显微镜的构造和使用实验报告Word文档格式.docx

1、有一个通光孔。在载物台上有的装有两个金属压夹称标本夹，用以固定标本；有的装有标本推动器，将标本固定后，能向前后左右推动。有的推动器上还有刻度，能确定标本的位置，便于找到变换的视野。调焦装置是调节物镜和标本间距离的机件，有粗动螺旋（coarseadjustment）即粗调节器和微动螺旋（fineadjustment）即细调节器，利用它们使镜筒或镜台上下移动，当物体在物镜和目镜焦点上时，则得到清晰的图像。2光学系统物镜（objective）物镜安装在镜筒下端的转换器上，因接近被观察的物体，故又称接物镜。其作用是将物体作第一次放大，是决定成像质量和分辨能力的重要部件。物镜上通常标有数值孔径、放大倍数

2、、镜筒长度、焦距等主要参数。如：nA030；10；160/017；16mm。其中“nA030”表示数值孔径（numericalaperture，简写为nA），“10”表示放大倍数，“160/017”分别表示镜筒长度和所需盖玻片厚度（mm），16mm表示焦距。目镜（ocularlens）装于镜筒上端，由两块透镜组成。镜把物镜造成的像再次放大，不增加分辨力，上面一般标有7、10、15等放大倍数，可根据需要选用。一般可按与物镜放大倍数的乘积为物镜数值孔径的500700倍，最大也不能超过1000倍的选择。目镜的放大倍数过大，反而影响观察效果。聚光器（condenser）光源射出的光线通过聚光器汇聚成光

3、锥照射标本，增强照明度和造成适宜的光锥角度，提高物镜的分辨力。聚光器由聚光镜和虹彩光圈（irisdiaphragm）组成，聚光镜由透镜组成，其数值孔径可大于1，当使用大于1的聚光镜时，需在聚光镜和载玻片之间加香柏油，否则只能达到10。虹彩光圈由簿金属片组成，中心形成圆孔，推动把手可随意调整透进光的强弱。调节聚光镜的高度和虹彩光圈的大小，可得到适当的光照和清晰的图像。光源（lightsource）较新式的显微镜其光源通常是安装在显微镜的镜座内，通过按钮开关来控制；老式的显微镜大多是采用附着在镜臂上的反光镜，反光镜是一个两面镜子，一面是平面，另一面是凹面。在使用低倍和高倍镜观察时，用平面反光镜；使

4、用油镜或光线弱时可用凹面反光镜。滤光片（filter）可见光是各种颜色的光组成的，不同颜色的光线波长不同。如只需某一波长的光线时，就要用滤光片。选用适当的滤光片，可以提高分辨力，增加影像的反差和清晰度。滤光片有紫、青、蓝、绿、黄、橙、红等各种颜色的，分别透过不同波长的可见光，可根据标本本身的颜色，在聚光器下加相应的滤光片。三、油镜物镜的基本原理微生物学研究用的显微镜的物镜通常有低倍物镜（16mm，10）、高倍物镜（4mm，4045）和油镜（18mm，95100）三种。油镜通常标有黑圈或红圈，也有的以“oI（oilimmer-sion）字样表示，它是三者中放大倍数最大的。根据使用不同放大倍数的目

5、镜，可使被检物体放大10002000多倍。从图-3中可看出油镜的焦距和工作距离（标本在焦点上看得最清晰时，物镜与样品之间的距离）最短，光圈则开得最大，因此，在使用油镜观察时，镜头离标本十分近，需特别小心。使用时，油镜与其他物镜的不同是载玻片与物镜之间不是隔一层空气，而是隔一层油质，称为油浸系。这种油常选用香柏油，因香柏油的折射率n=152，与玻璃相同。当光线通过载玻片后，可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射。如果玻片与物镜之间的介质为空气，则称为干燥系，当光线通过玻片后，受到折射发生散射现象，进入物镜的光线显然减少，这样就减低了视野的照明度（图1-2）。（图1-1）利用油镜不但能增加照明度，更

6、主要的是能增加数值孔径，因为显微镜的放大效能是由其数值孔径决定的。所谓数值孔径，即光线投射到物镜上的最大角度（称为镜口角）的一半正弦，乘上玻片与物镜间介质的折射率所得的乘积，可用下列公式表示：nAnsin式中nA=数值孔径；n=介质折射率；=最大入射角的半数，即镜口角的半数。因此，光线投射到物镜的角度愈大，显微镜的效能就愈大（图-5），该角度的大小决定于物镜的直径和焦距。同时，的理论限度为90，sin90=1，故以空气为介质时（n=1），数值孔径不能超过1，如以香柏油为介质时，则n增大，其数值孔径也随之增大。如光线入射角为120，其半数的正弦为sin60=087，则：以空气为介质时：nA=10

7、87=087以水为介质时：nA=133087=115以香柏油为介质时：nA=152087=132显微镜的分辨力是指显微镜能够辨别两点之间最小距离的能力。它与物镜的数值孔径成正比，与光波长度成反比。因此，物镜的数值孔径愈大，光波波长越短，则显微镜的分辨力愈大，被检物体的细微结构也愈能明晰地区别出来。因此，一个高的分辨力意味着一个小的可分辨距离，这两个因素是成反比关系的，通常有人把分辨力说成是多少微米或纳米，这实际上是把分辨力和最小分辨距离混淆起来了。显微镜的分辨力是用可分辨的最小距离来表示的。式中=光波波长。我们肉眼所能感受的光波平均长度为055m，假如数值孔径为065的高倍物镜，它能辨别两点之

8、间的距离为042m。而在042m以下的两点之间的距离就分辨不出，即使用倍数更大的目镜，使显微镜的总放大率增加，也仍然分辨不出。只有改用数值孔径更大的物镜，增加其分辨力才行。例如用数值孔径为125的油镜时，能辨别两点之间的因此，我们可以看出，假如采用放大率为40倍的高倍物镜（nA=065），和放大率为24倍的目镜，虽然总放大率为960倍，但其分辨的最小距离只有042m。假如采用放大率为90倍的油镜（nA=125），和放大率为9倍的目镜，虽然总的放大率为810倍，但却能分辨出022m间的距离。四、器材显微镜、香柏油、4897.jpgstyle=max-width:450pxwidth=alt=显微

9、镜的构造和使用实验报告title=/乙醇-乙醚混合液、擦镜纸、吸水纸等。细菌三种形态的染色标本。五、操作步骤1观察前的准备（1）1、显微镜从显微镜柜或镜箱内拿出时，要用右手紧握镜臂，左手托住镜座，平稳地将显微镜搬运到实验桌上。（2）将显微镜放在自己身体的左前方，离桌子边缘约10cm左右，右侧可放记录本或绘图纸。（3）调节光照:不带光源的显微镜，可利用灯光或自然光通过反光镜来调节光照，光线较强的天然光源宜用平面镜；光线较弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜，但不能用直射阳光，直射阳光会影响物像的清晰并刺激眼睛。将10物镜转入光孔，将聚光器上的虹彩光圈打开到最大位置，用左眼观察目镜中视野的亮度，转动反

10、光镜，使视野的光照达到最明亮最均匀为止。自带光源的显微镜，可通过调节电流旋钮来调节光照强弱。凡检查染色标本时，光线应强；检查未染色标本时，光线不宜太强。可通过扩大或缩小光圈、升降聚光器、旋转反光镜调节光线。2.低倍镜观察镜检任何标本都要养成必须先用低倍镜观察的习惯。因为低倍镜视野较大，易于发现目标和确定检查的位置。将标本片放置在载物台上，用标本夹夹住，移动推动器，使被观察的标本处在物镜正下方，转动粗调节旋钮，使物镜调至接近标本处，用目镜观察并同时用粗调节旋钮慢慢下降载物台，直至物像出现，再用细调节旋钮使物像清晰为止。用推动器移动标本片，找到合适的目的像并将它移到视野中央进行观察。3高倍镜观察在

11、低倍物镜观察的基础上转换高倍物镜。较好的显微镜，低倍、高倍镜头是同焦的，在转换物镜时要从侧面观察，避免镜头与玻片相撞。然后从目镜观察，调节光照，使亮度适中，缓慢调节粗调节旋钮，慢慢下降载物台直至物像出现，再用细调节旋钮调至物像清晰为止，找到需观察的部位，并移至视野中央进行观察,并准备用油镜观察。4油镜观察（1）用粗调节器将镜筒提起约2cm，将油镜转至正下方。（2）在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油。（3）从侧面注视，用粗调节器将镜筒小心地降下，使油镜浸在香柏油中，其镜头几乎与标本相接，应特别注意不能压在标本上，更不可用力过猛，否则不仅压碎玻片，也会损坏镜头。（4）从接目镜内观察，进一步调节光线

12、，使光线明亮，再用粗调节器将镜筒徐徐上升，直至视野出现物像为止，然后用细调节器校正焦距。如油镜已离开油面而仍未见物像，必须再从侧面观察，将油镜降下，重复操作至物像看清为止。5.观察完后复原下降载物台，将油镜头转出，先用擦镜纸擦去镜头上的油，再用擦镜纸蘸少许乙醚乙醇混合液擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜纸擦拭23下即可，（注意向一个方向擦拭）。将各部分还原，转动物镜转换器，使物镜头不与载物台通光孔相对，而是成八字形位置，再将载物台下降至最低，降下聚光器，反光镜与聚光器垂直，最后用柔软纱布清洁载物台等机械部分，然后将显微镜放回柜内或镜箱中。六、注意事项1.学生使用显微镜固定镜号、位置，填写使用卡，

13、本学期一直使用本台显微镜。2.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏3.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度。4.观察标本时，必须依次用低、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。5.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。6.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。七、实验报告1.油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应特别注意些什么？2.使用油镜时，为什么必须用香柏油？3.镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？4

14、.绘出细菌的几种基本形态。篇三：实验一_显微镜的构造及使用方法实验一显微镜的构造及使用方法1.了解显微镜的构造、性能及成像原理。2.掌握显微镜的正确适用及维护方法。二、实验器材1.显微镜、纱布、绸布2.酵母菌示教标本三、普通光学显微镜简介微生物的最显著的特点就是个体微小，必须借助显微镜才能观察到它们的个体形态和细胞结构。熟悉显微镜并掌握其操作技术是研究微生物不可缺少的手段。显微镜可分为电子显微镜和光学显微镜两大类。光学显微镜包括：明视野显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、偏光显微镜、荧光显微镜、立体显微镜等。其中明视野显微镜为最常用普通光学显微镜，其它显微镜都是在此基础上发展而来的，基本结构相同

15、，只是在某些部分作了一些改变。明视野显微镜简称显微镜。（一）显微镜的构造普通光学显微镜的构造可以分为机械和光学系统两大部分。图1-1显微镜构造1.目镜2.镜筒3.镜臂4.标本片移动钮6.粗细调焦钮7.聚光镜调节钮8.底座9.反光镜10.虹彩光圈11.聚光器12.载物台13.物镜14.转换器1.机械系统：（1）镜座base：在显微镜的底部，呈马蹄形、长方形、三角形等。（2）镜臂Arm：连接镜座和镜筒之间的部分，呈圆弧形，作为移动显微镜时的握持部分。（3）镜筒Tube：位于镜臂上端的空心圆筒，是光线的通道。镜筒的上端可插入接目镜，下面可与转换器相连接。镜筒的长度一般为160mm。显微镜分为直筒式和

16、斜筒式；有单筒式的，也有双筒式的。（4）旋转器nosepiece：位于镜筒下端，是一个可以旋转的圆盘。有34个孔，用于安装不同放大倍数的接物镜。（5）载物台stage：是支持被检标本的平台，呈方形或圆形。中央有孔可透过光线，台上有用来固定标本的夹子和标本移动器。（6）调焦旋钮：包括粗调焦钮coarseadjustmentknob和细调焦钮Fineadjustmentknob，是调节载物台或镜筒上下移动的装置。2.光学系统（1）接物镜objectivelens，常称为镜头，简称物镜，是显微镜中最重要的部分，由许多块透镜组成。其作用是将标本上的待检物进行放大，形成一个倒立的实像，一般显微镜有34和

17、物镜，根据使用方法的差异可分为干燥系和油浸系两组。干燥系物镜包括低倍物镜（410x）和高倍物镜（4045x），使用时物镜与标本之间的介质是空气；油浸系物镜（90100x）在使用时，物镜与标本之间加有一种折射率与玻璃折射率几乎相等的油类物质（香柏油）作为介质。（2）接目镜eyepiecelens：通常称为目镜，一般由23块透镜组成。其作用将由物镜所形成的实像进一步放大，并形成虚像而印入眼帘。一般显微镜的标准目镜是10x。（3）聚光镜condenser：位于载物台的下方，由两个或几个透镜组成，其作用是将由光源来的光线聚成一个锥形光拄。聚光镜可以通过位于载物台下方的聚光镜调节旋钮进行上下调节，以求得

18、最适光度。聚光器还俯有虹彩光圈（Irisdiaphragm）,此调节锥形光拄的角度和大小，以控制进入物镜的光的量。（4）反光镜：反光镜是一个双面镜，一面是平面，另一面是凹面，起着把外来光线变成平行光线进入聚光镜的作用。使用内光源的显微镜就无需反光镜。（5）光源：日光和灯光均可，以日光较好，其光色和光强都比较容易控制，有的显微镜采用装在底座内的内光源。（二）显微镜的成像原理显微镜的放大作用是由物镜和目镜共同完成的。标本经物镜放大后，在目镜的焦平面上形成一个倒立的实像，再经目镜的进一步放大形成一个虚像，被人的眼睛所观察到。图1-2显微镜成像原理（三）显微镜的性能1.分辨率和数值口径衡量显微镜性能好

19、坏的指标主要是显微镜的分辨率，显微镜的分辨率（Resolvingpower）是指显微镜将样品上相互接近的两点清晰分辨出来的能力。它主要取决于物镜的分辨能力，物镜的分辨力是所用光的波长和物镜数值口径的函数。分辨力用镜头所能分辨出的两点间的最小距离表示，距离越小，分辨能力越好。可用公式表示：D?1?2n.A物镜的数值口径（numbericalaperture），简写为（n.A）：表示从聚光镜发出的锥形光柱照射在观察标本上，能被物镜所聚集的量。n.A?nsin?n标本和物镜之间介质的折射率由光源投射到透镜上的光线和光轴之间的最大夹角光线投射到物镜的角度越大，数值口径就越大。如果采用一些高折射率的物质

20、作介质，如使用油镜时采用香柏油作介质，则数值口径增大，从而提高分辩能力。物镜镜筒上标有数值口径，低倍镜为0.25，高倍镜为0.65，油浸镜为1.25。这些数值是在其它条件都适宜的情况下的最高值，实际使用时，往往低于所标的值。2.放大倍数、焦距和工作距离显微镜的放大倍数是武物镜和目镜放大倍数的乘积。放大倍数一样时，由于目镜和物镜搭配不同，其分辨率也不同。一般来说，增加放大倍数应该是尽量用放大倍数高的物镜。物镜的放大倍数越大，焦距越短，物镜和样品之间的距离（工作距离）便越短。（四）显微镜的使用指南1.观察前的准备：显微镜的安置：取放显微镜时应一手握住镜臂、一手托住底座，使显微镜保持直立、平稳。置显

21、微镜于平整的实验台上，镜座距实验台边缘34cm。镜检时姿势要端正。接通电源，根据所用物镜的放大倍数，调节光亮度调节钮、调节虹彩光圈的大小，使视野内的光线均匀、亮度适宜。2.显微观察：（1）接通电源，采用白炽灯为光源时，应在聚光镜下加一蓝色的滤色片，除去黄光。一般情况下，对于初学者，进行显微观察时应遵从低倍镜到高倍镜再到油浸镜的观察程序，因为低倍镜视野较大，易发现目标及确定检查的位置。（2）低倍镜观察，将做好的酵母标本片固定在载物台上，用标本夹夹住，移动推进器使观察对象处在物镜的正下放。旋转旋转器，将10x物镜调至光路中央。旋转粗调焦钮将载物台升起，从侧面注视小心调节物镜接近标本片，然后用目镜观

22、察，慢慢降载物台，使标本在视野中初步聚焦，再使用细调节钮调节图像清晰。通过玻片夹推进器慢慢移动玻片，认真观察标本个部位，找到合适的目的物，仔细观察并记录所观察的结果。调焦时只应降载物台，以免一时的误操作而损坏镜头。注意无论使用单筒显微镜或双筒显微镜均应双眼同时睁开观察，以减少眼睛的疲劳，也便于边观察边绘图记录。（3）高倍镜观察，在低倍镜下找到合适的观察目标并将其移至视野中心，轻轻转动物镜转换器将高倍镜移至工作位置。对聚光镜光圈及视野亮度进行适当调节后微调细调节钮使物像清晰，仔细观察并记录。如果，高倍镜和低倍镜不同焦，则按照低倍镜的调焦方法从新调节焦距。（4）油浸镜观察，在高倍镜或低倍镜下找到要

23、观察的样品区域，用粗调焦钮先降载物台，然后将油镜转到工作位置。在待观察的样品区域加一滴香柏油，从侧面注视，用粗调节钮将载物台小心地上升，使油浸镜浸在香柏油并几乎与标本片相接。将聚光镜升至最高位置并开足光圈。慢慢地降载物台至视野中出现清晰图像为止，仔细观察并作记录。3.显微镜的维护：（1）观察结束后，先降载物台，取下载玻片。（2）用擦镜纸分别擦拭物镜和目镜。（3）用擦镜纸拭去镜头上的油，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留的油迹，最后再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。（4）清洁显微镜的金属部件。（5）将各部分还原，将物镜转成“八”字形，同时把聚光镜将下，以免物镜和聚光镜发生碰撞危险。（6）把显微镜放回原处。四、实验报告1.根据讲义报告，对照实物，熟悉显微镜的构造。2.按显微镜的使用方法，分别用低倍镜和高倍镜对酵母细胞示教标本进行观察。3.哪个物镜的工作距离最短？4.有哪些部件可以调节视野中光的强弱？5.有哪些方法可以提高显微镜的分辨率？6.为什么在用高倍镜和油镜观察标本之前要先用低倍镜进行观察。