石菖蒲挥发油含量测定.docx

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石菖蒲挥发油含量测定

石菖蒲挥发油含量测定

LT

石菖蒲（Acorustatarinowiischott）系天南星科（Araceae）菖蒲属石菖蒲的干燥根茎，中国药典2010年版将其收载其中。

[1]石菖蒲为多年生草本，味辛、苦，性温，归心、肝、肺、脾、胃经，具有健胃祛风、活血止痛、开窍豁痰、醒神益智、消肿、解毒、杀虫之功效。

临床上常用于消化不良、热病神昏、癫狂、痰厥、胸腹胀满、胃肠绞痛、痈疖肿痛、跌打损伤等。

[2]近年来研究发现，挥发油是石菖蒲镇静、催眠、抗惊厥作用的主要有效部位，[3]而挥发油中主要活性成分是细辛醚系列物，主要有甲基丁香酚、顺式甲基异丁香酚、α-细辛醚、β-细辛醚等。

[4]

研究表明，不同产地石菖蒲药材既有较好的相似性，又存在一定差异。

通过对不同产地石菖蒲的挥发性成分和主要挥发性成分的分析结果可知，β-细辛醚、α-细辛醚、γ-细辛醚和顺式-甲基异丁香酚为石菖蒲的主要成分，可作为石菖蒲鉴别和质量评价的必要条件。

[5]

本文主要从石菖蒲药材中β-细辛醚含量进行研究，具体来说就是通过测定石菖蒲中主要成分β-细辛醚的含量，来建立石菖蒲含量标准，控制药品生产中石菖蒲的用量，从而达到质量标准。

常用的含量测定方法为GC-MS联用，虽然GC-MS联用的方法在定性分析方面具有很强的鉴别能力，但应用于定量分析时其选择性，重复性，灵敏度等均与高效液相色谱法有一定差距。

因此本次研究拟建立用高效液相色谱测定石菖蒲中β-细辛醚的含量的方法。

1.实验材料

1.1仪器

岛津高效液相色谱仪（主要部件：

LC-20AD双泵，Sil-20A自动进样系统，SPD-20A检测器，LCsolution色谱工作站。

）

SK250HP型超声波清洗器。

（KUDOS）

XS105电子分析天平。

JFSD-100粉碎机。

具塞锥形瓶、容量瓶、移液管、胶头滴管、漏斗、滤纸、玻璃棒、量筒、烧杯、称量纸、培养皿。

1.2试剂与药材

甲醇为色谱试剂（一级）、水为重蒸水、β-细辛醚对照品、石菖蒲药材。

2.方法与结果

2.1石菖蒲的鉴定

2.1.1来源

石菖蒲为天南星科石菖蒲（Acorustatarinowiischott）的干燥根茎。

2.1.2薄层鉴别

取石菖蒲药材，经粉碎机粉碎并研磨成粉，过筛，取石菖蒲粉末（中粉）0.5g，加乙酸乙酯10ml，浸泡1小时，低温超声处理（功率250w，频率250kHz）20min,滤过，滤液作为供试品溶液；取β-细辛醚对照品用乙酸乙酯配置成1ml含2mg的溶液作为对照品溶液。

取上述试液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚：

乙酸乙酯（12:

1）为展开剂，上行展开，待展开至前沿线时，取出薄层板，晾干，然后喷以5%磷钼酸乙醇溶液，吹热风至斑点显色清晰。

结果薄层鉴别中，石菖蒲供试品与β-细辛醚对照品相对位移时间相同的位置上，均成深蓝绿色斑点，见图1：

图1

2.2HPLC法测定石菖蒲中β-细辛醚含量

2.2.1色谱条件

色谱柱：

PhenomenonexC18（4.6mm×250mm,5μm）；流动相：

水：

甲醇（37:

63）；检测波长253nm；流速：

1ml/min；进样量：

10μL；按上述色谱条件，理论塔板数按β-细辛醚计算应不低于4000，分离度均大于1.5。

[6]

2.2.2石菖蒲药材供试品溶液的制备

将石菖蒲药材经粉碎机粉碎，将石菖蒲粉末过筛，取中粉约0.05g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，摇匀，称定重量，浸泡2小时，超声处理（功率250w，频率250kHz）20min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，滤过，取适量续滤液用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液即为供试品溶液。

2.2.3对照品溶液的制备

精密称取β-细辛醚对照品适量，用甲醇配制成每1ml甲醇含β-细辛醚0.05mg的对照品溶液。

2.2.4线性关系考察

精密称取β-细辛醚对照品适量，用甲醇配制成20μg/ml,40μg/ml,60μg/ml,80μg/ml,100μg/ml的β-细辛醚对照品溶液进行高效液相色谱测定，按色谱柱：

PhenomenonexC18（4.6mm×250mm,5μm）；流动相：

水：

甲醇（37:

63）；检测波长253nm；流速：

1ml/min的色谱条件测定峰面积，以峰面积为Y对进样β-细辛醚浓度X进行线性回归，见表1，图2：

编号进样量/μlβ-细辛醚/μg*ml-1峰面积

11020408890

21040849554

310601296952

410801756336

5101002236187

表1

图2

得回归方程y=22807x-58829,r=0.9997。

实验表明：

β-细辛醚在20-100μg/ml范围内线性关系良好。

2.2.5精密度试验

精密取上述对照品溶液，按色谱条件：

色谱柱：

PhenomenonexC18（4.6mm×250mm,5μm）；流动相：

水：

甲醇（37:

63）；检测波长253nm重复进样6次，见表2：

编号进样量/μL峰面积平均值RSD

1102236187

2102257502

31022319682260204.70.697%

4102279875

5102265994

6102239698

表2

对照品β-细辛醚的峰面积的平均值为2260204.3，RSD为0.697%。

2.2.6稳定性试验

精密取上述供试品溶液，按色谱条件：

色谱柱：

PhenomenonexC18（4.6mm×250mm,5μm）；流动相：

水：

甲醇（37:

63）；检测波长253nm；流速：

1ml/min；进样量：

10μL；分别在室温下放置0、2、4、6、8、10小时测定，见表3：

编号时间/h进样量/μL峰面积平均值RSD

1010826578

2210825466

3410822394822194.30.318%

4610820973

5810819959

61010817796

表3

结果供试品峰面积基本不变，RSD为0.318%，说明样品溶液在10h内基本稳定。

2.2.7重复性试验

按色谱条件：

色谱柱：

PhenomenonexC18（4.6mm×250mm,5μm）；流动相：

水：

甲醇（37:

63）；检测波长253nm；流速：

1ml/min；进样量：

10μL，将同一样品平行做6份含量测定，并计算含量，见表4：

编号进样量/μL峰面积平均值RSD

110819657

210807769

310812597814707.50.577%

410809875

510823850

610814497

表4

结果，石菖蒲药材中β-细辛醚峰面积平均值为814707.5，平均含量为9.590mg/g,RSD为0.577%。

表明本方法有较好的重现性。

2.2.8加样回收率试验

精密称取已知含量的石菖蒲药材6份，按2.2.2供试品制备方法，将石菖蒲药材经粉碎机粉碎，将石菖蒲粉末过筛，取中粉约0.08g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入1.25mg的β-细辛醚，精密加入甲醇25ml，摇匀，称定重量，浸泡2小时，超声处理（功率250w，频率250kHz）20min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，滤过，取适量续滤液用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液即为供试品溶液。

在PhenomenonexC18（4.6mm×250mm,5μm）；流动相：

水：

甲醇（37:

63）；检测波长253nm；流速：

1ml/min的色谱条件下，进行含量测定，见表5：

编号称样量/mg样品含量/μg加入量/μg测定量/μg回收率平均回收率RSD

182.270.3290.5130.82598.0%

278.480.3140.5200.80999.4%

381.560.3260.4940.81999.9%99.85%0.851%

475.540.3020.5120.827101.6%

584.190.3370.5070.849100.6%

681.330.3250.4890.81199.6%

表5

平均回收率为99.85%，RSD为0.851%。

2.2.9样品含量测定

取石菖蒲药材3批，将石菖蒲药材经粉碎机粉碎，将石菖蒲粉末过筛，取

中粉约0.05g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，摇匀，称定

重量，浸泡2小时，超声处理（功率250w，频率250kHz）20min，放冷，再称

定重量，用甲醇补足减失重量，滤过，取适量续滤液用0.45μm微孔滤膜过滤，

滤液即为供试品溶液。

在PhenomenonexC18（4.6mm×250mm,5μm）；流动相：

水：

甲醇（37:

63）；检测波长253nm；流速：

1ml/min色谱条件下进行含量测

定，见图3，图4，表6：

图3石菖蒲样品

图4β-细辛醚对照品

含量测定结果为

批号峰面积β-细辛醚/mg*g-1平均值/mg*g-1

1204108239469.6999.646

8149699.593

1201178254579.7169.730

8278039.744

1203058125809.5659.638

8248769.710

表6

3．讨论

3.1

石菖蒲挥发油中β-细辛醚能明显降低动脉粥样硬化大鼠血脂，改善高黏血症大鼠的血液流变性，能降低心肌缺血大鼠异丙肾上腺素致心肌缺血大鼠内皮素（ET）水平、提高NO的含量，降低心肌组织损伤程度和坏死率，显示了对心血管明显的保护作用。

[7]石菖蒲对豚鼠气管平滑肌具有解痉作用，其有效部位是总挥发油，有效成分主要有α-细辛醚、β-细辛醚等。

[8]石菖蒲镇静安神、抗惊厥的作用在中医治疗癫痫发作中广泛应用。

石菖蒲的总挥发油和水提液是中枢镇静作用的主要有效部位，而石菖蒲挥发油能明显延长士的宁所致惊厥小鼠的潜伏期，减少惊厥次数。

[9]大量实验表明，石菖蒲挥发油既具有兴奋、抗抑郁、抗缺氧作用，又具有镇静、催眠、抗惊厥作用，同时也有较好的益智、脑保护作用。

因此，在大规模生产中，可以考虑将石菖蒲挥发油代替石菖蒲药材。

3.2

石菖蒲根茎中的挥发油，含油率随产地不同差异较大，在0.5％-3.27％之间，挥发油的主要成分为α-细辛醚（0.705％-1．53％）和β-细辛醚（0．035％-0.258％）。

由于石菖蒲的含油率随产地不同差异较大，[10]采用不同地区产的石菖蒲可对实验结果产生影响，例如α-细辛醚、β-细辛醚在浙江金华和河南嵩县产石菖蒲中的含量较高。

可从β-细辛醚方面研究不同地区石菖蒲的差异。

3.3

本次试验中，本人所使用的对照品为β-细辛醚的纯油，而不是β-细辛醚粉末，在计算β-细辛醚重量时，是用β-细辛醚的体积与密度来换算的。

在此过程中往往会有误差的存在，会影响最后的实验结果。

如果此次试验中，β-细辛醚对照品是用粉末来配置，是否可以使结果更精确。

3.4

在石菖蒲挥发油中，不仅存在β-细辛醚，还存在α-细辛醚、γ-细辛醚和顺式-甲基异丁香酚等一系列有效成分。

而近年来研究发现β-细辛醚存在一定的毒性，长期服用会引起中毒，而α-细辛醚的含量较之又少，所以是否有工艺可以使β-细辛醚转化为α-细辛醚。

3.5

本文选用色谱柱：

PhenomenonexC18（4.6mm×250mm,5μm）；流动相：

水：

甲醇（37:

63）；检测波长253nm；流速：

1ml/min.β-细辛醚在15min左右出峰，并与其他成分能够达到基线分离。

本研究对石菖蒲挥发油中β-细辛醚的含量进行了测定，并对线性范围，精密度，稳定性，重复性，加样回收率分别进行了考察，结果表明该方法简便灵敏，准确可靠，回收率合格，可用于β-细辛醚的质量控制。

3.6

将药材用甲醇浸渍过夜,超声波处理不同时间提取,结果30min时含量较高,60min与30min基本一致,故确定超声处理时间为30min。

3.7

近年来已有不少石菖蒲水提液、去油煎剂等药理活性的报道，通过对其兴奋—镇静作用研究和抗抑郁作用的研究，提示其水提液与挥发油具有相反的药理活性，这正符合了石菖蒲具有镇静安神和醒脑开窍的双向作用。

但多年来药理实验着重研究其镇静抗惊作用，而对醒神开窍（兴奋）作用的研究以及其有效部位和作用机理的研究不足，因此应加强对其水溶性部份的有效部位和药理作用机理的研究，为临床合理用药提供依据。

此外鉴于石菖蒲既抗癌又致癌的矛盾性，有必要对其毒性作详细系统的研究，以便正确指导石菖蒲的临床应用。

此外，在中药药理、毒理实验中，经常采用的供试品是水煎浓缩液，汤剂在浓缩过程中成分的变化鲜见报道，挥发油含量较多的药材这一问题显得尤其突出，实验室自制的水煎浓缩液其药学品质与临床患者服用的汤剂存在的差异尚未有实验定论，导致中药实验研究与临床应用的脱离，对此应引起足够的重视。

[11]

参考文献

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典一部[K]．北京：

中国医药科技出版社，2010．

[2]瞿自明，徐方舟．兽医中草药大全[M]．北京：

中国农业科技出版社。

1996．873-875．

[3]胡锦官，顾健，王志旺．石菖蒲及其有效成分对中枢神经系统作用的实验研究[J]．中药药理与l临床，1999，15（3）：

19-21．

[4]刘春海，刘西京，杨华生．石菖蒲挥发油的GC-MS分析[J]．中医药学刊，2006，24（7）：

1280—1281．

[5]曾志，叶雪宁，沈沙婷．不同产地石菖蒲的挥发性成分研究[J]．分析测试学报。

[6]黎奕明，眭道顺．石菖蒲的薄层鉴别及β-细辛醚的含量测定[J]．中药新药与临床药理，2009．07,20（4）369-370．

[7]吴启端，方永奇，陈奕芝，等．石菖蒲挥发油及β-细辛醚对心血管的保护作用[J]．中药新药与临床药理，2005，（4）：

244-247．

[8]杨社华，王志旺，胡锦官．石菖蒲及其有效成分对豚鼠气管平滑肌作用的实验研究[J]．甘肃中医学院学报，2003，20

（2）：

12．

[9]唐洪梅，席萍．石菖蒲不同部位镇静抗致惊厥作用实验研究[J]．中国实验方剂学杂志，2004，10（4）：

45．

[10]魏立平，吴玫涵．用气相色谱法同时测定石菖蒲挥发油中α-细辛醚和β-细辛醚的含量[J]．解放军药学学报，2005，21

（1）：

62．

[11]刘秀平，王亚龙，张宏馨，等．石菖蒲水煎剂对吗啡依赖大鼠戒断症状的治疗作用[J]．中国疼痛医学杂志，2OO7，13（3）：

164.

致谢

感谢苏州雷允上药业有限公司给我提供实习的机会，感谢钱坤老师对我论文撰写的指导，感谢学姐在论文撰写中的帮助，感谢雷允上中心化验室和技术部给予的帮助与支持，感谢校领导在论文撰写过程中的给予的意见与建议。