最新western转膜条件资料Word文件下载.docx

1、 35 KDPVDF湿转 恒压 90 V-110 V，控制电流不要超过300 mA。70 min肿瘤手术标本转录因子33 KDaPVDF膜350 mA 恒流150 min转膜设备：湿转 Bio-Rad说明：相同条件曾用于数个30-70 KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。成纤维细胞smad354 KDa湿转 Bio-Rad胰腺癌细胞16 KDa and 42 KDa120 V 恒压90 min大鼠血管平滑肌细胞72 KD，42 KD 和22 KD一般的PVDF膜湿转，恒流一张膜0.26 A，两张膜0.3

2、 A。转膜缓冲液最多用3次，最好现用现配，我们用的没有加SDS，转的时候最好能用冰块一类的东西降一下温，这样转的效果要好一些，转的时候一定要把三明治每层之间的气泡除去，同时使滤纸大于膜，膜大于胶，以免烧坏电极。大鼠PBMC55 KD0.22的PVDF膜转膜方式（恒流）：湿转60-90 min转膜液用过两三次之后转膜效果就很差了 其它按照常规就好了其实0.22的膜一般不怕转过头 以我们的经验，转膜时间、电压其实也有很大范围的调整 ，并不是非要固定于哪一个最合适，曾经做过一张膜转，17 KD的和170 KD的，按照170 KD的条件，17 KD的转膜也很好的。人非小细胞肺癌细胞系大于250 kDm

3、illipore PVDF膜 0.45 um湿转，恒流0.3A。180min“Bio-Rad ”电转保持电压在70 V以上，保持低温，如果电压低过70就需要换缓冲液了。白血病细胞28 KD0.45的NC膜湿转，90 min，0.25 A海绵厚度要合适，一次转磨用的海绵太薄，导致三明治没夹紧，转膜后拿出来一看，marker都变得七扭八歪。但是有前辈说垫的海绵太厚可能将胶压断，没经历过，不知道是不是会有这种情况。肿瘤细胞磷酸化蛋白10-200 KDa120 v 恒压120 min转膜缓冲液只用2次，基本都转上，5%BSA封闭，减少背景。胰腺细胞*90-130 KDa250 mA 恒流原核表达38

4、KD湿转 恒压：100 V心脏220 kDa，130 kDa，70 kDa，41kDa恒压70 v120 min，180 min，5-6 h伯乐湿转建议改进方向（可选）：40 kDa一下，70 v ，60-90 min足够，40-70 kDa 90-120 min即可。70-120 kDa ，70 v，120-180 min足够，120-180 kDa ，180-240 min，180 kDa以上建议6 h。卵巢癌细胞膜蛋白53 KDPVDF膜 0.45 um80 V 100 min人宫颈癌HELA细胞总蛋白-actin4250 4 h脑组织16 KD、27 KD、32 KD、42 KDPVD

5、F 0.22 um半干转 恒流 1 mA/cm2或2 mA/cm2不定北京六一仪器我共做了六个蛋白，所以总在想节约时间的方式。在 预试时我会观察电压数与转膜效率的关系，所以我不会按时间来定何时转完，而是按电压来定。通过染胶来确定电压数与转移蛋白分子量上限的关系。这样有的5分 钟就转完了，不用多浪费时间。并且六一的半干转膜仪随着使用次数的增多，效率也会下降，所以时间和转膜效率（尤其是使用后期）的关系并不稳定，单纯依靠时 间有时会有问题。CHO cell酶原40 KD0.22的PVDF膜（Biorad）转膜方式（恒压）：100 V，湿转，转膜时间：60 min。Tanon（上海天能）1. 转膜液现

6、用现配，用完倒掉。2. 转膜时间，电压可以适当调整。分子量大或者小一些的蛋白，采用此条件一样转膜效率很高。Hepg2EGFR170kdpvdf 0.4524V2个半小时伯乐半干转肝癌细胞蛋白名称：HIF-1120 kDNC膜80伏，湿转150分钟建 议：湿转，转膜液特别重要，否则会导致电压或者电流不稳影响转膜条带。转膜均现配先用，不重复利用。转膜时间一般是150分钟，80伏恒压。经李春红染 色，靠近蛋白胶的一侧膜上蛋白染色深，膜另外一面染色浅，说明蛋白未转过。该湿转条件自己做过的蛋白分子量范围：170-36 kD。心肌细胞总和膜128 KD，100，60，55，43 KDNC膜 0.2 um7

7、0 V 200 min转膜液最好现配现现用，或配成母液，最好不重复使用，70 V电压下，电流约154 mA。甲醇可以加到150 ml。对大分子量如200 KD转膜时间延长6-8 h。肺脏ICAM-185110 KD0.22NC湿转 恒流 300 mA设备名字 Bio-Rad mini一抗用的santa cruz 1 mL包装的。 比例调整到1：800做出很好的条带。效价会一直降低的。去年做的这个指标，今年夏天做就不行了。16 KDa0.2 um PVDF膜0.2 A恒流65 min28 KDa0.2 umPVDF膜0.25 A恒流60 min人肿瘤细胞80 KD0.45 um PVDF膜半干转

8、移系统恒流，勿超过0.85 mA/cm2，同时转多张膜电流需累加（串联）Bio-Rad其实有些东西并不是非常严格的，要转移的目的蛋白分子量小，那么转移的时间就短一些，反之，则长一点；蛋白量充足，可以多转一会，蛋白量较少，则要少转一下，免得蛋白穿膜而过到了滤纸上而前功尽弃。人和鼠肝癌细胞总蛋白、胞浆、胞核蛋白*17-116 kd恒流 200 mA3 h湿转 北京六一 24D miniCO COS7 293T80 72 56 52 48 25 18KD湿转 90 V 电流约为230-280 mA之间。两张膜串联叠加。40 minBio-Rad 法码西亚30-60 KDapall NC膜 0.45

9、um恒流 0.85-1 mA/平方厘米膜转膜设备: 北京六一 半干转转膜缓冲液用新鲜配制的，可先配成2倍的母液，转膜液的多少会影响电转的效率，一般将吸水纸润湿即可，不要和膜一起浸泡，这样效果很好。人肝癌肿瘤细胞notch60-120 KDa恒流 0.3 A-20度冰柜120 min 湿转 Bio-Rad转膜缓冲液用新鲜配制的，可先配成10倍或5倍的母液，保持低温是转膜效果的一个保证，这样效果很好。胶质瘤细胞总蛋白和核蛋白18 KDa 、36 KDa、55 KDa、98 KDaNC膜 PALL0.35 恒流湿转 Bio-Rad mini转缓液的配制有点讲究。如果蛋白大于一百多，一般加入SDS，时

10、间延长结果会更好些。由于，目前试验的蛋白就都不大，所以，我们都采用不加SDS的转缓液，跑出来的条带也很整齐、干净。蛋白来源大肠癌20592 kd，43 kd0.45pvdf湿转，天能。大鼠脑组织BDNF（28 KDa）、Bactin（42 KDa）、LaminB（72 KDa），以及磷酸化蛋白（保密 43 KDa）PVDF（0.45）膜300 mA 恒流湿转 Bio-Rad Mini转膜缓冲液：25甲醛 觉得这个浓度的甲醛可以有效降低电转的热量，而且使膜对蛋白的吸附效果较好，Marker转到膜上很鲜艳。 用立春红染色效果也很好。表达产物29 KDa0.3 A 恒流80 mincell lysa

11、te, culture medium15-50 kDNC，PVDF， 0.45 um恒压， semi-dryabout 2h is ok if the protein is small and the voltage can keep 100 V， if not increase to 3-4 h。 Bio-Rad肺脏、肝脏等。actin43 kDNC膜PALL 0.22 um湿转 恒流 200 mA4560 min用的santa cruz 分装和整装的都可以。效价一般1：1000-1：3000左右，可稳定较长一段时间。蛋白来源肺脏19 kd,35 kd0.2pvdf恒流250大鼠血管140

12、kd恒流，200 mA210 min湿转,北京六一心肌90 kDa，70 kDa,12.6 kDaNC70 v 240 min，120 min，60 min伯乐湿转脑16 KD 60 KD16的用0.22的PVDF，60的用0.45的NC20 V16的30 min，60的90 minBio-Rad 半干子宫内膜癌组织156.8恒流400mA真核表达（多种，30个以上）40-200 kD恒压100 V（电流在280 mA至350 mA之间）60 min（M100kD）,60-100min （100kDM200kD）大鼠肾脏130 kD0.45NC膜 PALL湿转 恒流 350 mA120min一

13、抗用的sigma 羊抗大鼠，0.2 mL包装的，打折后价格3000多，有些贵哦。比例调整到1：1500左右条带可，用BSA封闭。但是背景稍高。38 KDaPVDF膜，80 v恒压180 min约35 kD（双亚基）0.22 um PVDF恒流200 mA湿转Bio-rad,天能，六一转膜时间其实不需要那么长的，转膜没转上一般原因不在这里，可能是转膜液的原因：有些蛋白SDS可能影响其与膜的结合，还原型电泳因巯基乙醇的原因也可能导致后面的抗体不结合（这是我最近的经验教训），还有一抗的选择很重要，一定要选识别线性表位的抗体，才能用于做WB。细菌蛋白全部的可溶性蛋白11-170 KD湿转 恒流300

14、mA 骨肉瘤细胞 72 kDa PVDF膜（0.45 um） 半干转 恒流200 mA 20-30 minBio-Rad 型号忘了，就是有4个插孔的电泳仪。建议改进方向：低温很重要，新鲜的电转液也很重要。骨肉瘤CELL LINEBeta actin42 kDaNitrocellulose Membrane 0.2 um Pore Size （Invitrogen）湿转，恒压22 vX-cell Sure Lock Mini-cell （Invitrogen）转膜过程冰水浴，保持低温，Transfer Buffer重复使用。肾瘤细胞39 kDa湿转 恒压100 v50 minMCF770 kDa

15、PVDF膜（GE）湿转 100伏伯乐小转膜仪pichia 分泌表达细胞因子等17到30 kDamillipore PVDF 0.45 um这个条件除了100 KDa的预染maker转的不好，剩下的条带都非常清晰。正向前面ycwzq说的，感觉时间不是很重要，只要蛋白别太小或太大，在一个比较宽的时间和电压范围都能转上。当然这些还有一个重要的影响因素就是所用的蛋白转印缓冲液。所以建议把自己用的转印缓冲液的配方也贴上，便于分析交流。我先说我的吧，是大师兄师姐的配方，我用了感觉还不错，但是100 KDa以上的转的不好。蛋白转印缓冲液pH8.2:Tris碱1.93 g，甘氨酸9 g，甲醇200 ml，加水

16、定容至1000 ml。 大鼠坐骨神经 30 kDa PVDF膜（0.2 um） 湿转 恒流300 mA 45 min小鼠胚胎成纤维36 KDa、55 KDaPVDF膜 0.45 湿转 Bio-Rad mini垫子变薄时，可用三层纤维垫，也没问题。小鼠前列腺癌细胞P53 P21 RAD51 GAPDH53 KDa、21 KDa、37 KDa、36 KDa恒压110 vHEK293总蛋白200KDPVDF膜 0.2 um （用甲醇预先处理）恒压 25 V过夜 （16-20 hours）biorad mini人前列腺癌细胞40 KDWB 用膜类型、孔径：PVDF膜 0.45 um （用甲醇预先处理）恒压 20 V， 限制最高电流0.3 A。过夜 （16-20hours）biorad semi-dry组织蛋白名称（可保密）42 KDaPVDF膜（0.22）E.Coli BL214 kd恒压15 vO/N Bio-Rad Mini 湿转