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1、1.1.2正交试验数据分析1.2最佳工艺验证试验例子：口服液水提工艺研究 实验目的 本试验采用正交试验设计，利用L9（34）正交表测定出膏率与补骨脂的转移率以确定最佳的提取条件。实验原理 1.对处方中主要含水溶性有效成分的药物，根据“混煎增溶”的原理和传统用药习惯，采用中药制剂中最常用的水煎法提取各药物的有效浸膏。2.采用L9（34）正交表进行设计，出膏率、补骨脂素与异补骨脂素含量之和为指标，对加水量、提取时间、提取次数进行3因素3水平优选，正交试验因素水平表见表1。实验方法1.按处方比例称取药材，置于圆底烧瓶中，连接冷凝管，准备提取；2.正交试验：按L9（34）正交设计表中条件进行提取，滤过

2、，合并提取液，浓缩到一定量（0.056.913.451.0827.1913.604.27误差6.373.19F0.05（2,2）=19.00三、结果分析通过对出膏率进行方差分析，得出A、B、C三个因素均无显著性差异，说明此三个因素对出膏率都没有显著的影响；对出膏率极差分析：影响出膏率的因素顺序为CAB，由K值得出，最佳提取条件：A3B3C3，加10倍水，煎煮3次，每次2小时。 四、补骨脂转移率极差分析KA1=22.96+42.87+67.50=133.32KA2=45.75+61.92+32.75=140.42 KA3=57.11+30.14+69.81=157.07 RA= KA3- KA1

3、=23.74 KB1=22.96+45.75+57.11=125.82 KB2=42.87+61.92+30.14=134.93 KB3=67.50+32.75+69.81=170.06 RB= KB3- KB1=44.24 KC1=22.96+30.14+32.75=85.86 KC2=42.87+45.75+69.81=158.43 KC3=61.92+67.50+57.11=186.52 RC= KC3- KC1=100.66 由RA=23.74、RB=44.24、RC=100.66，得出：RCRBRA因素A极差分析折线图：对补骨脂转移率进行极差分析得出最佳提取条件：五、补骨脂转移率方差

4、分析：（22.96 + 42.87 + 61.92 + 45.75 + 67.50 + 30.14 + 57.11 + 32.75 + 9.81 ）2= 20622.26 S总=（22.962+42.872+61.922+45.752+67.502+30.142+57.112+32.752+9.812）-Q=2342.07 （KA12+KA22+KA32）-Q= 99.00 （KB12+KB22+KB32）-Q= 363.87 （KC12+KC22+KC32）-Q= 1798.83 Se=S总- SA- SB - SC= 80.37 =1.23=4.53 =22.38 补骨脂转移率方差分析方差

5、来源离差平方和方差F值显著性169.93 13.041.09P0.05216.80 14.721.381798.83 42.4111.49156.51 12.51六、结果分析通过对补骨脂转移率进行方差分析，得出A、B、C三因素均无显著性差异，说明A、B、C三因素对补骨脂转移率都没有显著的影响；对补骨脂转移率极差分析：影响补骨脂转移率的因素顺序为CBA，由K值得出，最佳提取条件：结合生产实际，最终确定的最佳工艺为：煎煮两次，第一次8倍水，煎煮1.5小时；第二次6倍水，煎煮1小时。七、验证试验：按暂定的最佳提取工艺制备3批，进行含量测定,测定结果见下表：批号补骨脂含量（mg/ml）平均转移率（%）

6、201011220.237658.510.236158.12201011240.238858.790.235057.8459.00201011270.245260.290.245960.47RSD（%）1.9结果表明：三批转移率的平均值为59.00%，RSD=1.9% 3000，符合药典要求；分离度：与相邻杂质峰分离度R1.5，符合药典规定。2. 对照品溶液的制备：精密称取补骨脂素对照品0.0060g、异补骨脂素对照品0.0077g置50ml容量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度；再精密量取溶液2ml于10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，得补骨脂素浓度为0.0240mg/ml，异补骨脂素浓度为0.0

7、308mg/ml的对照品溶液。3. 供试品溶液的制备：精密量取本品（批号：10121502）10ml于25ml量瓶中，加入甲醇10ml，超声处理（功率150W，频率100kHz）30分钟，放冷，加甲醇定容至刻度，摇匀，离心（转速为每分钟3000转）10分钟，取上清液，滤过，取续滤液，即得。4. 线性：取补骨脂素浓度为0.1200mg/ml，异补骨脂素浓度为0.1540mg/ml的对照品溶液各1、2、4、6ml于10ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，得5个浓度梯度，分别进样20l测定，记录色谱图（见附图1），补骨脂素与异补骨脂素测得浓度和峰面积结果见表1：表1 补骨脂素线性关系考察结果浓度（X）0

8、.01200.02400.04800.07200.1200补骨脂素（Y）2162034377350872447691097118218246641表2 异补骨脂素线性关系考察结果0.01540.03080.06160.09240.1540异补骨脂素（Y）2656398464309489342161351217121633734以浓度X为横坐标，峰面积Y为纵坐标做线性回归，得线性方程为：补骨脂素Y=1.4966108X+218475,r=0.9998；异补骨脂素Y=1.3791108X+505990,r=0.9998；补骨脂素在0.01200.1200mg/ml;异补骨脂素在0.01540.15

9、40mg/ml范围内线性关系良好。5.准确度（加样回收率试验）：精密称取已知含量的样品（批号：10121502，已知浓度补骨脂素为0.0330mg/ml，异补骨脂素为0.0253mg/ml）3、4、5ml各3份，分别精密加入已知浓度的对照品溶液（补骨脂素浓度为0.1200mg/ml与异补骨脂素浓度为0.1040mg/ml）1ml，按1项下方法测定，计算回收率，结果见表3、4：表3 补骨脂素加样回收率结果样品体积（ml）样品中补骨脂素量（mg）加入补骨脂素量（mg）测得量回收率平均RSD0.09900.218899.87100.620.80.2213101.890.2200100.870.132

10、00.251699.650.2525100.390.2528100.650.16500.2851100.120.2854100.330.2872101.83表4 异补骨脂素加样回收率结果异补骨脂素量异补骨脂素量（mg）0.07590.10400.1795 99.6699.830.70.1807 100.810.1792 99.350.10120.2050 99.780.2053 100.110.2042 99.050.12650.2296 99.120.2302 99.730.2314 100.83结果表明，本测定方法的回收率高，平均回收率补骨脂素为100.62%，RSD=0.8% 2.0%,

11、异补骨脂素为99.83%，RSD=0.7% 2.0%，符合含量测定的要求。6.精密度6.1重复性：取供试品（批号：10121502）6份，依1项下方法检测，每次进样20l，得补骨脂素与异补骨脂素的浓度（mg/ml）分别见表5：表5 重复性实验结果补骨脂素（mg/ml）0.03510.02530.03400.0358异补骨脂素0.02640.02610.02650.02720.0271计算得补骨脂素的平均值为0.0352g/ml，RSD=1.9%2.0%，异补骨脂素的平均值为0.0266mg/ml，RSD=1.7%2.0%。结果表明该法重复性良好。6.2 中间精密度实验：取同一批号样品（批号10121502），在两日内，由甲、乙、丙三名操作人员每天分别精密称取样品适量，按3项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液并测定含量。测定结果经统计处理，结果见下表6。表6 中间精密度试验结果操作时间第一天第二天操作人员甲乙丙补骨脂素（mg/ml）0.03750.03770.03840.03820.03850.03880.03780.03810.03890.03870.0391异补骨脂素（mg/ml）0.027