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现代分子生物学强无敌版Word文档格式.docx

1、组蛋白的修饰:包括甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化及ADP核糖基化等。组蛋白的修饰所引起的结构变化同样能影响基因的开关,并且这种变化也控制转录。修饰租用只发生在细胞周期的特定时间和组蛋白的特点位点上图: 组蛋白N端残基中常见的化学修饰3.原核生物基因组(存在方式裸露 真核基因组存在方式)原核:原核细胞DNA的主要存在形式是以共价闭合环状存在于细菌拟核中。真核:DNA子与组蛋白及非组蛋白结合,经过多次压缩最终以染色体的形式存在细胞核中,在叶绿体及线粒体中也存在少量DNA以双链环状DNA的形式存在,与细菌染色体相似。4.DNA的一级结构所谓DNA的一级结构,就是指4种核苷酸的连接及其排列顺序,表示了

2、该DNA分子的化学构成。基本特点DNA分子是由两条互相平行的脱氧核苷酸长链盘绕而成的。DNA分子中的脱氧核糖和磷酸交替连接,排在外侧,构成基本骨架,碱基排列在内侧。两条链上的碱基通过氢键相结合,形成碱基对,它的组成有一定的规律。这就是嘌呤与嘧啶配对,而且腺嘌呤(A)只能与胸腺嘧啶(T)配对,鸟嘌呤(G)只能与胞嘧啶(C)配对。磷酸二酯键 负电荷 氢键连接 电泳移动向正极(?)5.DNA的二级结构 (双螺旋)DNA的二级结构是指两条多核苷酸链反向平行盘绕所生成的双螺旋结构。通常情况下,DNA的二级结构分两大类:一类是右手螺旋,如A-DNA和B-DNA;另一类是左手螺旋,即Z-DNA。6.DNA的

3、复制 DNA聚合酶功能 表2-12 活性 p55 *7.DNA复制起点 半保留复制模型一般把生物体的复制单位称为复制子(replicon)。一个复制子只含一个复制起点。DNA的复制主要是从固定的起始点以双向等速复制方式进行的。复制叉以DNA分子上某一特定顺序为起点,向两个方向等速生长前进。DNA在复制过程中碱基剑的氢键首先断裂,双螺旋解旋并被分开,每条链分别作为模板合成新链,这样新形成的两个DNA分子与原来DNA分子的碱基顺序完全一样。每个子代分子的一条链来自亲代DNA,另一条链则是新合成的,所以这种复制方式被称为DNA的半保留复制(semiconservative replication)。

4、DNA的这种半保留复制保证了DNA在代谢上的稳定性。8.原核生物DNA复制的特点 * 大肠杆菌DNA聚合酶I、II和III的性质比较 原核生物的DNA聚合酶 DNA聚合酶:有35外切酶活性和53外切酶活性。保证DNA复制的准确性。 DNA聚合酶 :活性低,其35核酸外切酶活性可起校正作用。主要起修复DNA的作用。DNA聚合酶:7种亚单位9个亚基。只具35外切酶活性,主导聚合酶。 DNA聚合酶和:在SOS修复过程中发挥功能。9.质粒染色体DNA为何能独立复制(具有复制起点)10.DNA的修复错配修复(恢复错配) 碱基切除修复 核苷酸切除修复(切除突变的碱基和核苷酸片段) DNA直接修复(修复嘧啶

5、二体或甲级化DNA)11.DNA复制涉及的酶原核DNA聚合酶 真核DNA聚合酶 DNA连接酶 解链酶 DNA拓扑异构酶 单链结合蛋白(SSB蛋白)12.大肠杆菌的DNA聚合酶 半不连续复制 冈崎片段DNA复制只能沿3-5复制,即沿5-3合成(DNA聚合酶方向),复制的两条新链被分为前导链和后随链。前导链的合成以5-3方向,随着亲代双链DNA解开连续进行复制;后随链在合成时,一段亲本DNA单链首先暴露出来,以与复制叉移动相反的方向按5-3方向合成一系列不连续的冈崎片段再连成完整的后随链。13. DNA复制(真核不考)复制的引发;DNA链的延伸;DNA复制的终止。DNA解旋酶,单链结合蛋白(SSB

6、:保证解旋酶解开的单链持续存在),DNA拓扑异构酶(消除解链造成的正超螺旋的堆积,消除阻碍解链继续进行的这种压力,使复制得以延伸),引发酶(引物酶),DNA连接酶(连接冈崎片段),DNA聚合酶。思考题1,染色体具备哪些作为遗传物质的特性?答:1,分子结构相对稳定;2,能够自我复制,使得亲子代之间保持连续性;3,能够指导蛋白质的合成,从而控制整个生命活动的过程;4,能够产生可遗传的变异。 2,什么是核小体?简述其形成过程。 答:核小体是染色质的基本结构单位,由200bpDNA和组蛋白八聚体组成。形成过程:核小体是由H2A、H2B、H3、H4各两个分子生成的八聚体和由大约200bp的DNA组成的。

7、形成核小体时八聚体在中间,DNA分子盘绕在外组成真核细胞染色体的一种重复珠状结构。 3简述真核生物染色体的组成及组装过程 组成:蛋白质+核酸。组装过程:1,首先组蛋白组成盘装八聚体,DNA缠绕其上,成为核小体颗粒,两个颗粒之间经过DNA连接,形成外径10nm的纤维状串珠,称为核小体串珠纤维;2,核小体串珠纤维在酶的作用下形成每圈6个核小体,外径30nm的螺旋结构;3,螺旋结构再次螺旋化,形成超螺旋结构;4,超螺线管,形成绊环,即线性的螺线管形成的放射状环。绊环再非组蛋白上缠绕即形成了显微镜下可见的染色体结构。4,简述DNA的一、二、三级结构特征。1,DNA的一级结构,就是指4种核苷酸的连接及排

8、列顺序,表示了该DNA分子的化学成分;2,DNA的二级结构是指两条多核苷酸连反向平行盘绕所形成的双螺旋结构;3,DNA的高级结构是指DNA双螺旋进一步扭曲盘绕所形成的特定空间结构。6,原核生物DNA与真核生物有哪些不同的特征?(1)DNA双螺旋是由两条互相平行的脱氧核苷酸长链盘绕而成的,多核苷酸的方向由核苷酸间的磷酸二酯键的走向决定,一条是5-3,另一条是3-5。(2)DNA双螺旋中脱氧核糖和磷酸交替连接,排在外侧,构成基本骨架,碱基排列在内侧(3)其两条链上的碱基通过氢键相结合,形成碱基对 意义:该模型揭示了DNA作为遗传物质的稳定性特征,最有价值的是确认了碱基配对原则,这是DNA复制、转录

9、和反转录的分子基础,亦是遗传信息传递和表达的分子基础。该模型的提出是20世纪生命科学的重大突破之一,它奠定了生物化学和分子生物学乃至整个生命科学飞速发展的基石 7,DNA复制通常采取哪些方式。一,线性DNA双链的复制:1,将线性复制子转变为环装或者多聚分子;2,在DNA末端形成发卡式结构,使分子没有游离末端;3,在某种蛋白质的介入下(如末端蛋白,terminal protein),在真正的末端上启动复制。二,环状DNA的复制:1,型;2,滚环形;3,D环形(D-loop)。 8,简述原核生物的DNA复制特点。1,与真核生物不同,原核生物的DNA复制只有一个复制起点;2,真核生物的染色体全部完成

10、复制之前,各个起始点上DNA的复制不能在开始,而在快速生长的原核生物中,复制起始点上可以连续开始新的DNA的复制,变现为虽然只有一个复制单元,但可有多个复制叉;9,真核生物的DNA的复制在那些水平上受到调控?1,细胞生活周期水平调控;2,染色体水平调控;3,复制子水平调控。10,细胞通过哪些修复系统对DNA损伤进行修复?1,错配修复,恢复错配;2,切除修复,切除突变的碱基和核苷酸序列;3,重组修复,复制后的修复,重新启动停滞的复制叉;4,DNA的直接修复,修复嘧啶二聚体和甲基化的DNA;5,SOS系统,DNA的修复,导致突变。 11,什么是转座子?可以分为哪些种类?转座子是存在于染色体DNA上

11、可自主复制和移位的基本单位。转座子可分为两大类:插入序列和复合型转座子。 12,请说说插入序列与复合型转座子之间的异同。插入序列是最简单的转座子,它不含有任何宿主基因,它们是细菌染色体或质粒DNA的正常组成部分,一般插入序列都是很小的DNA片段,末端带有倒置重复序列; 复合型转座子是一类带有某些抗药性基因的转座子,其两翼往往带有两个或者相同高度同源的IS序列,一旦形成复合转座子,IS序列就不能移动,因为他们的功能被修饰了,只能作为复合体移动。第三章名词解释基因表达:细胞在生命过程中,把蕴藏在DNA中的遗传信息经过转录和翻译,转变成为具有功能的蛋白质分子的过程。转录:拷贝出一条与DNA序列完全相

12、同(除了T-U外)的RNA单链的过程,是基因表达的核心步骤。翻译:以新生的mRNA为模板,把核苷酸三联遗传密码子翻译成氨基酸序列,合成多肽链的过程,是基因表达的最终目的。编码链:与mRNA序列相同的一条DNA链。模板链(反义链):根据碱基互补原则指导mRNA合成的DNA链。1.RNA转录的基本过程*(转录四个阶段)模板识别、转录起始、通过启动子及转录的延伸和终止 1、模板识别阶段主要指RNA聚合酶与启动子DNA双链相互作用并与之相结合的过程。转录起始前,启动子附近的DNA双链分开形成转录泡以促使底物核糖核苷酸与模板DNA的碱基配对。2、转录起始就是RNA链上第一个核苷酸键的产生。3、转录起始后

13、直到形成9个核苷酸短链是通过启动子阶段,通过启动子的时间越短,该基因转录起始的频率越高。4、RNA聚合酶离开启动子,沿DNA链移动并使新生RNA链不断伸长的过程就是转录的延伸。5、当RNA链延伸到转录终止位点时,RNA聚合酶不再形成新的磷酸二酯键,RNA-DNA杂合物分离,这就是转录的终止。2.RNA聚合酶 核心酶 全酶 因子作用RNA聚合酶:大多数原核生物RNA聚合酶的组成是相同的,大肠杆菌RNA聚合酶由2个亚基、一个亚基、一个亚基和一个亚基组成,称为核74心酶。加上一个亚基后则成为聚合酶全酶(holoenzyme),相对分子质量为4.65105。研究发现,由和亚基组成了聚合酶的催化中心,它

14、们在序列上与真核生物RNA聚合酶的两个大亚基有同源性。亚基能与模板DNA、新生RNA链及核苷酸底物相结合。因子可以极大地提高RNA聚合酶对启动子区DNA序列的亲和力,加入因子以后,RNA聚合酶全酶识别启动子序列的特异性总共提高了107倍。因子的作用是负责模板链的选择和转录的起始,转录的起始从化学过程来看是单个核苷酸与开链启动子-酶复合物相结合构成新生RNA的5端,再以磷酸二酯键的形式与第二个核苷酸相结合,起始的终止反映在因子的释放。过去认为二核苷酸的形成就是转录起始的终止,实际上,只有当新生RNA链达到6-9个核苷酸时才能形成稳定的酶-DNA-RNA三元复合物,才释放因子,转录进入延伸期。真核

15、生物RNA聚合酶3.原核生物RNA聚合酶*全酶:核心酶+因子+亚基 与DNA上启动子结合,合成RNA链。核心酶:RNA链的延伸。因子:负责模板链的选择和转录的起始,是酶的别构效应物,使酶专一性识别模板上的启动子。4.启动子*与转录起始 转录单位 转录复合物:二元复合物、三元复合物. 启动子(promoter): 一段位于结构基因5端上游区的DNA序列,能活化RNA聚合酶,使之与范本DNA准确地相结合并具有转录起始的特异性。 转录单位(transcription unit):是一段从启动子开始至终止子结束的DNA序列,RNA聚合酶从转录起点开始沿着模板前进,直到终止子为止,转录出一条RNA链。

16、转录复合物如何形成(思考题中)5.RNA聚合酶与启动子区的结合(识别与结合过程) 启动子:强弱(决定因素) 10区35区序列 第一个核苷酸的距离(以原核生物为主)1 RNA聚合酶并不直接识别碱基对本身,而是通过氢键互补的方式加以识别。在RNA聚合酶与启动子相互作用的过程中,聚合酶首先与启动子区闭合双链DNA相结合,形成二元闭合复合物,然后经过解链得到二元开链复合物,酶分子以正确的取向与解链后的有关单链相互作用,形成开链复合物。 2 一旦RNA聚合酶成功地合成9个以上核苷酸并离开启动子区,转录就进人正常的延伸阶段。所以,通过启动子的时间代表一个启动子的强弱。一般说来,通过启动子的时间越短,该基因

17、转录起始的频率也越高。 3 -10位的TATA区和-35位的TTGAGA区是RNA聚合酶与启动子的结合位点,能与因子相互识别而具有很高的亲和力。 在原核生物中,-35区与-10区之间的距离大约是1619bp,小于15bp或大于20bp都会降低启动子的活性。 在细菌中常见两种启动子突变,一种叫下降突变(down mutation),如果把Pribnow区从TATAAT变成AATAAT就会大大降低其结构基因的转录水平;另一类突变叫上升突变(up mutation),即增加Pribnow区共同序列的同一性。6.原核生物和真核生物mRNA的特征比较 (差异) 帽子-对应功能 转录终止的两种方法 mRN

18、A的剪切 如何识别内含子、剪切体、编辑序 区别在思考题中 帽子的功能 :1) 对翻译起识别作用-为核糖体识别RNA提供信号 Cap0 的全部都是识别的重要信号 Cap1,2 的甲基化能增进识别 2)增加mRNA 稳定性,使5端免遭外切核酸酶的攻击 3)与某些RNA病毒的正链合成有关(Cap1、Cap2 ) 除帽子结构外的Euk.mRNA内部甲基化m6A形式 Poly A尾巴 3、 poly(A) 的功能 1) 可能与核质转运有关 2) 与mRNA的寿命有关 3) 与翻译有关 a、 缺失可抑制体外翻译的起始 b、 胚胎发育中,poly(A) 对其mRNA的翻译有影响(非poly(A) 化的为储藏

19、形式) c、对含 poly(A) 的mRNA 失去 poly(A) 可减弱其翻译 4) poly(A) 在分子生物学实验中有很大应用价值 a.也可将 oligo (dT) 与载体相连,从总体RNA中分离纯化mRNA b.用寡聚dT(oligo (dT)为引物,反转录合成 cDNA 转录终止主要有两种方式:不依赖于因子:核心酶靠终止转录的特殊信号(内在)终止子终止基因转录。依赖于因子:终止位点的DNA序列不能诱导转录的自发终止,加入了大肠杆菌因子后才能准确地终止转录。 mRNA的剪接:pre-mRNA剪接,类和类自剪内含子。RNA剪接由两布转酯反应完成,两步反应使mRNA前体某些磷酸二酯键断开,

20、并形成一些新的磷酸二酯键。 外显子:基因中有编码蛋白质功能的部分叫外显子(真核生物的结构基因上,能够为特定的蛋白质编码的DNA序列) 内含子:真核生物的结构基因上,不能为特定的蛋白质编码的DNA序列。内含子被转录成RNA,但是接着就被剪切掉,因此内含子不编码蛋白质。剪接体:snRNA和核内蛋白质构成的小分子核糖核蛋白体, 能结合hnRNA内含子区段,使内含子弯曲,3和5靠近,利于剪接。 如何识别 自己书上看 hhh1,什么是编码链?什么是模版链?与 mRNA 序列相同的那条 DNA 链称为编码链(或有意义链) ;另一条根据碱基互补原则指导 mRNA 合成 DNA 链 称为模版链(或反义链) 。

21、2,简述 RNA 转录的概念及其基本过程。RNA 转录:以 DNA 中的一条单链为模板,游离碱基为原料,在 DNA 依赖的 RNA 聚合酶催化下合成 RNA 链的过 程。基本过程:模版识别转录开始转录延伸转录终止。 3,大肠杆菌的 RNA 聚合酶有哪些组成成分?各个亚基的作用如何?大肠杆菌的 RNA 聚合酶由 2 个亚基、一个亚基、一个亚基和一个亚基组成的核心酶,加上一个亚基后则 成为聚合酶全酶。亚基肯能与核心酶的组装及启动子的识别有关,并参与 RNA 聚合酶和部分调节因子的相互作用; 亚基和亚基组成了聚合酶的催化中心,亚基能与模版 DNA、新生 RNA 链及核苷酸底物相结合。 4,什么是封闭

22、复合物、开放复合物以及三元复合物?模版的识别阶段,聚合酶与启动子可逆性结合形成封闭性复合物;封闭性复合物形成后,此时,DNA 链仍然处于双 链状态,伴随着 DNA 构象的重大变化,封闭性复合物转化为开放复合物;开放复合物与最初的两个 NTP 相结合并在这 两个核苷酸之间形成磷酸二脂键后即转变成包括 RNA 聚合酶、DNA 和新生 RNA 的三元复合物。5,简述因子的作用。1,因子的作用是负责模版链的选择和转录的起始,它是酶的别构效应物,使酶专一性识别模版上的启动子;2, 因子可以极大的提高 RNA 聚合酶对启动子区 DNA 序列的亲和力;3,因子还能使 RNA 聚合酶与模版 DNA 上非特异

23、性位点结合常数降低。 6,什么是 Pribnow box?它的保守序列是什么?pribnow box 是原核生物中中央大约位于转录起始位点上游 10bp 处的 TATA 区,所以又称作-10 区。它的保守序 列是 TATAAT。 7,什么是上升突变?什么是下降突变?上升突变:细菌中常见的启动自突变之一,突变导致 Pribnow 区共同序列的同一性增加;下降突变:细菌中常见的 启动子突变之一,突变导致结构基因的转录水平大大降低,如 Pribnow 区从 TATAAT 变成 AATAAT。 8,简述原核生物和真核生物 mRNA 的区别。1,原核生物 mRNA 常以多顺反子的形式存在。真核生物 mR

24、NA 一般以单顺反子的形式存在;2,原核生物 mRNA 的转录与翻译一般是偶联的,真核生物转录的 mRNA 前体则需经转录后加工,加工为成熟的 mRNA 与蛋白质结合生成 信息体后才开始工作;3,原核生物 mRNA 半寿期很短,一般为几分钟 ,最长只有数小时。真核生物 mRNA 的半寿期 较长, 如胚胎中的 mRNA 可达数日;4,原核与真核生物 mRNA 的结构特点也不同,原核生物的 mRNA 的 5端无帽 子结构,3端没有或只有较短的 poly A 结构。9,大肠杆菌的终止子有哪两大类?请分别介绍一下它们的结构特点。大肠杆菌的终止子可以分为不依赖于 p 因子和依赖于 p 因子两大类。不依赖

25、于 p 因子的终止子结构特点:1,位于 位点上游一般存在一个富含 GC 碱基的二重对称区,由这段 DNA 转录产生的 RNA 容易形成发卡式结构。2,在终止位 点前面有一端由 48 个 A 组成的序列,所以转录产物的 3端为寡聚 U。依赖于 p 因子的终止子的结构特点:10,真核生物的原始转录产物必须经过哪些加工才能成为成熟的 mRNA,以用作蛋白质合成的模版。加工包括:(1)5端连接“帽子”结构; (2)3端添加polyA “尾巴”;(3)hnRNA被剪接,把内含子(DNA上非编码序列)转录序列剪掉,把外显子(DNA上的编码序列)转录序列拼接上(真核生物一般为不连续基因)。(4)分子内部的核

26、苷酸甲基化修饰11,简述、类内含子的剪接特点。 类内含子的剪接主要是转酯反应, 即剪接反应实际上是发生了两次磷酸二脂键的转移。 I 类内含子的切除体系中, 在 第一个转酯反应由一个游离的鸟苷或者鸟苷酸介导, 鸟苷或鸟苷酸的 3OH 作为亲核基团攻击内含子 5端的磷酸二 脂键,从上游切开 RNA 链。在第二个转酯反应中,上游外显子的自由 3OH 作为亲核基团攻击内含子 3位核苷酸 上的磷酸二脂键,使内含子被完全切开,上下游两个外显子通过新的磷酸二脂键相连。 类内含子主要存在于真核生物的线粒体和叶绿体 rRNA 基因中,在类内含子切除体系中,转酯反应无需游离鸟苷或 鸟苷酸,而是由内含子本身的靠近

27、3端的腺苷酸 2OH 作为亲核基团攻击内含子 5端的磷酸二脂键,从上游切开 RNA 链后形成套索结构。再由上游外显子的自由 3OH 作为亲核基团攻击内含子 3位核苷酸上的磷酸二脂键,使 得内含子被完全切开,上下游两个内含子通过新的磷酸二脂键相连。 12,什么是 RNA 编辑?其生物学意义是什么?RNA 编辑是指某些 RNA 特别是 mRNA 前体经过插入、删除或取代一些核苷酸残疾等操作,导致 DNA 所编码的遗 传信息的改变,使得经过 RNA 编辑的 mRNA 序列发生了不同于模版的 DAN 的变化。生物学意义:1,校正作用,有些 基因在突变的途中丢失的遗传信息可能通过 RNA 的编辑得以恢复

28、;2,调控翻译,通过编辑可以构建或去除其实密码子 和终止密码子, 是基因表达调控的一种方式; 扩充遗传信息, 3, 能使基因产物获得心得结构核功能, 有利于生物的进化。 13,核酶具有哪些结构特点?核酶的结构特点:核酶的锤头结构特点是:三个茎区形成局部的双链结构;其中含 13 个保守的核苷酸,N 代表任何 核苷酸; 生物学意义:1,核酶是继反转录现象之后对中心法则的有一个重要的修正,说明 RNA 既是遗传物质又是酶; 2,核酶的发现为生命起源的研究提供了新思路-也许曾(经存在以 RNA 为基础的原始生命.第四章1.tRNA的功能 运送携带氨基酸(所在位置 连接方式 参与的酶 酶为何重要) 特征

29、:3端以CCA-OH结束,该位点是tRNA与相应氨基酸结合的位点。 功能:携带氨基酸进入核糖体,在mRNA指导下合成蛋白质。即以mRNA为模板,将其中具有密码意义的核苷酸顺序翻译成蛋白质中的氨基酸顺序。tRNA与mRNA是通过反密码子与密码子相互作用而发生关系的。tRNA以三叶草形二级结构运输氨基酸,氨基酸在受体臂位点上与tRNA结合。氨基酸在氨基酰tRNA合成酶催化下,通过其羧基与tRNA末端上2或3羟基之间形成一个酯键,与特异的tRNA相结合,生成各种氨基酰tRNA。起始tRNA:能特异地识别mRNA模板上起始密码子的tRNA。其他tRNA统称延伸tRNA。校正tRNA:校正无义突变和错义突变的tRNA。 tRNA上与多肽链分解有关的位点:1.3端CCA上的氨基酸承受位点2.辨认氨酰tRNA分解酶的位点3.核糖体辨认位点4.反密码子位点2.翻译阶段 密码子 同工tRNA等概念 简并性 同义密码子 密码子与反密码子之间稀有密码子,改进.蛋白质翻译的阶段翻译的起始:核糖体与mRNA结合并与氨基酰-tRNA生成起始复合物。肽链的延伸:由于核糖体

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