夏荣龙 河南省医学科技攻关计划项目申请书Word文件下载.docx
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330
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简 表
项目名称
药物活性优化经脐静脉治疗HCC+PVTT作用机制的研究
学科代码
研究领
域
□基础医学 □预防医学 √临床医学 □药学 □其他
技术类
别
□国外技术 □省外技术 □自有技术 □成果 □专利
关键词
肝细胞癌（HCC）;
门静脉癌栓（PVTT）;
脐静脉;
药物活性优化;
起止时间
2009年5月-2012年5月
申请资助金额
10.12万元
申请人情况
姓 名
性别
出生年
月
学历
学位
职称
职 务
夏荣龙
男
63年9
研究生
博士
副教授
业务院长
学术兼职
国际肝胆胰协会中国分会外科委员，河南省微创外科学会学术委员，开封
市医学会普外科专业副主任委员，中国现代外科学杂志编委。
联系地址
河南省开封市西门大街357号
邮 编
475001
编号：
联系电话
办0378-5661830
宅
手 机
13592141650
留学情况
国 年
从事专
业
肝胆外科
E-mail
Xiaronglong63092@163.
com
近3年作为
第一负责人
国家级（ 0
）项
省部级（ 1 ）项
厅级局（ 2 ）项
承担科研课
其他类（
）项 获资助总额（
4 ）万元
题
近3年参加
国家级（
省部级（ ）项
厅级局（ ）项
科研课题
）万元
近3年获得
科技成果奖
国家级（ 0 ）项
）项 获奖励总额（
厅级局（ 0 ）项
2 ）万元
所在单位
名
称
河南大学第一附属医
院
属
性
□独立科研机构□大专院校√医疗机构
通讯地
址
邮编
联系
人
靳艳
电
话
0378-
5661857
传真
0378-5661846
主
本课题采用肝癌切除+门静脉切开取癌栓术联合药物活性优化经脐静脉植泵治疗HCC+ PVTT新模式，研究规范治疗HCC+PVTT的新策略。
① 通过体外细胞实验，检测肝癌细胞增殖、凋亡和细胞分化等指标，探讨亚砷酸+派罗欣+丹参的抗HCC细胞药物活性优化的效果。
②通过裸鼠肝癌的模型，从形态学观察肿瘤体积、抑癌率、抑转移率和从肿瘤学研究肝癌增殖能力、肝癌细胞凋亡、肿瘤血管形成和肝癌转移倾向, 探讨药物活性优化对HCC发展的影响。
③ 通过临床分组实验，从治疗学研究其显效率，
1、3年生存率，二期手术切除率及负作用反应率和从基因学角度运用基因芯片技术高通量观察肿瘤相关基因谱差异性表达，揭示手术联合药物活性
优化经脐静脉治疗HCC+PVTT的作用机制。
要
研
究
内
容
和
意
义
︵
25
字
以
︶
课题负责人情况
性别
年龄
民族
学 历
专业与职称
分 工
45
汉族
肝胆外科副教授
课题主持
研究人员
参加人员情况
段永建
35
岁
汉
本科
肿瘤科副主任医师
科主任
临床实践
任艳彩
女
53
主任医师
病理研究
陈景涛
32
硕士
实验中心
实验师
动物实验
基因芯片
王贵红
主治医师
皇莆深强
来瑞平
28
细胞实验
免疫组化
研究内容和意义（包括学术思想、立论依据、攻关目标和具体内容；
理论意义和应用价值分析）
肝细胞癌（HCC）经门静脉转移易产生门静脉癌栓（PVTT），发生率约为34%-
40%［1、2］,预后恶劣。
临床上HCC+PVTT易出现消化道大出血、肝功能衰竭、顽固性腹水、肿瘤自发性破裂等严重并发症,导致病人病情急剧恶化，乃至死亡。
患者的中位生存率仅为2.7个月。
目前临床实践多积极采用以手术为主的综合治疗，因治疗方案不统一，疗效依然较差[3]。
探讨有效地预防及治疗HCC+PVTT的新策略，是目前肝癌研究的关键课题。
1、HCC+PVTT形成的机制:
我国HCC的特点大多伴有不同程度的肝硬化。
一方面HCC无限增殖能力（PCNA）［4］和凋亡的障碍［5］，使肿瘤细胞过度增殖，并分泌大量的VEGF，促进大量结构和功能异常肿瘤血管的形成，向癌组织周围血管化浸润、转移［6］。
HCC细胞间与血管内皮细胞间粘附分子（ICAM-1）异常表达［7］，有利于癌性血栓的形成。
另一方面肝硬化假小叶形成将无序分隔压迫肝静脉造成肝内血液动力学改变，产生门静脉高压和逆肝血流，使脱落的癌性血栓容易在门静脉内停留、着床。
门静脉回流血液富含消化吸收的营养物质和胰腺内分泌所产生胰岛素、胰高血糖素和生长抑素等,为癌性血栓的肿瘤细胞增殖提供了丰富的营养物质。
此外,门静脉内微环境免疫细胞活性抑制，肿瘤细胞可逃避机体免疫监视，最终形成PVTT［8］。
2、 HCC+PVTT的治疗的现状:
肝癌切除并门静脉取癌栓病人,术后
1、3、5年生存率分别提高为67.7%、40.3%和20.9%。
即使对肿瘤不能切除的病人，行门静脉取栓病人的生存率也高于非手术病人［9］。
表明门静脉取栓，能切实延长生存时间。
而非手术组中, 行介入治疗组的疗效又要优于保守治疗组。
因此，对HCC+PVTT应采取积极有效的治疗措施。
影响HCC+PVTT疗效的主要因素有:
治疗方式、肿瘤数目、肿瘤大小、PVTT病理类型。
就术后生存率而言，主瘤切除并门静脉切开取栓组优于单纯比较门静脉切开取栓组；
单发肿瘤组优于多发肿瘤组；
主瘤10cm以上组明显低于主瘤小于10 cm组；
机化型组低于增生型、坏死型、混合型组主要原因就是癌栓不易清除,易早期复发。
对
HCC+PVTT手术后定期行门静脉或肝动脉化疗可杀灭肝内、门静脉内的残余癌细胞,延缓术后复发。
其术后1、3、5年生存率明显高于非化疗组，但术后采用何种治疗方法最佳有待进一步探讨。
3、本课题研究内容：
设计肝癌切除+门静脉切开取癌栓术联合亚砷酸+派
-13-
罗欣+丹参
药物活性优化经脐静脉治疗HCC+PVTT基础和临床系列实验，研究规范治疗
HCC+PVTT的新策略。
通过人肝癌细胞株BEL-7402的体外细胞实验，探讨亚砷酸+派罗欣+丹参的药物活性优化方案的抗HCC细胞效果；
通过高转移人肝癌裸鼠模型LCI—D20，探讨药物活性优化对HCC发展的影响；
通过HCC+PVTT临床分组对照实验，揭示手术联合药物活性优化经脐静脉治疗HCC+PVTT的分子作用机制。
4、课题研究理论意义和应用价值：
本课题通过基础和临床系列研究，从细胞学、药效学、肿瘤分子生物学、基因学等方面，多角度、多层次地，揭示手术联合药物活性优化经脐静脉灌注治疗HCC+PVTT治疗作用的机制，探讨有效地预防及治疗HCC+PVTT的新策略，达到规范化治疗，易于推广，可转化为成果，有效地降低治疗原发性肝癌综合医疗费用，势必产生不可估量经济效益和社会效益。
国内外研究现状、水平及发展趋势（包括有何国家、单位曾经或正在从事类似的研究，已经达到的水平，存在的主要问题以及发展趋势。
本课题的技术关键，有无创新和特色）
肝细胞癌（HCC）经门静脉转移，易产生门静脉癌栓（PVTT），发生率约为34%-40%,预后恶劣。
目前临床实践因治疗方案不统一，疗效依然较差。
探讨有效地预防及治疗HCC+PVTT的新策略，为医学界所关注的热点和难点问题。
1、探索有效治疗HCC+PVTT的新策略，显得刻不容缓。
本课题通过临床应用研究，致力于采用手术联合药物活性优化经脐静脉植泵灌注治疗HCC+PVTT新模式。
①治疗途径创新的研究：
目前HCC+PVTT的治疗多采取以肝癌切除+门静脉切开取癌
栓术为主综合治疗。
据国内外文献记载以往HCC+PVTT的术后采用诸如静脉化疗、肝动脉及门静脉置泵灌注化疗等方法，临床应用颇有争议［10、11、13］。
静脉化疗副作用大，全身反应严重，国内外学者倾向于局部化疗方案。
肝动脉置泵化疗目前较为通行局部化疗技术，但国内外进一步研究表明：
其难以防治HCC
门静脉系转移特点，形成HCC+PVTT。
门静脉置泵灌注化疗，容易形成血栓，可能造成医源性肝衰，在医学界达成共识。
本课题组研究经脐静脉（门静脉系统的终末枝）置泵灌注化疗技术，一方面增加了肝脏局部的药物浓度，封杀了HCC经门静脉转移易产生PVTT特点；
另一方面克服了门静脉置泵化疗容易形成血栓的缺点，又解除了患者因传统化疗带来痛苦，为HCC+PVTT治疗开拓了一条崭新的途径。
②药物活性优化的研究：
亚砷酸（三氧化二砷、As2O3）是我国开发研制的二类抗肿
瘤新药，其治疗白血病在临床上取得较满意的疗效。
近年来积极尝试实体瘤治疗，特别是HCC的治疗已取得突破［11］。
派罗欣（聚乙二醇化干扰素）具有抑制肿瘤细胞增殖、调节机体免疫、诱导细胞分化和抗肿瘤血管形成；
长期应用可降低与病毒持续状态相关的HCC发生率和HCC+PVTT术后的复发［12］。
丹参脂溶性成分丹参酮可促进肝癌细胞凋亡、干扰肿癌血管的形成；
丹参水溶性成分成分丹参素可抗血小板凝集作用，阻止肿瘤细胞凝集成癌性血栓，抑制PVTT
的形成［13］。
前期预实验研究表明：
通过人肝癌细胞株BEL-7402体外细胞实验，探讨亚砷酸+派罗欣+丹参的药物活性优化方案的抗肿瘤细胞效果。
通过高转移人肝癌裸鼠模型LCI—D20，探讨亚砷酸+派罗欣+丹参的药物活性优化抗肿瘤的机制。
预实验已取得成效，预实验小样本与临床应用研究复杂性的干扰，可能造成偏差，故有待于本课题进一步证实。
2、拟解决的关键问题及关键技术：
① 脐静脉置泵灌注治疗HCC+PVTT技术：
脐静脉属门静脉系统的终末枝，出生后闭锁。
2003年本课题组采用肝癌切除+脐静脉植泵灌注化疗的治疗原发性肝癌获得成功。
术中将静脉灌注管放置脐静脉中，药泵埋于皮下，术后经皮经脐静脉泵灌注药物化疗。
其特点：
一方面增加了肝脏局部的药物浓度，封杀了HCC经门静脉转移易产生PVTT特点；
另一方面克服了门静脉置泵化疗容易形成血栓的缺点，又解除了患者因传统化疗带来痛苦。
通过预实验多次改进，又开展了超声定位下脐静脉置泵灌注亚砷酸治疗原发性肝癌的研究”以及
“基因芯片对亚砷酸经脐静脉灌注治疗原发性肝癌及分子机制的研究” 取得阶段性成果。
目前已完成上百例手术，脐静脉置泵技术悉已成熟，已逐步形成规模优势。
② 抗癌药物活性优化的方案：
2004年以“肝癌切除加脐静脉植泵灌注
治疗原发性肝癌临床研究”成功申请到河南省科技厅的科技攻关项目。
2005年又以“超声定位下，脐静脉置泵灌注亚砷酸治疗原发性肝癌临床研究”申请到河南省教育厅科技攻关项目。
2006年再以“基因芯片对亚砷酸经脐静脉灌注治疗原发性肝癌及分子机制的研究”申请到河南省卫生厅医学科技攻关计划项目。
使其以脐静脉植泵灌注治疗HCC实验成为系列研究，逐步完善HCC+
PVTT综合治疗研究体系。
③ 利用基因芯片技术：
高通量检测凋亡基因、癌基因、抑癌基因、肿瘤转移抑制基因及细胞信号等相关基因谱表达，分析基因谱差异。
通过河南大学天然药物研究所、河南大学医学分子生物学实验室和河南大学植物逆境重点实验室进行交叉学科协作。
3、本课题组的创新和特色
①治疗途径创新：
课题组在完成河南省科委“肝癌切除联合脐静脉植泵灌注治疗原发性肝癌的临床研究”项目的基础上，采用“超声定位下脐静脉置泵灌注亚砷酸治疗原发性肝癌的研究”以及“基因芯片对亚砷酸经脐静脉灌注治疗原发性肝癌及分子机制的研究”取得阶段性成果。
初步研究表明：
1、3年生存率明显提高，肿瘤复发率降低，二期手术切除率提高及负作用反应率明显降低。
为临床治疗更加规范，研究其治疗机制，形成治疗体系，便于推广。
②药物活性优化特色：
在“基因芯片对亚砷酸经脐静脉灌注治疗原发性肝癌及分子机制的研究”的基础上，设计手术联合药物活性优化经脐静脉植泵灌注治疗HCC+PVTT新模式基础和临床系列研究，通过人肝癌细胞BEL-7402体外细胞实验、高转移人肝癌裸鼠模型LCI—D20的肿瘤学研究实验、HCC+PVTT临床分组对照实验的基础和临床系列研究，从细胞学、药效学、肿瘤分子生物学、基因学等方面，多角度、多层次地揭示手术联合药物活性优化经脐静脉灌注治疗HCC+PVTT治疗作用的机制。
预期研究的阶段性成果、最终成果、经济社会效益及其推广应用（包括总目标和分阶段目标。
成果应写明推广应用或转让的可能性及社会、经济效益预测）
㈠研究目标
通过人肝癌细胞株BEL-7402体外细胞实验、高转移人肝癌裸鼠模型LCI—
D20实验和HCC+PVTT临床分组对照实验的基础和临床系列研究，从细胞学、药效学、肿瘤分子生物学、基因学等方面，多角度、多层次地揭示肝癌切除+门静脉切开取癌栓术联合亚砷酸+派罗欣+丹参的药物活性优化经脐静脉植泵灌注治疗HCC+PVTT的作用机制，研究规范治疗HCC+PVTT的新策略。
❖本课题研究内容
1、通过人肝癌细胞株BEL-7402体外细胞实验，对空白实验组、亚砷酸组、派罗欣组、丹参组和药物活性优化组的施行分组对照，检测各实验组对人肝癌细胞株BEL-7402的细胞增殖、凋亡和细胞分化等指标，探讨亚砷酸+派罗欣+
丹参的药物活性优化方案的抗肿瘤细胞效果。
2、通过高转移人肝癌裸鼠模型LCI—D20，对空白对照组、5-Fu阳性对照组和药物活性优化治疗组施行分组对照，从形态学角度观察肿瘤体积、抑癌率、抑转移率和从分子学角度对肝癌的增殖能力、肝癌细胞凋亡、肿瘤血管的形成和肝癌转移倾向进行研究，探讨亚砷酸+派罗欣+丹参的药物活性优化抗肿瘤的机制。
3、通过HCC+ PVTT临床分组对照实验，对肝动脉灌注药物活性优化组、脐静脉灌注阿霉素组和脐静脉灌注药物活性优化组施行前瞻性分组对照，从治疗学角度研究其显效率，1、3年生存率，二期手术切除率及负作用反应率和从基因学角度运用基因芯片技术高通量观察肿瘤相关基因谱差异性表达，探讨手术联合药物活性优化经脐静脉治疗HCC+PVTT的作用机制。
㈢应用成果与社会、经济效益预测
肝癌切除+门静脉切开取癌栓术联合药物活性优化经脐静脉治疗HCC+PVTT新模式，临床上已取得阶段性成果。
1、3年生存率明显提高，肿瘤复发率降低，二期手术切除率提高及负作用反应率明显降低。
为HCC+PVTT治疗开拓了一条崭新的途径。
积极深入研究，形成新治疗体系，可转化为成果，势必产生良好临床疗效、易于推广，有效地降低治疗原发性肝癌综合医疗费用，产生不可估量经济效益和社会效益。
拟采用的研究方法、技术路线（包括研究工作的总体安排、理论计算、实验设计、实验方法和步骤、工艺流程及其可行性论证，预计可能遇到的问题与解决方案）
一、研究方案
第一部分：
体外细胞实验
1、目的：
通过人肝癌细胞株BEL-7402体外细胞实验，对空白实验组、亚砷酸组、派罗欣组、丹参组和药物活性优化组的施行分组对照，检测各实验组对人肝癌细胞株BEL-7402的细胞增殖、凋亡和细胞周期分析等，探讨亚砷酸+派罗欣+丹参的药物活性优化方案的抗肿瘤细胞效果。
2、材料与方法
2-1研究对象:
人肝癌细胞株BEL-7402（中国科学院上海细胞生物学研究所提供）
2-2主要试剂:
亚砷酸注射液为哈尔滨伊达药业有限公司生产。
派罗欣注射液（聚乙二醇化干扰素-a）购自HoffmanRoche公司上海分公司，丹参注射液有上海第九制药厂生产。
RPMI1640:
购自GIBCO RBL公司。
MTT购自华美公司。
细胞凋亡测试剂盒:
购自武汉博士德生物工程有限公司。
-14-
3、研究方法
3-1细胞培养:
常规复苏人肝癌细胞株BEL-7402，在含有100u/ml青霉素、
100u/ml链霉素和10%新生小牛血清的RPMI-1640培养液内，置37 C0 , 5%
C02孵箱中传代培养，每2-3天传代一次，取对数生长期细胞用于试验。
3-2、随机分组原则
①亚砷酸治疗组：
亚砷酸注射液，浓度10μmol/L，观察3天
②派罗欣治疗组：
派罗欣注射液，浓度10μg/L， 观察3天
③丹 参治疗组：
丹 参注射液，浓度0.5mg/L， 观察3天
④药物活性优化组：
亚砷酸浓度10μmol/L+派罗欣浓度10μg/L
+丹参浓度0.5mg/L，观察3天
3-3、 MTT法（四甲基偶氮哇盐比色法）检测各组对BEL-7402细胞增殖抑制情况、计算细胞抑制率和药物的联合作用指数。
采用MTT法观察不同浓度亚砷酸组、派罗欣组、丹参组单独或联合应用的药物活性优化组对BEL-7402细胞生长的抑制作用。
取对数生长期
升级会员 