血脂康与辛伐他汀的治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的研究.docx

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血脂康与辛伐他汀的治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的研究

血脂康与辛伐他汀治疗大鼠脑缺血-再灌注损伤的研究

第31卷第17期

2006年9月

中国中药杂志

ChinaJournalofChineseMateriaMedica

Vo1.31,Issue17

September,2006

血脂康与辛伐他汀治疗大鼠脑缺血一再灌注

损伤的研究

周富友,张进,宋涛,高峰,吴继敏

（1.浙江大学医学院附属第二医院,浙江杭州310009;

2.中南大学附属湘雅医院,湖南长沙410008）

[摘要]目的:

比较血脂康与辛伐他汀对大鼠脑缺血.再灌注损伤的作用,并观察.硝基精氨酸甲酯（—

NAME）干预的影响.方法:

大鼠每日用血脂康（2.4g?

kg）,辛伐他汀（80mg?

kg）或生理盐水连续灌胃2周,

血脂康和辛伐他汀治疗的大鼠各取一半于脑缺血前45min经侧脑室注射L—NAME,后用线栓法制作大鼠脑缺血-再

灌注损伤模型;于再灌注后2,24,48h进行神经功能评分;采用TTC染色法测定脑梗死体积并检测脑组织脂质过氧

化产物丙二醛含量.结果l血脂康与辛伐他汀均能减少大鼠脑缺血.再灌注损伤后的脑梗死体积和脑组织脂质过

氧化产物含量,并改善功能,与溶媒组比较有显着性差异;L-NAME能部分抑制血脂康和完全抑制辛伐他汀的上述

保护作用.结论:

血脂康对大鼠脑缺血.再灌注损伤具有保护作用,其保护作用部分与其含他汀类成分有关.

[关键词]血脂康;他汀类;脑缺血

[中图分类号]R285.5[文献标识码]A[文章编号]1001.5302（2006）17—1447-04

大量研究表明,他汀类药物可降低脑卒中的发

病率,且具有不依赖于其降脂作用的神经保护效

应.血脂康是从特制红曲中提炼精制而成的生

物制剂,富含他汀类的血脂调节剂,其主要成分为

HMG—CoA还原酶抑制剂洛伐他汀,同时伴有少量的

其他他汀类成分,还有多种不饱和脂肪酸,氨基酸和

微量元素.自上市以来,经国内外大量的临床试

验证实,血脂康可安全,稳定,显着地降低血脂,并在

治疗糖尿病,肾病综合征合并血脂异常及脂肪肝等

方面也取得了可喜的疗效,表明血脂康具有多效

性作用.然而血脂康是否与他汀类药物一样具有与

降脂无关的脑保护作用以及相似的疗效,至今未见

文献报道.本试验通过观察血脂康与辛伐他汀对血

脂正常大鼠脑缺血,再灌注损伤的影响,探讨血脂康

用于治疗缺血陛脑损伤的可行性及机制,为临床脑

缺血的治疗提供新的手段.

1材料与方法

1.1动物及分组健康雄性SD大鼠72只,体重

[收稿日期]2005—11-24

[基金项目]浙江省医药卫生科学研究基金项目计划（2005

A051）

[通讯作者]张进,Tel:

（0571）87784810,Fax:

（0571）

87784751,E—mail:

medic@tom.corn

300—350g（浙江大学实验动物中心提供）.随机

分为生理盐水组,辛伐他汀组,血脂康组,辛伐他汀

+￡,硝基精氨酸甲酯（L—NAME）组,血脂康+￡.

NAME组和假手术组,每组各l2只.

1.2大鼠脑缺血一再灌注损伤模型的制备参照

Longa等描述的腔内线栓法,麻醉动物后将3-0手

术尼龙线由右侧颈外动脉插入至右侧大脑中动脉起

始部,阻闭右侧大脑中动脉.阻闭120min后,再次

麻醉动物,将尼龙线缓慢拔出再灌注.术中肛温保

持37—37.5℃.假手术组动物仅分离出颈总动脉

和颈外动脉,不插线栓.

1.3药物与给药方法血脂康（北大维信生产,批

号041202）,辛伐他汀（默沙东公司产品）,非选择性

一

氧化氮合酶（NOS）抑制剂L—NAME（Sigma公

司）,丙二醛（MDA）测定试剂盒（南京建成生物工程

研究所）.用生理盐水3mL将血脂康（1.2g）或辛

伐他汀（40mg）分别配成混悬液,两药分别以每日

2.4g?

kg和80mg?

kg灌胃,假手术组与生理

盐水组给予等体积的生理盐水,连续2周.L—NAME

用生理盐水配制成5mg?

L的溶液,以0.4{xg?

kg剂量,按文献方法[5]于大脑中动脉闭塞前45

min经侧脑室注射给药,注射时间为10min,其余各

组侧脑室注射等体积生理盐水.

.

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ChinaJournaIofChineseMateriaMedica

Vo1.31,lssue17

September,2006

1.4神经功能评价再灌注后,分别在2,24,48h

采用Longa的5级神经缺陷评分法对大鼠进行神经

功能评分J.

1.5脑梗死灶体积测定再灌注48h后,随机将

每组动物的一半（6只）断头取脑置于冰盐水中,去

掉嗅球,小脑和低位脑干,取冠状面按解剖位置均匀

切成约2mm厚脑片,迅速放人2%氯化三苯基四氮

唑（TI’C）溶液（37℃）中闭光孵育30min,然后用

10%甲醛溶液固定,用数码相机拍照,输入计算机,

用图像处理软件（AdobePhotoshop7.0）计算各脑片

梗死面积,各脑片梗死面积之和乘以厚度（2mm）为

总的梗死体积.

1.6脑组织MDA测定再灌注48h后,将每组动

物的另一半（6只）断头取脑,去嗅球,小脑和低位脑

干,用冷生理盐水漂洗,除去血液,滤纸拭干后称重,

加9倍体积预冷的生理盐水,用玻璃匀浆器制成

10%的匀浆.用台式高速离心机4000r?

min离

心15min,取出上清液,一20℃保存.MDA}贝0定按

试剂盒说明书进行.

1.7统计学处理所有数据均表示为元±s.多组

间采用单因素方差分析（ANOVA）,方差分析有显着

差异时,用Student—Newman.Keuls法作两两比较,神

经功能评分采用Kruska1.Wallis非参数检验.

2结果

2.1血脂康,辛伐他汀对大鼠脑缺血一再灌注后神

经缺陷评分的影响各组大鼠除假手术组外,麻醉

清醒后不同程度出现精神状态低靡,提尾时损伤对

侧前肢不能伸直,走路向对侧旋转或倾倒.再灌注

2h各组大鼠神经功能评分无显着性差异;再灌注

24h,生理盐水组大鼠评分无显着变化,而血脂康与

辛伐他汀组大鼠评分比2h时有所降低,与生理盐

水组比较有显着性差异（P<0.01,P<0.05）,加用

L.NAME能抑制血脂康与辛伐他汀对评分的降低作

用,且对辛伐他汀的抑制作用更为显着（P<0.05）;

再灌注48h各组大鼠评分较前2个时间点均有所

降低,血脂康与辛伐他汀组降低尤为明显,与生理盐

水组比较有显着性差异（P<0.05,P<0.01）,L.

NAME抑制血脂康与辛伐他汀对评分的降低作用,

且对辛伐他汀的抑制作用更为显着（P<0.05）.结

果见表1.

表1血脂康,辛伐他汀对大鼠脑缺血.再灌注神经缺陷评分的影响（±s,n=12）

注:

与生理盐水组比IJP<0.05,P<0.01;与对应的不加,J—NAME组比j】P<0.05

2.2血脂康,辛伐他汀对大鼠脑梗死体积及脑组织（P<0.01）,而L—NAME几乎完全取消了辛伐他汀

MDA的影响再灌注48h后,生理盐水组大鼠脑降低MDA的作用,辛伐他汀+L—NAME组与生理盐

梗死体积达（267.6±25.9）mm,假手术组无梗死水组MDA比较无显着性差异.见表2.

灶.血脂康与辛伐他汀与生理盐水比较均明显缩小表2血脂康,辛伐他汀对大鼠脑梗死体积及脑

脑梗死体积（P<0.01）,而血脂康与辛伐他汀组之组织MDA的影响（=ks,n=6）

间无显着性差异;L—NAME部分取消血脂康的保护

作用,而L—NAME几乎完全取消了辛伐他汀的保护

作用,辛伐他汀+L.NAME组与生理盐水组比较无

显着性差异.各组脑缺血.再灌注后大鼠的脑组织

MDA均明显升高,与假手术组比较有显着性差异

（P<0.01）;血脂康和辛伐他汀与生理盐水组比较

均明显减少MDA的升高（P<0.01）,L.NAME对血

脂康降低MDA的作用有所抑制,但无显着性差异;

血脂康+L.NAME组MDA仍明显低于生理盐水组

?

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剂量梗死体积MDA

组别

/g....d一/mm3/nmo1.tug一/g’_.’_.’一

注:

与生理盐水组比P<0.01;与对应的不加L-NAME组比

‘P<0.

05.’P<0.01与假手术组比’P<0.01

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3讨论

临床和实验均表明J,无论血脂水平的高低,

他汀类药物都能降低脑卒中的发生率并对脑缺血有

保护作用.他汀类药物上调脑组织中内皮源性一氧

化氮合酶（eNOS）的表达,促进内皮源性NO的释放

可能是其脑保护作用的关键J.近来发现,血脂康

同样具有非降脂作用的多效性,且能够提高血中

NO水平],因此,作者推测血脂康同样具有与他汀

类药物类似不依赖与降脂的脑保护作用.本研究结

果显示,血脂康与辛伐他汀均能显着减少脑缺血一再

灌注后的梗死体积,并能显着改善脑缺血后的神经

缺陷,两者在所选用剂量上保护效应无显着差异.

脑内的MDA作为自由基与生物膜不饱和脂肪

酸发生脂质过氧化反应的代谢产物,其含量变化可

间接反映脑组织中氧自由基含量的变化和脑组织的

损伤程度.本研究通过检测脑缺血一再灌注后大鼠

脑组织中的MDA发现,血脂康与辛伐他汀用药2周

均能降低脑组织MDA,说明两者的脑缺血损伤保护

作用与降低脑缺血一再灌注后的脂质过氧化程度有

关.研究中还发现,经侧脑室注射L.NAME能基本

取消辛伐他汀的保护作用,与文献报道基本一

致,但只能部分取消血脂康的保护作用.文献表

明,1.2g血脂康中的他汀类含量与20mg辛伐他汀

相当,因此本研究所选用血脂康剂量中的他汀类

足以被L.NAME所阻断.一k述现象提示,血脂康的

脑保护作用可能部分与其他汀类成分产生的NO途

径有关,另外还有不依赖与NO途径的脑保护作用

可能与其他成分有关.血脂康中他汀类以外的哪些

成分,通过何种途径也参与了脑缺血保护作用,尚有

待于进一步研究.

本研究首次在血脂正常大鼠脑缺血.再灌注模

型上观察了血脂康的脑缺血保护作用,表明血脂康

具有不依赖于降脂作用的脑保护效应,其保护作用

除部分与其中的他汀类成分有关,还可能与其他成

分有关.血脂康的安全性高,尚未发现明显不良反

应,因此对其深人的研究很可能扩大该药的临床应

用范围.

[参考文献]

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715.

EffectsofXuezhikangandsimvastatinoncerebral

ischemia-reperfusioninjuryinrat

ZHOUFu—you,ZHANGJin,SONGTao,GAOFeng,WUJi—min

（1.DepartmentofNeurology,SecondAffiliatedHospitalZhejiangUniversityCollegeofMedicine,Hangzhou310039,China;

2.DepartmentofNeurology,XiangyaHospitalofCentre—southUniversity,Changsha410008,China）

[Abstract]Objective:

ToobservetheeffectsofXuezhikangandsimvastatinoncerebralischemia/reperfusioninjuryinrat,as

wellastheinfluencesafterinterventionwithL-NAME.Method:

RatsweregivenorallywithXuezhikangandsimvastatinorvehiclefor

2weeks,andthensubjectedtomiddlecerebralarteryocclusionfor120minusingintraluminalfilamentmode1.L-NAMEwereinjected

?

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Vo1.31,Issue17

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intothelateralventriclesinhalfoftheratstreatedwithXuezhikangandsimvastatin45minbeforetheischemia.Theneurologicaldeft-

citsexaminationswereperformedat2,24,48hafterreperfusion.Afterthelastexaminationtheanimalsweresacrificed,

thei~arct

volumesweredeterminedbyTFCstaining,andMDAlevelswerealsomeasured.Reset:

Xuezhikangandsimvastatinbothsignificantly

reducedtheinfarctvolumeandimprovedthefunctionalrecoverywhencomparedtovehicle.Xuezhikangandsimvastatinbothsignifi-

candydecreasedtheMDAaccumulationafterreperfusion.L-NAMEpartiallyinhibitedtheprotectiveeffectofXuezhikangbutnearly

completelyabolishedtheprotectiveeffectofsimvastatin.Conclusion:

Xuezhikanghasprotectiveeffectsonischemicbraindamagein

rats,whichthebeneficialeffectsarepartlyduetothestatinscomponents.TheothercomponentsinXuezhikangmayalsoaccountfor

theneuroprotectiveeffects,whichisworthfurtherinvestigations.

[Keywords]Xuezhikang;statins;cerebralischemia

[责任编辑古云侠]

粉背南蛇藤中新三萜化合物对RKO细胞

体外抗癌作用的研究

毛建山,王奎武,郑树¨,潘远江

（1.浙江大学医学院附属第二医院消化内科,浙江杭州310009;

2.浙江大学化学系,浙江杭州310027;3.浙江大学肿瘤研究所,浙江杭州310009）

[摘要]目的:

探讨粉背南蛇藤中新的三萜齐墩果-12一烯-3/3,6-二醇对人结肠癌细胞系RKO细胞的体外增

殖抑制作用和诱导凋亡作用.方法:

采用MTT法检测齐墩果-12-烯-313,6e~-二醇对体外培养人结肠癌细胞系RKO

细胞的增殖抑制作用,通过AO/EB双染色荧光显微镜,HE染色光学显微镜,DNA琼脂糖凝胶电泳,流式细胞仪分

析齐墩果-12.烯-313,6e~-二醇对RKO细胞的诱导凋亡作用及对细胞周期的影响.结果:

齐墩果一12-烯一3B,6一二醇

对RKO细胞生长抑制作用具有剂量依赖性和时间依赖性,作用48h时Ic.为（12.20±0.79）lag?

mL～;AO/EB

双染色,HE染色可见典型的肿瘤细胞凋亡改变;10lag?

mL.’的三萜处理RKO细胞48h即可出现明显的DNA梯

带,流式细胞仪可检测到亚二倍体峰,在10—20g?

mL内具有明显的量-效作用关系;并可见RKO细胞G.-G.

期,G-M期的细胞明显减少,而s期细胞无变化.结论:

粉背南蛇藤中新的三萜齐墩果-12-烯-313,6e~-二醇能抑制

人结肠癌细胞系RKO细胞增殖和诱导凋亡.

[关键词]齐墩果-12-烯-3/3,6e~-二醇;粉背南蛇藤;抗肿瘤;细胞凋亡;RKO细胞

[中图分类号]R285.5[文献标识码]A[文章编号]1001—5302（20o6）17—1450434

南蛇藤系卫矛科南蛇藤属CelastrusLinn植物,

我国约有30种,分布于全国各地,多数产自长江以

南地区,又名过山风,黄藤,苦树皮,穿山龙等.药用

其根,藤茎和叶.南蛇藤属普遍含有三萜,倍半萜,

生物碱和黄酮类等化合物,这些成分具有抗氧化活

性,抗炎,抗生育活性,抗肿瘤以及抗艾滋病毒等作

用,南蛇藤属是寻找天然活性成分的重要来源之

[收稿日期]20064）2-10

[基金项目]浙江省中医药科研基金项目（2004C094）

[通讯作者]邵树,Tel:

（0571）87784501,Fax:

（0571）

87074866,E-mail:

zhengshu@u.edu.CB

?

1450?

一

.笔者从粉背南蛇藤Celastrushypoleucus藤茎的

甲醇浸膏中分离到1个新的三萜齐墩果.12.烯一3,

6a.二醇（12一oleanene.3,6a.dio1）,该化合物是首

次从南蛇藤属植物中分得,经CA检索确认是新的

化合物.本研究旨在研究这个新的三萜化合物对人

结肠癌细胞系RKO细胞的体外抗增殖作用和诱导

凋亡作用,为南蛇藤的临床抗肿瘤应用提供依据和

资料.

1材料与方法

1.1药材三萜化合物为齐墩果一12一烯一3B,6a一二

醇（12一oleanene一3B,6a—dio1）,系从粉背南蛇藤（经