美国药典USP31无菌检查.docx

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美国药典USP31无菌检查

美国药典USP31-NF26无菌检查法《71》.doc

71STERILITYTESTS无菌检查法

PortionsofthisgeneralchapterhavebeenharmonizedwiththecorrespondingtextsoftheEuropeanPharmacopeiaand/ortheJapanesePharmacopeia.Thoseportionsthatarenotharmonizedaremarkedwithsymbols（）tospecifythisfact.

此通则的各部分已经与欧洲药典和/或日本药典的对应部分做了协调。

不一致的部分用符号（）来标明。

ThefollowingproceduresareapplicablefordeterminingwhetheraPharmacopeialarticlepurportingtobesterilecomplieswiththerequirementssetforthintheindividualmonographwithrespecttothetestforsterility.PharmacopeialarticlesaretobetestedbytheMembraneFiltrationmethodunderTestforSterilityoftheProducttobeExaminedwherethenatureoftheproductpermits.Ifthemembranefiltrationtechniqueisunsuitable,usetheDirectInoculationoftheCultureMediummethodunderTestforSterilityoftheProducttobeExamined.Alldevices,withtheexceptionofDeviceswithPathwaysLabeledSterile,aretestedusingtheDirectInoculationoftheCultureMediummethod.ProvisionsforretestingareincludedunderObservationandInterpretationofResults.

下面这些步骤适用于测定是否某个用于无菌用途的药品是否符合其具体的各论中关于无菌检查的要求。

只要其性质许可，这些药品将使用供试产品无菌检查法项下的膜过滤法来检测。

如果膜过滤技术是不适合的，则使用在供试产品无菌检查法项下的培养基直接接种法。

除了具有标记为无菌通道的设备之外，所有的设备均须使用培养基直接接种法进行检测。

在结果的观测与理解项下包含了复验的规定。

Becausesterilitytestingisaveryexactingprocedure,whereasepsisoftheproceduremustbeensuredforacorrectinterpretationofresults,itisimportantthatpersonnelbeproperlytrainedandqualified.Thetestforsterilityiscarriedoutunderasepticconditions.Inordertoachievesuchconditions,thetestenvironmenthastobeadaptedtothewayinwhichthesterilitytestisperformed.Theprecautionstakentoavoidcontaminationaresuchthattheydonotaffectanymicroorganismsthataretoberevealedinthetest.Theworkingconditionsinwhichthetestsareperformedaremonitoredregularlybyappropriatesamplingoftheworkingareaandbycarryingoutappropriatecontrols.

由于无菌检查法是一个非常精确的程序，在此过程中程序的无菌状态必须得到确保以实现对结果的正确理解，因此人员经过适当的培训并取得资质是非常重要的。

无菌检查在无菌条件下进行。

为了实现这样的条件，试验环境必须调整到适合进行无菌检查的方式。

为避免污染而采取的特定预防措施应不会对任何试图在检查中发现的微生物产生影响。

通过在工作区域作适当取样并进行适当控制，来定期监测进行此试验的工作条件。

ThesePharmacopeialproceduresarenotbythemselvesdesignedtoensurethatabatchofproductissterileorhasbeensterilized.Thisisaccomplishedprimarilybyvalidationofthesterilizationprocessoroftheasepticprocessingprocedures.

这些药典规定程序自身的设计不能确保一批产品无菌或已经灭菌。

这主要是通过灭菌工艺或者无菌操作程序的验证来完成。

WhenevidenceofmicrobialcontaminationinthearticleisobtainedbytheappropriatePharmacopeialmethod,theresultsoobtainedisconclusiveevidenceoffailureofthearticletomeettherequirementsofthetestforsterility,evenifadifferentresultisobtainedbyanalternativeprocedure.Foradditionalinformationonsterilitytesting,seeSterilizationandSterilityAssuranceofCompendialArticles1211.

当通过适当的药典方法获得了某物品中微生物污染的证据，这样获得的结果是该物品未能达到无菌检验要求的结论性证据，即便使用替代程序得到了不同的结果也无法否定此结果。

如要获得关于无菌检验的其他信息，见药品的灭菌和无菌保证<1211>

MEDIA培养基

Preparemediaforthetestsasdescribedbelow,ordehydratedformulationsmaybeusedprovidedthat,whenreconstitutedasdirectedbythemanufacturerordistributor,theymeettherequirementsoftheGrowthPromotionTestofAerobes,Anaerobes,andFungi.Mediaaresterilizedusingavalidatedprocess.

按照下面描述的方法配制实验用培养基；或者使用脱水培养基，只要根据其制造商或者分销商说明进行恢复之后，其能够符合好氧菌、厌氧菌、霉菌生长促进试验的要求即可。

使用经过验证的工艺对培养基进行灭菌操作。

Thefollowingculturemediahavebeenfoundtobesuitableforthetestforsterility.FluidThioglycollateMediumisprimarilyintendedforthecultureofanaerobicbacteria.However,itwillalsodetectaerobicbacteria.Soybean–CaseinDigestMediumissuitableforthecultureofbothfungiandaerobicbacteria.

下面的培养基已经被证实适合进行无菌检查。

巯基醋酸盐液体培养基主要用于厌氧菌的培养。

但其也用于检测好氧菌。

大豆酪蛋白消化物培养基适合于培养霉菌和好氧菌。

FluidThioglycollateMedium巯基醋酸盐液体培养基

L-CystineL-胱氨酸

0.5g

SodiumChloride氯化钠

2.5g

Dextrose（C6H12O6·H2O）葡萄糖

5.5/5.0g

Agar,granulated（moisturecontentnot

exceeding15%）

琼脂，呈颗粒状（水分含量不超过15%）

0.75g

YeastExtract（water-soluble）

酵母提取物（水溶性）

5.0g

PancreaticDigestofCasein

酪蛋白胰酶消化物

15.0g

SodiumThioglycollate巯基乙酸钠

0.5g

orThioglycolicAcid或者巯基乙酸

0.3mL

ResazurinSodiumSolution（1in1000）,

freshlyprepared

刃天青钠溶液（1比1000），新配制

1.0mL

PurifiedWater纯净水

1000mL

MixtheL-cystine,sodiumchloride,dextrose,yeastextract,andpancreaticdigestofcaseinwiththepurifiedwater,andheatuntilsolutioniseffected.Dissolvethesodiumthioglycollateorthioglycolicacidinthesolutionand,ifnecessary,add1Nsodiumhydroxidesothat,aftersterilization,thesolutionwillhaveapHof7.1±0.2.Iffiltrationisnecessary,heatthesolutionagainwithoutboiling,andfilterwhilehotthroughmoistenedfilterpaper.Addtheresazurinsodiumsolution,mix,andplacethemediuminsuitablevesselsthatprovidearatioofsurfacetodepthofmediumsuchthatnotmorethantheupperhalfofthemediumhasundergoneacolorchangeindicativeofoxygenuptakeattheendoftheincubationperiod.Sterilizeusingavalidatedprocess.Ifthemediumisstored,storeatatemperaturebetween2and25inasterile,airtightcontainer.Ifmorethantheupperone-thirdofthemediumhasacquiredapinkcolor,themediummayberestoredoncebyheatingthecontainersinawater-bathorinfree-flowingsteamuntilthepinkcolordisappearsandbycoolingquickly,takingcaretopreventtheintroductionofnonsterileairintothecontainer.

将L-胱氨酸、氯化钠、葡萄糖、酵母提取物、酪蛋白胰酶消化物与纯净水混合，并加热至实现溶解。

将巯基乙酸钠或者巯基乙酸溶解于该溶液，如果需要可再加入1N氢氧化钠，以便在灭菌后该溶液呈pH值7.1±0.2。

如需要则过滤，再次加热该溶液但不得煮沸，并趁热以湿润滤纸将该溶液过滤。

加入刃天青钠溶液，混匀，并将该培养基置于适当容器中，该容器应为培养基提供特定的面积－深度比，以使在培养期末表明氧气摄入的变色部分不超过培养基的上半部分。

使用经过验证的工艺进行灭菌。

如果需要储存该培养基，将其置于无菌、气密容器中，在2至25之间储藏。

如果超过上部三分之一的培养基已经呈粉色，可以用以下方法恢复该培养基一次：

在水浴锅中或者自由流动蒸气中加热该容器，直至粉色消失，并迅速放凉，须小心防止非无菌空气进入到容器中。

FluidThioglycollateMediumistobeincubatedat32.5±2.5.

巯基醋酸盐液体培养基将在32.5±2.5条件下进行培养。

AlternativeThioglycollateMedium替代巯基醋酸盐培养基

PrepareamixturehavingthesamecompositionasthatoftheFluidThioglycollateMedium,butomittingtheagarandtheresazurinsodiumsolution,sterilizeasdirectedabove,andallowtocoolpriortouse.ThepHaftersterilizationis7.1±0.2.Incubateunderanaerobicconditionsforthedurationoftheincubationperiod.

配制与巯基醋酸盐液体培养基成分相同，但省略了琼脂和刃天青钠溶液的混合物，按上述方法灭菌，并在使用前静置至凉。

灭菌后pH值为7.1±0.2。

在厌氧条件下培养，培养时间同培养期。

AlternativeFluidThioglycollateMediumistobeincubatedat32.5±2.5.

替代性巯基醋酸盐培养基将在32.5±2.5条件下进行培养。

Soybean–CaseinDigestMedium大豆-酪蛋白消化物培养基

PancreaticDigestofCasein酪蛋白胰酶消化物

17.0g

PapaicDigestofSoybeanMeal大豆粉木瓜蛋白酶消化物

3.0g

SodiumChloride氯化钠

5.0g

DibasicPotassiumPhosphate磷酸氢二钾

2.5g

Dextrose（C6H12O6·H2O）葡萄糖

2.5/2.3g

PurifiedWater纯净水

1000mL

DissolvethesolidsinthePurifiedWater,heatingslightlytoeffectasolution.Coolthesolutiontoroomtemperature,andadjustthepHwith1Nsodiumhydroxidesothat,aftersterilization,itwillhaveapHof7.3±0.2.Filter,ifnecessarytoclarify,dispenseintosuitablecontainers,andsterilizeusingavalidatedprocedure.Storeatatemperaturebetween2and25inasterilewell-closedcontainer,unlessitisintendedforimmediateuse.

将固体物质溶解于纯净水，轻微加热以实现溶解。

放凉溶液至室温，并用1N氢氧化钠调整pH值，以便在灭菌后其pH值呈7.3±0.2。

过滤，如需要则使之澄清，分装入适合的容器，并用经过验证的程序消毒。

如果不立刻使用，则在2到25之间以无菌且密闭良好的容器保存。

Soybean–CaseinDigestMediumistobeincubatedat22.5±2.5.

大豆-酪蛋白消化物培养基将在22.5±2.5条件下培养。

MediaforPenicillinsorCephalosporins用于青霉素和头孢菌素的培养基

WheresterilitytestmediaaretobeusedintheDirectInoculationoftheCultureMediummethodunderTestforSterilityoftheProducttobeExamined,modifythepreparationofFluidThioglycollateMediumandtheSoybean–CaseinDigestMediumasfollows.Tothecontainersofeachmedium,transferasepticallyaquantityof-lactamasesufficienttoinactivatetheamountofantibioticinthespecimenundertest.Determinethequantityof-lactamaserequiredtoinactivatetheantibioticbyusinga-lactamasepreparationthathasbeenassayedpreviouslyforitspenicillin-orcephalosporin-inactivatingpower.[NOTE—Supplemented-lactamasemediacanalsobeusedinthemembranefiltrationtest.]

当无菌检查培养基用于供试产品无菌检查项下的培养基直接接种法时，按如下内容变更巯基醋酸盐液体培养基和大豆-酪蛋白消化物培养基的制备方法。

向每一种培养基的容器中，以无菌操作转移足够灭活供试样品中所存在抗生素的-内酰胺酶。

使用此前已经对其青霉素或头孢菌素灭活能力进行了测定的-内酰胺酶配制品，来测定灭活该抗生素所必需的-内酰胺酶数量。

[注意：

补充的-内酰胺酶培养基也可以用于膜过滤试验]

Alternatively（inanareacompletelyseparatefromthatusedforsterilitytesting）,confirmthatanappropriateamountof-lactamaseisincorporatedintothemedium,followingeithermethodunderValidationTest,usinglessthan100colony-formingunits（cfu）ofStaphylococcusaureus（seeTable1）asthechallenge.Typicalmicrobialgrowthoftheinoculatedculturemustbeobservedasaconfirmationthatthe-lactamaseconcentrationisappropriate.

或者（在与无菌试验所用场所彻底隔离的区域中），按照验证试验项下的任意一种方法，使用少于100个菌落（cfu）的金黄色葡萄球菌（见表1）作为验证菌，来确认适当数量的-内酰胺酶已经被整合到该培养基中。

必须观测到接种后培养物中出现典型微生物生长，才能确认-内酰胺酶浓度是适当的。

Table1.StrainsoftheTestMicroorganismsSuitableforUseintheGrowthPromotionTestandthe

ValidationTest

表1适合用于生长促进试验和验证试验中的试验微生物的菌株

Aerobicbacteria好氧菌

Staphylococcusaureus1

金黄色葡萄球菌

ATCC6538,CIP4.83,NCTC10788,NCIMB9518

Bacillussubtilis枯草芽孢杆菌

ATCC6633,CIP52.62,NCIMB8054

Pseudomonasaeruginosa2

绿脓杆菌

ATCC9027,NCIMB8626,CIP82.118

Anaerobicbacterium厌氧菌

Clostridiumsporogenes3

产芽胞梭状芽胞杆菌

ATCC19404,CIP79.3,NCTC532orATCC11437

Fungi霉菌

Candidaalbicans白色念珠菌

ATCC10231,IP48.72,NCPF3179

Aspergillusniger黑曲霉

ATCC16404,IP1431.83,IMI149007

1 AnalternativetoStaphylococcusaureusisBacillussubtilis（ATCC6633）.可替代金黄色葡萄球菌的是枯草杆菌（ATCC6633）

2 AnalternativemicroorganismisMicrococcusluteus（Kocuriarhizophila）,ATCC9341.替代微生物是藤黄微球菌（Kocuriarhizophila