第二章药物鉴别试验.ppt

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第二章药物的鉴别试验,药物分析,第一节鉴别的定义与目的,中国药典2010年版定义定义：

根据药物的分子结构、理化性质，采用物理、化学或生物学方法来判断药物的真伪。

注意：

鉴别试验方法仅证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所标示的药物，而非对未知物进行定性分析。

（目的）,意义：

它是药品质量检验工作中的首项任务，只有在药物鉴别无误的情况下，进行药物的杂质检查、含量测定等分析才有意义。

性质：

药物鉴别试验的试验方法虽有一定的专属性，但不足以确证其结构，因此不能赖以鉴别未知物。

第二节鉴别试验的项目,性状（Description）一般鉴别试验（generalidentificationtest）专属鉴别试验（specificidentificationtest）,

（一）性状,药物的性状（description）反映了药物特有的物理性质，一般包括外观、溶解度和物理常数等。

1.外观：

指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。

2.溶解度：

药典采用“极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶”来描述药品在不同溶剂中的溶解性能。

例子：

CHP2010中盐酸异丙嗪的性状描述：

本品为白色或乳白色结晶性粉末；有微臭，味极苦；有引湿性；遇光渐变色；水溶液显酸性反应。

盐酸异丙嗪片的性状描述：

本品为糖衣片，除去包衣后显白色。

色泽,晶型,聚集状态,气味,其它,盐酸异丙嗪（英语：

Promethazine，又名盐酸普鲁米近（PromethazineHydrochloride）或非那根（Phenergan））是一种常见的止咳药物，是一种抗组织胺药，能竞争性阻断组胺H1受体，对抗组胺所致之毛细血管扩张，并降低其通透性。

因此，能够平复因为气管受刺激而引起的咳嗽。

解热镇痛药,3.物理常数:

不仅对药品具有鉴别意义，也反映了该药品的纯杂程度。

药典收载的物理常数包括：

相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。

（1）熔点：

固体液体的温度,在一定波长与温度下，偏振光透过长1dm且每1mL中含有旋光性物质1g的溶液时测得的旋光度。

作用：

反映手性药物特性及其纯度的主要指标，用以区别药品、检查纯度或测定制剂的含量。

维生素C的比旋度测定：

20.521.5,例子,手性,

（2）比旋度,为比旋度；为旋光度；l为光程长短（dm）；c为每100ml中含有干燥品物质重量（g）,（3）吸收系数：

在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数。

有两种表示方式：

摩尔吸收系数和百分吸收系数。

后者是中国药典收载的方法，它是指在一定波长下，溶液浓度为1（W/V），厚度为lcm时的吸收度，用表示，用于考查药品的质量，定量分析。

13/45,几种常见喹诺酮类药物的紫外吸收特征,常见的氟喹诺酮类药物,喹诺酮类结构通式,A、B环稠合而成A环：

芳香杂环，4-酮-3-羧酸吡啶衍生物X：

C原子或杂原子N：

有取代基B环：

芳环、杂环（含取代基）,

（二）一般鉴别试验（generalidentificationtest）,依据某一类药物的化学结构或理化性质的特征，通过化学反应来鉴别药物的真伪。

无机药物：

药物中的阴离子和阳离子的特殊反应；有机药物：

典型的官能团反应。

一般鉴别试验只能证实是某一类药物，而不能证实是哪一种药物。

通常一般鉴别试验不适用于数种化学药物的混合物鉴别或在有干扰物质存在时鉴别。

一般鉴别试验项目,丙二酰脲类：

苯巴比妥芳香第一胺类：

对乙酰氨基酚托烷生物碱类：

硫酸阿托品有机酸盐：

无机金属盐类：

无机酸盐：

有机氟化物类：

氟康唑,钠、钾、锂、镁、铁、钙、。

水杨酸、苯甲酸等,亚硫酸、亚硫酸氢盐等,苯巴比妥：

用作镇静和催眠药物，适用于治疗神经过度兴奋引起的失眠症，能引起安稳的睡眠。

但不宜长期服用，因其会引起全身无力、呕吐、头痛等副作用。

对乙酰氨基酚：

镇痛解热药。

常用于发热、头痛和其他轻微疼痛。

硫酸阿托品：

抗胆碱药，用于胃肠道、胆绞痛，散瞳检查验光，角膜炎，有机磷农药中毒、感染性休克等综合症的治疗。

氟康唑：

是治疗真菌感染的一种药物，为广谱抗真菌药，对人和动物的真菌感染均有治疗作用，目前市场上有片剂、胶囊、粉针剂和注射液几种剂型。

1.有机氟化物（P72）,有机氟化物变成无机氟化物,氧瓶燃烧法是将试样包在无灰滤纸内，点燃后，立即放入充满氧气的燃烧瓶中，以铂丝（或镍铬丝）作催化剂，进行燃烧分解，燃烧产物被预先装入瓶中的吸收液吸收，试样中的卤素、硫、磷、硼、金属分别形成卤离子、硫酸根离子、磷酸根离子、硼酸根离子及金属氧化物而被溶解在吸收液中。

然后，根据各个元素的特点采用一般方法（通常是容量法）来测定其中的各个元素的含量。

2.有机酸盐,FeCl3反应:

加稀HCl，即析出白色水杨酸沉淀；分离，沉淀溶于醋酸铵溶液。

中性时呈红色,酸性时呈紫色,水杨酸盐,取供试品中性溶液，置洁净的试管中，加氨制硝酸银试液数滴，置水浴中加热，即生成游离银并附在试管内壁形成银镜。

酒石酸盐,3.芳香第一胺类:

橙黄到猩红色,4.托烷生物碱类:

Vitali反应,托烷生物碱均有莨菪酸结构,醌型产物,Vitali反应,莨菪酸的特征反应,硫酸阿托品-生物碱类抗胆碱药,临床应用,内脏（特别是胃肠）绞痛扩瞳、遗尿、盗汗、流涎症、缓慢性心律失常、抗休克有机磷农药（胆碱酯酶抑制剂）中毒等,-羟甲基苯乙酸,5.无机金属盐:

焰色反应鉴定。

（P74）钠黄钾紫钙砖红钡黄绿,另外铵盐的检测:

6.无机酸根的鉴别:

氯化物:

硝酸银鉴定法以及二氧化锰氧化法硫酸盐:

氯化钡鉴定法以及醋酸铅鉴定法以及盐酸排除法硝酸盐:

硫酸及硫酸亚铁显棕色法与铜反应生成红棕色蒸气高锰酸钾排除法,（三）专属鉴别试验,是证实某一种药物的依据，它是根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性的不同，选用某些特有的灵敏定性反应，来鉴别药物真伪。

在第六章以后会详细讲解。

例子:

同属巴比妥类,使溴褪色,硫化铅沉淀,注意与一般鉴别试验的区别共性中找寻个性差异,加碳酸钠试液煮沸后放冷，加过量稀硫酸，析出白色沉淀，并有醋酸臭味,+H2SO4,CH3COOH,药物鉴别,一般鉴别,专属鉴别,以某些类别药物的共同化学结构为依据,根据其相同的物理化学性质进行药物真伪的鉴别,可以区别不同药物类别。

在一般鉴别的基础上,利用各种药物化学结构的差异来鉴别药物,可以区别同类药物或具有相同化学结构部分的各个药物单体。

第三节鉴别方法,化学鉴别法,呈色反应鉴别法,沉淀生成反应鉴别法,荧光反应鉴别法,气体生成反应鉴别法,测定生成物的熔点,使试剂褪色的鉴别法,维C,应用少,原则：

反应迅速、现象明显，具有明确的原理,1.呈色反应鉴别法：

系指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。

在鉴别试验中最为常用的反应类型有：

（1）三氯化铁呈色反应：

一般都含有酚羟基或水解后产生酚羟基；

（2）异羟酸铁反应：

一般多为芳酸及其脂类、酰胺类；,（3）茚三酮呈色反应：

氨基酸及氨基糖苷；（4）重氮化一偶合显色反应：

一般都有芳伯氨基或能产生芳伯氨基；,例：

葡萄糖的鉴别呈色反应,取本品约0.2g，加水5ml溶解后，缓缓滴入微温的碱性酒石酸铜试液中，即生成氧化亚铜的红色沉淀,斐林（Fehling）试验斐林溶液是含硫酸铜和酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液，它能使脂肪醛和还原性糖发生氧化，同时生成红色氧化亚铜沉淀。

但不能氧化芳香醛和非还原性糖。

2.沉淀生成反应鉴别法：

系指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成不同颜色和具有特殊形状的沉淀。

常用的沉淀反应有：

（1）与重金属离子的沉淀反应：

在一定条件下，药物和重金属离子反应，生成不同形式的沉淀；

（2）与硫氰化铬胺（雷氏盐）的沉淀反应：

这类药物多为生物碱及其盐和具有芳香环的有机碱及其盐；,硝酸银丙二酰脲类、氯化物、微C银镜反应异烟肼氧化亚铜葡萄糖铜盐磺胺类三氯化铁苯甲酸盐重金属离子利多卡因生物碱沉淀剂氮杂环类,3.荧光反应鉴别法,常用的荧光发射形式有以下类型：

（1）药物本身

（2）药物溶液加硫酸使呈酸性后（3）药物和溴反应后（4）药物和间苯二酚反应后在可见光下发射荧光；,4.气体生成反应鉴别法,胺类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物：

经强碱处理后，加热，产生氨气；含硫的药物：

可经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体；含碘有机药物：

经直火加热，可生成紫色碘蒸气；含醋酸酯和乙酰胺类药物：

经硫酸水解后，加乙醇可产生醋酸乙酯的香味。

光谱鉴别法,UV鉴别法,IR鉴别法,NIR鉴别法,AAS鉴别法,NMR鉴别法,MS鉴别法,XRD鉴别法,紫外,近红外,红外,原子吸收,核磁共振,质谱法,X射线衍射,1.红外光谱法专属性强、应用较广（固体、液体、气体样品）主要用于组分单一、结构明确的原料药，特别适合于结构复杂、细微差别同类药物，如磺胺类、甾体激素类和抗生素类药品。

鉴别方法：

中国药典和BP均采用标准图谱对照法；USP采用对照品法。

44/45,2.紫外光谱法,光谱简单，专属性差。

常用的方法有：

（1）测定最大吸收波长或同时测定最小吸收波长；

（2）规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸收度；（3）规定吸收波长和吸收系数法；（4）规定吸收波长和吸收度比值法；（5）经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性。

以上方法可以单个应用，也可几个结合起来使用，以提高方法的专属性。

示例一取色甘酸钠，加磷酸盐缓冲液（pH7.4）溶解并稀释成每1ml中约含10g的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录IVA）测定，在238nm与326nm波长处有最大吸收。

对比吸收光谱特征参数,示例二取对氨基水杨酸钠250mg，加1mol/L氢氧化钠溶液3mL，溶解后转移至500mL量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。

精密吸取5mL溶液置于内含pH7磷酸盐缓冲液12.5mL的250mL量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，即为供试品溶液。

另配制相同浓度缓冲溶液的空白对照液。

于2652nm和2952nm波长处测定吸收度A265和A295，规定A265/A295的值应在1.501.56之间。

对比规定吸收波长的吸收度比值,示例三USP（30）采用对照品法，将样品与对照品按同法处理，在200400nm波长范围内扫描两溶液，要求在相同的波长处有最大吸收、最小吸收和相同的吸收系数，或吸收比在规定的限度内。

阿替洛尔的紫外光谱鉴别：

“本品50g/ml甲醇溶液显示的紫外光谱图与相同条件下测得的USP阿替洛尔参考标准品的紫外光谱图一致”,对比吸收光谱一致性,色谱鉴别法,TLC鉴别法,HPLC鉴别法,GC鉴别法,1.薄层色谱法,ChP2010中对TLC鉴别法的要求,对照品供试品,对照品混合供试品,供试品结构类似品,供试品混合结构类似品,比移值+颜色综合考虑一致性实验中考虑：

供试品/对照品；薄层板；展开剂；显色剂,2.HPLC和GC法,一般规定按供试品含量测定项下的色谱条件进行试验。

要求供试品和对照品色谱峰的保留时间应一致。

内标法时，要求药物与内标物峰的保留时间比值也应相同。

显微鉴别法,主要用于中药及其制剂的鉴别,生物学鉴别法,利用药效学和分子生物学等有关技术来鉴定药物品质的一种方法,主要用于抗生素、生物药物以及中药的鉴别,通常分为生物效应鉴别法和基因鉴别法两大类.,按对象目的不同可分为：

免疫鉴别法、细胞生物学鉴别法、生物效价鉴别法、纯指标鉴别法、DNA遗传标记法，mRNA差异显示鉴别法,指纹图谱与特征图谱鉴别法,通过对所得到的能够体现中药整体特性的图谱识别，提供一种能够比较全面的控制中药质量的方法，从化学物质基础的角度保证中药制剂的稳定和可靠分析方法建立指纹图谱认证方法验证数据处理与分析,虎杖药材对照指纹图谱,22批不同来源虎杖样品经校正后的匹配图,第四节鉴别试验的条件及方法验证,溶液的浓度溶液的温度溶液的酸碱度干扰成分的存在试验时间,方法验证,专属性：

在其他成分存在的情况下，采用的鉴别方法能否正确的鉴别出被测物质的特性；一般选择采用两种以上不同类型的方法耐用性：

测定条件发生微小变动时，测定结果受到的影响程度,阿司匹林和阿司匹林片,阿司匹林-原料药鉴别：

酚羟基显色/酯键水解/红外光谱阿司匹林片-制剂鉴别：

例：

复方硝酸咪康唑与盐酸小檗碱软膏剂鉴别项（TLC法）,两个主药，硝酸咪康唑/盐酸小檗碱简单的角度：

一个展开系统完成二者的鉴别，一块薄层板上点样四个点验证的专属性：

结构类似物的分离,小结,鉴别的定义鉴别试验的项目性状一般鉴别试验专属鉴别试验鉴别方法化学/光谱/色谱/显微/生物学/指纹图谱鉴别条件与方法验证专属性/耐用性,