC-Na溶液的溶剂应用蒸馏水，以尽量减少污染。30. 配制CMC-Na溶液，根据实际经验一般将溶液浓度配成0.3%，需要铺厚板可配成0.5%左右，薄板可配成0.2%即可。CMC-Na溶解最好是自然溶解（浓度不是太高），也可在水浴中加热促溶（用时还是过滤一下好，避免铺出的板子有麻坑）。31.

15、配制CMC-Na溶液时，可以先量取好蒸馏水，再将称量好的CMC-Na均匀撒在水中，用玻璃棒搅拌，如果操作的好的话可以不用加热都能溶解的很好；当溶解完全后，应该抽滤一下，这样铺的板子很均匀，不过滤会因为一些肉眼看不到的不溶物混入，这样铺的板子会出现许多小颗粒；32. 第一个关键的地方，你的CMC-Na溶液必须配制的好，放置的也要很好，完全分层之后只能取上清液。上清液要澄清透明，时间太长的CMC-Na可能会发黄，如果有霉菌出现的话，绝对不能使用；33. 如果有抽滤装置你可以直接把CMC-Na溶液滤过，就可以不必等它沉淀再取上清液了（嘿嘿，我是急性子），还有两个好处一是节省CMC-Na溶液，二是倒滤

16、过的CMC-Na溶液的时候不必担心会把下层的不溶物倒出来了。34. 在CMC-Na的溶解过程中，可以使用可进行加热操作的磁力搅拌器，大概搅拌5小时，应该可得到满意的效果。而且这样就可以使CMC-Na溶解，并且溶液更澄清; CMC-Na后处理，很多人说是过滤，或者抽滤，我觉得可能速度很慢，而且又容易浪费。我的做法是离心，5000rpm离心20min。倒出上清液，（非常清，也同时消除了过滤过程中可能发生的污染）。更难能可贵的是，我可以收集下面没有充分溶解的CMC-Na。继续加到水中，还可以配制。35. 配制4%5%的羧甲基纤维素（CMC）：36. 有个办法过滤CMC-Na溶液，在布氏漏斗上平铺薄薄

17、一层脱脂棉，千万保证每个小孔都没漏掉哦！用蒸馏水润湿脱脂棉，启动真空泵，抽紧后就可以放心大胆的倒CMC-Na溶液了，保证滤过的溶液澄清透明，而且长时间放置不沉淀。37. CMC溶液的浓度0.3-0.7% 比较合适，浓度高了将来显色时如果有加热过程稍不小心板子容易发黑，浓度低了铺出来的板子不结实，轻轻一碰就掉渣，不好保存，而且点样时会很紧张，容易出洞；38. 先将CMC-Na溶解完全,可将溶解成所需浓度加热后超声处理,再抽滤,可很快得到上清液 39. CMC-Na煮沸大概30分钟或更久的，其实这个过程很慢。千分之3。过滤一下，抽滤最好。要放冷。40. 制备CMC-Na时，我的方法是将CMC-Na

18、加入沸腾的水中，慢加快搅，防止成团，完全溶解之后，自然沉降或者是抽滤（建议不用滤纸，太慢了，脱脂棉是个不错的选择）。41. 对于CMC-Na溶液的配置，我认为最好提前几日配好，放置再用。配置时可用超声分散，对少量没有立即溶解的，放置后会逐渐消失。42. CMC-Na要用蒸馏水为溶剂，加热溶解后，放冷，最好滤过使用；43. 如是铺CMC-Na的薄层板，先将CMC-Na溶解完全，可将溶解成所需浓度加热后超声处理，再抽滤，可很快得到上清液。44. 关于CMC-Na的配制我觉得还要说一点就是：这个东西也算是一种高分子材料，而高分子材料的溶解必然都会有一个溶胀，溶解的过程，所以配制的时候，应该将称好的C

19、MC-Na少量的撒在水的表面，让其自然沉降，注意要散开平铺，这样能够充分浸润，使其溶胀，之后可以置于水浴锅内加热溶解；当然如果你不是很急着用的话也完全可以，直接用水泡着放那，估计十天半月的也可以用了。45. CMC-Na的溶解需要煮？药检所的老师用一个大缸子装水，按比例加入CMC-Na，让他自然溶涨、溶解，临用前用漏斗，加脱脂棉，滤过即可；46. 根据我的经验，薄层版变黑与CMCNa的浓度过大有关，如果你留意的话，你会发现，当显色剂中有浓硫酸时，加热时间稍长就会变黑（其他显色剂是没事的），我老师说这是因为浓硫酸把CMCNa炭化了，其实color=blue=这种情况你只要适当降低CMC-Na的浓

20、度就可以了，当然如果不加CMC-Na的话容易把板弄破；47. CMC-Na溶液煮了以后不能再用冷水兑，否则，几天以后就会变绿，起霉。48. CMC-Na完全溶解后，用布氏漏斗过滤。玻板：49. 选择合适的薄层板（如：2010 cm），清洁干净（先用洗手液或洗衣粉清洗，再用自来水冲洗干净，接着用蘸有乙醇的棉花擦拭干净，最后把板吹干或烘干），放置于清洁处，备用。50. 玻璃板应该很干净，没有划痕，没有缺口，4个角要“健全”。51. 载板要求平滑清洁。在使用前一定要处理干净，用洗涤液或肥皂水洗涤，再用水冲洗干净，烘干。52. 清洗玻璃板相当重要，切记要清洗得相当干净，不然会在铺板中产生小气孔。53.

21、 薄层板最好用洗洁精浸泡12小时，这样比较容易清洗，清洗后薄层板依柱竖起，半小时即可晾干。54. 板子一定要洗干净，用适中浓度的盐酸浸泡是一个不错的选择。55. 板要绝对干净。总结：完整、平滑、清洁！研磨：56. 硅胶和粘合剂的比例不用固定，稀点铺薄板，稠点铺厚板，以目的决定比例。57. 硅胶的研磨，当然是一个方向了，可以适量的加入一定量的无水乙醇或丙酮来消泡，也可以适当搅拌后放在干净容器内超声，效果都是不错的。手工铺硅胶的用量一般1020 cm的约34克，硅胶和CMC-Na的用量一般是1：2.83，具体根据要铺板子的厚度和CMC-Na的浓度决定。58. 40%硅胶：59. 先在研钵中加CMC

22、溶液，再加硅胶，按同一方向研磨，这样更容易调匀不易包埋硅胶颗粒；60. 硅胶和CMC-Na溶液的比例可以适当的调节，根据你所需要薄层板的软硬来微调。61. 硅胶的浓度要适中。太稀铺板时易淌出，同时延长板的干燥时间；太稠，流动性不好，铺板是靠其流动性的，同时也很可能在没铺好前凝固。62. 建议硅胶应配制成偏稀的状态，这样铺制更容易，不必辛苦地颠好久，而且可多可少，可薄可厚。63. 我的经验是CMC-Na与硅胶配成 3：1比较合适，CMC-Na用千分之三到千分之五，硅胶浓度稍大一些或小一些也行，但不能太低，否则板子边缘会凹凸不平。64. CMC-Na：65. 充分磨好硅胶，后，再边磨边加CMC-N

23、a溶液；铺的时候，如果慢且多，那么有时会干了，你还要边磨边放点CMC-Na溶液。66. 研磨时防止气泡可以加少量的乙醇或者丙酮；加入几滴乙醇或丁醇，可起到消泡的作用。67. 加长研磨的时间，勿太厚，避免板子炸裂。68. 超声的排气效果很好。69. 0.4 CMC-Na溶液（1：3）置研钵中，朝一个方向慢慢研细约1015分钟，10g吸附剂加入3滴95乙醇以驱赶气泡；70. 硅胶的研磨时间:如果严格规定的话,需在一分钟内完成,从加入CMC溶液到吸附剂中至涂布结束,应在四分钟内完成 71. 硅胶与CMC-Na溶液的比例根据硅胶型号的不同而不同：硅胶或硅胶GF254比例一般为1：2 1：3，硅胶H或硅

24、胶HF254比例一般为1：3 1：4。72. 研磨的时候确实需要沿一个方向研，不要敷衍 73. 硅胶研磨要充分，防止气泡。74. 实在怕有气泡，可以超声一下。铺板：75. 药典：薄层板制备 除另有规定外，将1份固定相和3份水（或加有黏合剂的水溶液）在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.20.3 mm），取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在110 烘30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染。76. 薄层板的厚度：如果定性分析，一般

25、厚度以.25 mm为好；如果要分离制备少量的纯物质时，厚度应稍大一些，常用的为0.5 mm0.75 mm，甚至有1 mm2 mm的。77. 铺板，我觉得是各人各喜欢，可以顺着板中间倒，也可以顺着某个边缘倒，倒时也要注意不能引入小气泡。可以用玻璃棒引着溶液平铺在玻璃板上，如有需要，可以双手10个指头拖住玻璃板，有节奏的颠，使得硅胶分摊匀称。78. 将薄层用硅胶粉称定加入3倍量的CMC-Na溶液，研磨均匀（匀速一个方向）成糊状（我用1分钟左右），不要静置迅速将涂料倒于备好的玻璃板（事先清洗干净，不可有污渍、水滴。）自上而下自然流注铺于玻璃板，倒量为距离边缘3厘米左右即可（铺厚板用量适当多些，薄板量

26、少些），然后用研钵棒涂布玻璃板上。颠板（上下左右或倾斜根据板的涂布情况而定）。铺好的板要选择一个水平、通风的平台放置，不可落上灰尘。79. 依据薄层板使用需要，将适量研好的吸附剂倒到薄层板上，先用小锤将吸附剂荡匀，倾斜层析板，使吸附剂流至层析板一侧，待吸附剂蓄积一定量后，再反向倾斜层析板，使吸附剂回流；然后是另外两个方向，重复上述操作，后轻颠几下薄层板即可。80. 将吸附剂制备好后，直接将适量倾倒于玻板的中央处，接着用研棒轻轻将吸附剂溶液向四周摊匀，然后开始颠玻板；颠的时候可要注意啦：一定要轻轻的颠，从玻板的一头颠到另一头，然后反过来进行。重复几次即可。81. 将研好的糊糊倒在干净的板上，我一般是从中间一次性倒下去，然后用左手托板，轻轻倾斜，使糊糊向板边缘流动，右手拿研棒将没铺到的地方涂均匀，但要注意研棒在接触糊糊一直到最后涂抹均匀才能离开板，一旦提起就不能再去涂抹，否则会留下痕迹。涂抹结束后，就颠板啦，我的经验是颠的幅度不易大，但频