全国流感禽流感监测方案文档格式.docx

1、美国估计每年流感流行造成的损失高达7101670亿美元，每年流感流行会导致515的人群患上呼吸道感染，住院和死亡者主要是高危人群（老年人、慢性病患者）。流感流行造成全球每年出现300500万个严重病例，并导致2550万人死亡。禽流感（Avian Influenza, AI or bird Flu）主要是由A型禽流感病毒H5和H7亚型中具有高致病性毒株所引起的一种禽烈性传染病。主要表现为禽全身系统中毒症状或严重呼吸道综合征，发病突然，迅速蔓延，发病率和病死率高，对工农业生产尤其对畜牧和养禽业会造成严重的损失。禽流感已被国际兽医局列为甲类传染病，我国农业部列为甲类监测传染病。人禽流感是禽流感的一种

2、，是指由禽流感病毒H5N1、H9N2、H7亚型中某些毒株在人群所引起的一种急性呼吸道传染病。它所表现出的临床症状随病原的亚型不同而异：从轻微的上呼吸道卡他症状至出现急性呼吸窘迫综合征和多器官功能衰竭，最终导致死亡。人感染高致病性禽流感被列为我国乙类法定传染病。自从人流感病毒被发现以来，A型流感曾引起了四次世界性大流行，即1918年西班牙流感A （H1N1），1957年A（H2N2）亚型，1968年A（H3N2）亚型和1977年重现的A（H1N1）亚型流感，事实表明后三次出现的新亚型流感病毒均首发于我国。二十世纪八十年代以来，我国大陆还先后从动物中分离出C型、禽源马2亚型（H3N8）和对水禽具有

3、致病性的H5N1亚型流感病毒，并发现禽流感（H9N2）能直接感染人。1988年以来，大多数流感病毒的新变种也首发于我国，世界卫生组织（WHO）每年公布的流感疫苗病毒株大多数来自我国，因此我国被全世界公认为流感的多发地，许多流感专家推测下次流感大流行首发地最大可能在我国。2003年底以来，我国大陆及亚洲多个国家和地区先后暴发了H5N1、H5N2和H7N7亚型高致病性动物禽流感，并且H5N1毒株在泰国、越南和柬埔寨发生多起人感染疫情，引起了国际社会的高度关注。流感为第一个实行全球性监测的传染病，目前已有80多个国家、110余个国家/地区流感中心组成了全球流感监测网络。我国于1952年开展流感工作，

4、1957年成立了国家流感中心，1981年恢复参加WHO组织的国际流感监测网。自2000年，中国卫生部与WHO合作，开展了为期五年的流感监测合作项目，建立了覆盖23个省，以流感样病例报告和病毒分离为主的流感监测网络。通过该合作项目的顺利实施，我国流感监测的整体水平有了显着提高。监测是预防控制流感的关键策略和措施之一，也是每年确定流感流行株、推荐疫苗组份、及早发现变异株、对流感疫情预测和预警的基础。目前我国各地流感的监测水平发展极不平衡，难以应对流感大流行的发生，因此加强和完善我国流感监测网络已刻不容缓。为提高我国流感监测网络的整体水平，指导各级各类医疗机构和疾控机构开展流感监测工作，在全国流感监

5、测方案（试行）（卫办疾控发2003136号）的基础上，制定本实施方案，在较长的一段时期内，指导和规范全国流感和人禽流感的监测工作，建立科学、规范、灵敏、高效覆盖全国的流感监测网络，培养一支我国流感监测与防治的专业技术队伍。二、监测目的 1了解、掌握我国流感活动状况及流行动态变化规律。2掌握我国流感每年的流行株及其构成，了解其抗原性和基因特性变异情况，及早发现变异株，为流感流行，尤其是大流行的预警提供依据。3分析我国流感代表株与WHO年度推荐疫苗株的抗原相关性，为我国每年公布流感代表株、推荐疫苗组份和制定流感疫苗的免疫策略提供科学依据。4及时发现人禽流感疫情，防范动物中禽流感疫情向人间传播，为制

6、定人禽流感防治策略和措施提供科学依据。三、监测病例定义和诊断标准（一）流感1流感样病例 发热（体温38），伴咳嗽或咽痛之一者，缺乏其它实验室确定诊断依据。2临床诊断病例3确诊病例（二）人禽流感（H5、H7、H9等亚型）1待查病例4排除病例四、全国流感/人禽流感监测网络全国流感/人禽流感监测网络由各级各类医疗机构、流感样病例监测哨点医院和各级疾病预防控制中心组成。（一）各级各类医疗机构根据中华人民共和国传染病防治法，诊断并报告流感临床诊断病例和确诊病例及人禽流感临床诊断病例和确诊病例。（二）流感样病例监测哨点医院按照哨点医院的选择原则，在全国31个省（自治区、直辖市）选择185家医院组成国家级流

7、感样病例监测哨点医院，同时各省根据现有工作基础和条件，设立155家非国家级流感样病例监测哨点医院，所有哨点医院具体名单见附件1。（三）全国流感/人禽流感流行病学和实验室监测网络 由国家、省、市、县四级疾病预防控制中心组成，并根据“流感监测实验室生物安全分级及生物安全管理规定要求”（见附件2），经中国疾控中心考核认定，实验室监测网络由具备资质的各级疾病预防控制中心流感实验室，共63家组成，具体名单见附件3。五、法定传染病疫情报告1报告内容根据中华人民共和国传染病防治法，流行性感冒和人感染高致病性禽流感分别为丙类和乙类法定传染病，其中流行性感冒报告流感临床诊断和确诊病例，人感染高致病性禽流感报告临

8、床诊断和确诊病例。2责任报告人各级疾病预防控制机构、医疗机构和采供血机构及其执行职务的人员为法定传染病疫情责任报告人。3报告程序、方式和时限法定传染病疫情责任报告人按照流感临床诊断和确诊病例，人禽流感临床诊断和确诊病例的诊断标准进行诊断，并根据卫生部颁布的传染病信息报告工作管理规范中规定的报告程序、方式和时限，通过“疾病监测信息报告管理系统”进行报告。六、流感样病例监测（一）监测时间1北方16省：北京、天津、河北、山西、内蒙古、辽宁、吉林、黑龙江、山东、河南、西藏、陕西、甘肃、青海、宁夏、新疆。2南方15省：上海、江苏、浙江、安徽、福建、江西、湖北、湖南、广东、广西、海南、重庆、四川、贵州、云

9、南。3每年的4月至次年的3月为一个流感监测年度。北方省每年自10月1日所在周开始监测，至次年3月31日所在周结束；北方省中的辽宁、天津和甘肃及南方省全年开展监测。周历按照公历的每周一到每周日编排（见附件4）。（二）哨点医院的选择按照以下原则，在全国选择185家哨点医院，组成国家级流感样病例监测哨点医院网络，开展流感样病例的监测。此外各省还可根据现有工作基础和条件，设立非国家级流感样病例监测哨点医院。1选择原则（1）在各省会城市选择呼吸道病人就诊较多的综合医院和儿童医院各一家。（2）各省在另一人口密度较高、具备一定工作基础，距当地流感监测网络实验室较近的地级市，选择呼吸道病人就诊较多的城市综合医

10、院和儿童医院各一家。（3）在曾发生过动物禽流感疫情或流感暴发疫情较多的农村县选择县中心（人民）医院一家。（4）辽宁、山东、浙江、福建和广东省，另在大连、青岛、宁波、厦门、深圳5个计划单列市，选择呼吸道病人就诊较多的综合医院和儿童医院各一家。（5）各省优先选择现已开展流感样病例监测的哨点医院。（6）工作基础较好的省可适当增加哨点医院数量。2监测诊室的设置（1）城市综合医院在内科门诊和内科急诊开展流感样病例的监测。（2）城市儿童医院在儿内科门诊和儿内科急诊开展流感样病例的监测。（3）农村县中心（人民）医院在内科门诊、内科急诊和儿内科门诊、儿内科急诊同时开展流感样病例的监测。（三）流感样病例的报告1

11、报告内容和程序（1）哨点医院设置监测诊室的医务人员，按照流感样病例的定义，对每天在内科门诊、内科急诊、儿内科门诊、儿内科急诊所有诊室就诊的病例进行诊断，每天登记分年龄组的流感样病例数和门急诊病例就诊总数，填写“ 医院 科门（急）诊流感样病例数和门急诊病例就诊总数原始登记表”（见表1），报医院主管科室。原始登记表中“流感样病例数”和“门急诊病例就诊总数”可分科室、诊室，由各科室确定专人，每日进行登记。（2）哨点医院主管科室，每周一负责将本院各监测诊室上周的“ 医院 科门（急）诊流感样病例数和门急诊病例就诊总数原始登记表”（表1），分诊室录入“中国流感/人禽流感监测信息系统”。2注意事项流感样病例

12、数和门急诊病例就诊总数在每家监测哨点医院的产生来源必须一致。（1）流感样病例数是指当天在内科门急诊和/或儿内科门急诊所有诊室诊断的流感样病例，而不仅是某一诊室（如呼吸内科和/或小儿呼吸内科）的流感样病例。（2）门急诊病例就诊总数是指当天在内科门急诊和/或儿科门急诊所有诊室就诊的全部门急诊病例总数，而不仅是某一诊室（如呼吸内科和/或小儿呼吸内科）的就诊的门急诊病例数。（四）流感样病例病原学监测1实验室条件及生物安全操作要求流感病原学监测在生物安全级实验室进行。（1）流感病毒分离必须在生物安全级实验室的生物安全柜里操作，并遵守相关的生物安全管理规定。（2）红细胞凝集和红细胞凝集抑制试验在生物安全级

13、实验室里操作，并遵守相关的生物安全管理规定。（3）实验室基本条件：具备进行流感病毒分离鉴定所需要的生物安全柜、离心机、CO2培养箱、恒温培养箱、液氮罐、-70低温冰箱以及常规冰箱等配套设备。2标本采集哨点医院监测诊室的医护人员负责采集，或协助当地疾控中心专业人员采集流感样病例的鼻咽拭子等标本，采集人员填写“流感/人禽流感监测病例标本原始登记送检表”（表2），随同所采集标本送全国流感监测网络实验室。（1）采样对象：发病3天内的流感样病例，且没有服用过抗病毒药物。根据就诊ILI病例数的多少，每家哨点医院每周至少采集515份流感样病例的标本。（2）标本采集种类包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和

14、鼻洗液，其中咽拭子、鼻拭子采集后，放入含采样液4ml的采样管中；鼻咽抽取物采集5ml；咽漱液和鼻洗液采集10ml。采集方法详见附件5。（3）标本的运输：标本采集后应在4条件下，尽快（24小时内）运送至全国流感监测网络实验室，未能24小时内送至实验室的，应置-70或以下保存，标本运输方法详见附件5。在县中心（人民）医院采集的流感样病例标本，每日送县级疾控中心，置-70或以下保存。县疾控中心根据标本采集的数量，每两周在冻存条件下，24小时内送至距离较近的流感监测网络实验室。（4）全国流感监测网络实验室的工作人员接到标本后，24小时内将“流感/人禽流感监测病例标本原始登记送检表”（表2）录入到“中国

15、流感/人禽流感监测信息系统”的“流感/人禽流感监测病例标本登记一览表”（见表3） 中。3病毒分离病毒分离培养是流感病原学监测的基础，目前多采用鸡胚和MDCK细胞并用进行流感病毒分离。近年来随着分子生物学技术的发展，发现通过鸡胚所分离的流感病毒，其抗原性与原始标本有所不同，而通过MDCK细胞所分离的流感病毒，其抗原性与原始标本相似。另外由于“O”相毒株的重现，MDCK细胞对“O”相毒株的敏感性远高于鸡胚，所以MDCK细胞已成为流感病毒分离不可缺少的一种宿主系统。但MDCK细胞分离的病毒不能用于疫苗生产。为减少工作量，可先用MDCK细胞进行筛选，阳性后，再将另外一份70或以下冻存的原始标本用鸡胚进

16、行病毒分离。全国流感监测网络实验室收到标本后，应在24小时内进行标本处理和病毒接种，不能及时接种的应置70或以下冻存。（1）标本的处理：标本送至实验室后，立即进行处理。将原始标本一分为三份，一份（40）用于鸡胚接种，一份（30）用于MDCK细胞接种，一份（30）保存待复核。处理方法详见附件5。（2）MDCK细胞的接种和收获将处理后的标本接种于已长单层的MDCK细胞上，每日观察细胞病变，一般为7天。当CPE出现“+”“+”时，即75-100细胞出现病变时进行收获，收获之前可将细胞冻融12次，以提高收获标本的病毒滴度。即使无细胞病变也应于第7天收获。CPE出现时间随感染病毒的型别、毒株的差异、感染

17、量的大小和MDCK细胞的代数而异，一般标本接种后7天还未出现CPE，维持液经HA试验阴性者，继续盲传12代后，HA试验仍为阴性者，则MDCK细胞病毒分离为阴性，标本可弃去。随MDCK细胞传代数的增加，其对流感病毒的敏感性下降。MDCK细胞复苏后连续传15-20代，在间隔期可以用已知滴度的病毒来检验MDCK细胞系的敏感性（具体方法见附件5），若敏感性下降，即可弃去，复苏新细胞。（3）鸡胚的接种和收获将处理后的标本接种于9日龄鸡胚的羊膜腔和尿囊腔，3335培养72小时。分别收获鸡胚尿囊液和羊水。经HA试验阴性者，将羊水和尿囊液混合，继续盲传1代（72小时），如仍为阴性，则鸡胚病毒分离为阴性，标本可

18、弃去。（4）结果录入流感监测网络实验室的工作人员在完成病毒分离后，24小时内将病毒分离结果录入“中国流感/人禽流感监测信息系统”中的“ 流感/人禽流感监测病毒分离、鉴定结果登记一览表”（见表4）中。4病毒鉴定（1）红细胞凝集试验（HA）MDCK细胞或鸡胚收获的标本首先用鸡、豚鼠或人红细胞进行红细胞凝集试验（HA），确定病毒滴度，“O”相毒株采用豚鼠或人红细胞进行HA试验，具体方法见附件5。HA滴度8，进行红细胞凝集抑制（HI）试验；HA滴度8者，继续在敏感的MDCK细胞系或鸡胚上进行传代培养，使其HA滴度8后，再进行HI测定。若传12代后，HA滴度仍8者，可应用B型引物和能区分A型流感病毒不同

19、亚型的引物进行RTPCR鉴定。不具备RTPCR鉴定能力的送国家流感中心进行分离鉴定。（2）红细胞凝集抑制（HI）试验HA试验完成后，用国家流感中心每年提供的抗A（H1N1）、抗A（H3N2）、抗B（Victoria系）和抗B（Yamagata系）4种标准参照血清，进行红细胞凝集抑制（HI）试验，确定病毒的型别和亚型，进行HI试验时，需同时进行4种标准抗原对照。具体方法见附件5。（3）流感监测网络实验室的工作人员在完成病毒鉴定后，当天将鉴定结果录入“中国流感/人禽流感监测信息系统” 中“流感/人禽流感监测病毒分离、鉴定结果登记一览表”（见表4）。5毒株的管理和上送（1）毒株的保存管理 包括国家流

20、感中心在内的全国流感监测网络各实验室，要对所有流感毒株进行登记，应用“中国流感/人禽流感监测信息系统”填写“流感/人禽流感毒株保存记录表”（见表5），以备复核。 毒株鉴定完成后，液体毒株应在70及以下保存3年，干燥管可以长期保存。分离毒株的原始标本保存6个月，在收到国家流感中心复核鉴定报告后，方可弃去。（2）上送国家流感中心的毒株种类 自国家级流感样病例监测哨点医院网络采样，所分离的全部毒株； 自非国家级流感样病例监测哨点医院采样，所分离到的流感病毒，单向血凝抑制效价与国家流感中心提供的标准参照血清相比，有4倍或4倍以上差异的毒株； 自非国家级流感样病例监测哨点医院采样，所分离到的流感病毒，H

21、A滴度8，且不具备RTPCR鉴定能力的毒株。 HA阳性，应用当年国家流感中心提供的标准参照血清进行HI试验，4种血清的HI效价均20的毒株。（3）毒株上送的时限和要求 HA阳性，应用国家流感中心提供的标准参照血清进行HI试验，4种血清的HI效价均20的毒株，应在HI试验结束后24小时内送达国家流感中心； 其余毒株在HI试验完成后，每2周送至国家流感中心； 全国流感监测网络各实验室负责填写“流感毒株送检单”（见表6），将毒株上送至国家流感中心。监测网络中的市（县）级实验室送检毒株时，应同时送各省级疾控中心流感实验室备份。 所送毒株每份不少于3ml，并且无细菌污染。 任何单位和个人，未经卫生部批准

22、，不得与境外直接进行毒株交换。 国家流感中心：电话：0，传真：0，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所流感室，北京宣武区迎新街100号，邮编：100052。6毒株的复核国家流感中心收到毒株后，进行流感病毒型和亚型的复核鉴定。（1）经HA复核，滴度8的，既可进行HI试验，一般毒株2天内完成复核鉴定，并将结果录入“中国流感/人禽流感监测信息系统”中的“国家流感中心流感/人禽流感毒株复核、鉴定一览表”（见表7），进行反馈。用国家流感中心每年提供的抗A（H1N1）、抗A（H3N2）、抗B（Victoria系）和抗B（Yamagata系）4种标准参照血清无法鉴定的特殊毒株，应尽快反馈鉴定结果。（2）经H

23、A复核，滴度8的，继续在MDCK细胞或鸡胚上培养2代，符合HA滴度8的，可进行HI试验。并在完成当天将复核结果录入“中国流感/人禽流感监测信息系统”中的“国家流感中心流感/人禽流感毒株复核、鉴定一览表”（见表7），进行反馈。（3）若经病毒培养2代后，HA滴度仍8者，国家流感中心应用B型引物和能区分A型流感病毒不同亚型的引物进行RTPCR鉴定。（4）国家流感中心在复核、鉴定完成后，填写“国家流感中心流感/人禽流感毒株复核鉴定报告” （表8），向各省和/或送毒株的全国流感监测网络实验室反馈。7、流感病毒抗原性分析国家流感中心对所分离到的流感病毒，采用单向血凝抑制试验和交叉血凝抑制试验进行抗原性分析

24、。（1）单向血凝抑制试验选择不同时间、不同地区分离的毒株，采用近几年抗原性不同的国内标准参照血清及相关抗原和WHO提供的标准参照血清及相关抗原，进行单向血凝抑制试验。单向血凝抑制试验完成后，填写“国家流感中心流感毒株单向血凝抑制试验报告”（见表9），及时向各省和/或送毒株的全国流感监测网络实验室反馈。（2）交叉血凝抑制试验国家流感中心选择不同时间、不同地区分离的毒株，按照HI效价是否与标准参照血清存在4倍及以上差异进行分组，每组各选择一定比例的毒株，采用近几年抗原性不同的国内代表株和WHO公布的疫苗株及其标准参照血清，进行交叉血凝抑制试验，测定抗原比。交叉血凝抑制试验完成后，填写“国家流感中心

25、毒株交叉血凝抑制试验报告”（见表10），及时向各省和/或送毒株的全国流感监测网络实验室反馈。8、流感病毒基因特性分析国家流感中心选择不同时间、不同地区分离的毒株，尤其是抗原比有差异的，按照HI效价是否与标准参照血清存在4倍及以上差异进行分组，每组各选择一定比例的毒株，进行血凝素重链区（HA1）和N基因的核苷酸序列测定，并与当年WHO推荐的疫苗株的核苷酸和氨基酸序列进行比较分析，完成后及时向各省和/或送毒株的全国流感监测网络实验室反馈。七、流感暴发疫情监测（一）暴发疫情定义1流感样病例暴发疫情定义：在某一相对集中的区域内（如村庄、学校、幼托机构、敬老院、工厂、公司、工地等集体单位），一周内，出现

26、30例及以上，或集体单位中10以上的聚集性流感样病例。2流感暴发疫情：根据突发公共卫生事件的分级分类标准进行判断。（二）暴发疫情的发现与报告1疫情发现（1）各级医疗卫生机构，发现本地区在某一相对集中的区域内（如村庄、学校、幼托机构、工厂、公司等集体单位），短时间内出现较多聚集性的流感或流感样病例，要及时向当地疾病预防控制机构报告。（2）各级疾病预防控制机构，要主动和当地教育主管部门联系，建立学校、幼托机构流感或流感样病例聚集性发病的报告渠道。各级各类学校指定的负责本校传染病疫情报告工作的专人或兼职教师一旦发现暴发疫情苗头，应主动向辖区内疾病预防控制机构进行报告，疾病预防控制机构应及时进行调查和

27、处理。（3）在当地流感流行季节，疾病预防控制机构应定期开展主动监测，以早期发现暴发疫情。2疫情报告（1）各级疾病预防控制机构，在接到流感或流感样病例暴发疫情报告后，要及时进行调查处理，并在接到疫情报告后尽快应用“突发公共卫生事件报告管理信息系统”，进行首次报告。（2）在暴发疫情调查处理的过程中，根据疫情进展情况，及时在首次报告的基础上进行进程报告，在暴发疫情结束后，尽快进行结案报告。（3）符合全国突发公共卫生事件应急处理预案中规定的突发公共卫生事件分级标准的流感暴发疫情，则按照相应的规范进行报告。3报告内容报告内容主要包括事件类别、事件名称、报告单位、事件波及人口数、首次报告时间、疫情发生地、

28、是否发生在集体单位（学校）、首例病例发病时间、末例病例发病时间、分年龄组发病和死亡数、标本采集信息、疫情性质等，具体见“流感或流感样病例暴发疫情监测报告表”（见表11）。（三）暴发疫情的调查处理各级疾病预防控制机构应认真做好现场流行病学调查，并根据本地实验室的能力，开展实验室检测工作，尽快明确疫情性质。不具备实验室检测能力的疾控机构，应按规范积极采集标本，送具备相应资质的实验室进行检测。在开展流行病学调查和实验室检测的同时，应采取积极有效的措施，控制疫情的进一步蔓延。1流行病学调查 各级疾病预防控制机构，在接到流感或流感样病例暴发疫情报告后，要及时进行流行病学调查，调查内容参考“流感或流感样病

29、例暴发疫情监测报告表”（表11）。各级疾病预防控制机构负责暴发疫情病例标本的采集。（1）标本采集采集发病3天内病例的咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液标本，且没有服用过抗病毒药物，具体采集方法见附件5。（2）标本的运送采集人员填写“流感/人禽流感监测病例标本原始登记送检表”（见表2），并将标本送至能开展相应检测的实验室。快速检测的标本，可在现场进行检测，或送至具有流感快速诊断试剂盒的疾控机构实验室进行检测。用于病毒分离和RTPCR检测的标本采集后应在4条件下，24小时内运送至全国流感监测网络实验室，未能24小时内送至实验室的，应置-70或以下保存。标本运输方法具体见附件5。（3）全国流感监测网络实验室的工作人员接到标本后，24小时内将“流感/人禽流感监测病例标本原始登记送检表”（表2）录入到“中国流感/人禽流感监测信息系统”中的“流感/人禽流感监测病例标本登记一览表”（见表3）中。3实验室检测（1）实验室检测的目的 核实暴发疫情的实验室诊断，明确是否为流感暴发。 自暴发疫情中分离到流感病毒，对其进行抗原性和基因特性分析。（2）实验室检测方法的选择原则 流感样病例暴发疫情中常用的检测方法有流感快速诊断试剂盒检测、RTPCR检测和病毒分离培养。其中流感快速检测和RTPCR检测可用于早期、快速的实验室检测。 具备流感快速检