高效液相色谱蒸发光散射检测法测定省略果糖葡萄糖蔗糖精.docx

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高效液相色谱蒸发光散射检测法测定省略果糖葡萄糖蔗糖精

[作者简介]蔡欣欣（1968-,女,大学本科,副主任技师,主要

从事食品卫生理化检验研究。

=论著>

高效液相色谱蒸发光散射检测法测定食品中

果糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖和麦芽糖

蔡欣欣,张秀尧

（浙江省温州市疾病预防控制中心,浙江温州325001

[摘要]目的:

建立简便、准确、灵敏的测定食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖和麦芽糖的高效液相色谱蒸发光散射检测方

法。

方法:

样品经水提取,乙腈沉淀,并过C18SPE柱,以乙腈:

水（75:

25,v/v为流动相,经AlltechPrevailTM

CarbohydrateES（250@416mm,5Lm柱分离,蒸发光散射检测器检测。

结果:

果糖、葡萄糖和蔗糖的测定范围分别为:

20~

320mg/L、25~400mg/L和25~400mg/L,检出限分别为4mg/L、5mg/L和5mg/L,乳糖和麦芽糖的测定范围为50~800mg/L,检出限为15mg/L,5种糖的回收率在9712%~10614%之间,测定的相对标准偏差在0156%~211%。

结论:

该法操作简便、快速、准确,适用于多种食品中糖的分析。

[关键词]高效液相色谱;激光蒸发光散射检测;食品;果糖;葡萄糖;蔗糖;麦芽糖;乳糖

[中图分类号]O65717+2[文献标识码]A[文章编号]1004-8685（200706-0968-03

Analysisoffructose,glucose,sucrose,lactoseandmaltoseinfoodbyhighperformanceliquidchromatographywithevaporativelightscatteringdetector

CaiXin2xin,ZhangXiu2yao

（WenzhouCenterforDiseaseControlandPrevention,Wenzhou325001,China

[Abstract]Objective:

Toestablishasimple,accurateandsensitivemethodfordeterminationoffructose,glucose,sucrose,lac2toseandmaltoseinfoodbyhighperformanceliquidchromatographywithevaporativelightscatteringdetector1Methods:

Thesug2arsinfoodsampleswereextractedwithwaterandtheextractsweredilutedwithacetonitriletoremoveaqueoussolubleimpuri2ties1FurthercleanupwasperformedonaC18cartridgetoremovethenonpolarcomponents1Thecarbohydrateswereseparatedon

AlltechPrevailTMCarbohydrateEScolumn（250@416mm,5Lmbyusingacetonitrile:

water（75:

25,v/vasthemobile

phase1Results:

Thelinearrangewas20~320mg/L,25~400mg/L,25~400mg/L,50~800mg/L,50~800mg/Lwiththedetectionijmitof4mg/L,5mg/L,5mg/L,15mg/L,15mg/Lforfructose,glucose,sucrose,lactoseandmaltose,respective2ly1Theaveragerecoveriesforallfiveanalytesrangedfrom9712%to10614%andtherelativestandarddeviationwas0156%~211%（n=61Conclusion:

Thismethodisfoundtobesimple,fast,andaccurateforanalysisoffructose,glucose,sucrose,lac2toseandmaltoseinfood1[Keywords]Highperformanceliquidchromatography;Evaporativelightscatteringdetection;Food;Fructose;Glucose;Su2crose;Lactose;Maltose

糖是食品的重要成分之一,由于各种糖测定比较困难,目前食品中涉及糖的项目,多以还原糖或总糖来表示。

食品中还原糖和总糖的测定最常用方法有碱性酒石酸铜直接滴定法和高锰酸钾滴定法[1],都是利用糖的还原性进行测定的,结果只能笼统地以还原糖或总糖表示,并不能给出各种糖的具体含量。

测定食品中蔗糖方法是先将蔗糖水解,然后测定水解前后还原糖的含量再折算出蔗糖的含量[2]。

这些都不是测定各种糖的特异性方法,且操作麻烦,测定步骤多。

由于各种糖的生理功能各异,特别是在目前我国糖尿病的患病率呈上升趋势的情况下,测定食品中各种糖的含量对于评价食品的质量将是非常重要的。

国标GB/T541315-1997[3]中的第一法和GB/T18932122-2003[4]均规定液相色谱示差折光法分别用于检测婴幼儿配方食品和乳粉中乳糖、蔗糖和总糖以及蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的含量,由于示差折光检测器对温度非常敏感,灵敏度比较低,结果往往不很理想。

测定食品中糖的方法还有离子色谱脉冲安培检测法[5],具有高灵敏度的特点,但用于糖类的检测会在电极表面上对某些分子产生氧化或还原作用[6]。

蒸发光散射检测器（ELSD是一种通用型的质量检测器,基于不挥发的样品颗粒对光的散射程度与其质量成正比的原理而进行检测,对没有紫外吸收、荧光或电活性的物质以及产生末端紫外吸收的物质均能产生响应,特别适合糖的检测。

样品经简单的预处理后,用聚合相氨基柱分离,可以快速测定食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖和麦芽糖,方法简便可靠、灵敏度高、重现好。

968中国卫生检验杂志2007年6月第17卷第6期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology,Jun2007;Vol17No6

1材料与方法

111仪器与试剂

WatersBreeze高效液相色谱系统由1525二元高压泵、在线脱气机、1500柱温箱、717Plus自动进样器、两位十通道切换阀、BusSAT/IN模块及WatersEmpower2色谱软件组成,ELSD2000ES蒸发光散射检测器（Alltech,2510超声波清洗机（Branson,T-25basic均质机（IKA,200~1000Ll可调移液枪（ThermoElectron,C18固相萃取柱（500mg,BondElutJr1,Varian。

果糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖和麦芽糖均为分析纯试剂,经96e?

2e干燥2h后,分别精确称量,用水配成100mg/ml浓度的标准贮备液,然后稀释成含果糖80mg/L、葡萄糖100mg/L、蔗糖100mg/L、乳糖200mg/L和麦芽糖200mg/L的80%（V/V乙腈水的混合标准使用液。

乙腈为HPLC级（Merck,水为Milli-Q超纯水机（Millipore制备的超纯水。

112色谱条件

分析柱为AlltechPrevailTMCarbohydrateES（250@416mm,5Lm,配套预柱（715@416mm,5Lm;流动相:

乙腈:

水（75:

25,v/v;柱温35e,流速:

1100ml/min,样品进样20L;lELSD的漂移管温度8113e,空气作载气,流速211L/min,撞击球:

关。

113样品预处理

液体样品混匀,固体样品捣碎研细混匀,精确称取适量样品,溶于水或温水（必要时均质,转移入250ml容量瓶中（必要时超声,加水至刻度,混匀。

用移液枪吸取2100ml于10ml容量瓶中,加乙腈至刻度,混匀。

取约2ml处理液过C18固相萃取柱,弃去初滤液1m,l取续滤液1m,l待测。

2结果与讨论

211流动相的选择和色谱柱特性说明

当流动相为75%的乙腈水溶液时,果糖、葡萄糖、蔗糖、

乳糖和麦芽糖分离良好,且柱压低,只有1200psi。

PrevailTM

CarbohydrateES为聚合相氨基柱,性质稳定,适用pH2~13的

流动相,柱污染后再生效果好。

标样和样品色谱图见图1

。

图1标准色谱图（a:

果糖（160mg/L、葡萄糖（200mg/L、蔗糖（200mg/L、乳糖（400mg/L和麦芽糖（400mg/L;

全脂加糖奶粉色谱图（b

212ELSD参数的选择

漂移管温度和载气流速是ELSD检测器的两个重要参数。

漂移管温度影响检测器的响应,温度升高,流动相蒸发趋于完全,信噪比上升。

但温度过高,可导致组分部分汽化,信号响应值变小。

雾化载气流速影响雾化器中液滴的形成,从而影响检测器的响应。

信噪比随流速的增加而升高。

按检测器软件的推荐值,试验选择漂移管温度8113e,空气载气的流速211L/min,可达到较小噪声信号,色谱图基线平稳。

213样品预处理条件的选择

样品用水提取之后,取2100ml用乙腈定容至10m,l可去除蛋白质、多糖等杂质成分,经C18固相萃取柱过滤又可去除脂肪、色素等脂溶性成分,得到澄清的液体。

方法快速、简便,又可有效地保护氨基色谱柱。

经过试验,下列的取样量比较可行:

各类奶粉取110~210g;各类液体奶取3~10g;炼乳取015g;蜂蜜取015~110g;饮料和饼干取2~10g;食醋、黄酒、啤酒和葡萄酒取10~50g;酱油取20~50g,果酱取210g。

214切换阀流分切割参数的选择

有些样品由于糖含量较低,加大取样量时,样品处理液比较脏,如酱油,其氯化钠含量按规定应\15%,样品前处理时无法除去,若进入检测器会很快污染漂移管,此时最好采用切换阀技术,将0~615min的流分切割到废液中,615min以后的流分进入检测器检测。

得到的酱油色谱图（取样2010g如图2

所示。

图2酱油样品未经流分切割的色谱图（a;

酱油样品经流分切割后的色谱图（b

215曲线范围与检出限

自动进样器分别进样5、10、20、40、60和80Ll的混合标准使用液,根据测得的峰面积与糖的浓度进行三次曲线回归,得到的测定范围、曲线方程和相关系数见表1,此测定范围能够满足实际样品的测定要求。

按基线噪音3倍的浓度求得检出限:

果糖4mg/L,葡萄糖5mg/L,蔗糖5mg/L,乳糖

15mg/L,麦芽糖15mg/L,按基线噪音10倍的浓度求得定量

限:

果糖10mg/L,葡萄糖10mg/L,蔗糖10mg/L,乳糖30mg/L,麦芽糖30mg/L。

（下转第982页

969

中国卫生检验杂志2007年6月第17卷第6期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology,Jun2007;Vol17No6

3小结

本文建立了羊肠衣中氯霉素残留的气相色谱-负化学源-质谱（GC-NCI-MS测定法。

采用了先进的凝胶渗透色谱净化系统（GPC和固相萃取（SPE技术,简便省时、自动化程度高。

该方法测定低限（LOQ为013Lg/kg,符合欧盟委员会决议2003/181/EC的要求。

该方法适合羊肠衣中氯霉素残留的确证检验。

[参考文献]

[1]GikasE,KormailP,TsipiD,etal1DevelopmentofarapidandsensitiveSPELC-ESIMS/MSmethodforthedeterminationofchloramphenicolinseafood[J]1AgricFoodChem,2004,52（5:

1025-10301

[2]AshwinHM,SteadJC,TaylorJR,etal1Developmentandvalidationofscreeningandconfirmatorymethodsforthedetectionofchlorampheni2colandchloramphenicolglucuronideusingSPRbiosensorandliquidchromatography-tandemmassspectrometry[J]1AnalyticaChimicaActa,2005,529:

103-1081

[3]EuropeanCommission,OfficialJournaloftheEuropeanCommunities,

13March,2003,（2003/181/EC1

[4]ImpensS,ReybroeckW,VercammenJ,etal1Screeningandconfir2mationofchloramphenicolinshrimptissueusingELISAincombinationwithGC-MSandLC-MS[J]1AnalyticaChimicaActa,2003,483:

153-1631

[5]谢孟峡,刘媛,邱月明,等1固相萃取-气相色谱质谱测定动物组织中氯霉素的残留量[J]1分析化学,2005,33（1:

1-41

[6]陈小霞,岳振峰,吉彩霓,等1高效液相色谱-电喷雾电离三级四极杆质谱测定鸡肉中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素的残留量[J]1色谱,2005,23（1:

92-951

[7]彭涛,李淑娟,储晓刚,等1高效液相色谱/串联质谱法同时测定虾中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素的残留量[J]1分析化学,2005,33（4:

463-4661

[8]TheCommissionoftheEuropeanCommunities.2002/657/EC.Com2missionDecisionof12August2002implementingCouncilDirective96/23/ECconcerningthepreformanceofanalyticalmethodsandtheinterpretationofresults1OfficialJournaloftheEuropeanCommunities,2002,L221:

8-36.

（收稿日期:

2006-12-11

（上接第969页

表15种糖的测定范围、曲线方程和相关系数

名称

测定范围

（mg/L

曲线方程（Y=峰面积,X=浓度,mg/Lr果糖20~320Y=-015227X3+31824@102X2+31214@105X-31527@104110000葡萄糖25~400Y=-011286X3+11751@102X2+41423@103X-51827@104110000蔗糖25~400Y=-011970X3+21408@102X2+81806@103X-11650@105110000乳糖50~800Y=-0101727X3+46108X2+11257@103X-81591@103110000麦芽糖50~800Y=-0102667X3+66170X2+21743@103X-81401@103110000216方法的精密度和加标回收试验

分别称取1100g全脂奶粉和5100g混合果蔬汁饮料,加入适量糖标准贮备液,按113项预处理平行测定6次,进行加标回收试验,计算平均回收率及相对标准偏差（RSD,结果如表2所示。

5种糖的回收率在9712%~10614%之间,测定的相对标准偏差在0156%~211%,说明该方法准确度和重现性较好。

表2加标回收试验和精密度（n=6

全脂加糖奶粉

测得值（mg/L加入量

（mg/L

回收率

（%

混合果蔬汁饮料

测得值

（mg/L

加入量

（mg/L

回收率（%

果糖-*6410417（0194**76168（1108010116（015612810219（017816010214（114葡萄糖-6410116（019772110（1198010614（016812010117（017316010612（111蔗糖13217（1166410015（017219019（1168010110（018312810016（016716010113（111乳糖24015（1181289810（112-nd***

2409712（0192nd

麦芽糖-12010315（0161-20010117（21124010116（11540010016（111*:

未检出;**:

相对标准偏差（%;***:

未进行加标试验217样品分析

按213项取样量称取样品按113项预处理,并进行测定,结果见表3。

表3实际样品测定结果

样品名称

果糖

（g/kg

葡萄糖

（g/kg

蔗糖

（g/kg

乳糖

（g/kg

麦芽糖（g/kg儿童配方奶粉（3~6岁-*-129450-全脂奶粉--166301-乳饮料--27141611-番茄沙司11611106169011--酱油11213125119-510混合果蔬汁饮料191218104717--蜂蜜35715347151414-2010饼干--14310--干红葡萄酒0194----*:

未检出

[参考文献]

[1]GB/T500917-20031食品中还原糖的测定[S]1

[2]GB/T500918-20031食品中蔗糖的测定[S]1

[3]GB/T541315-19971婴幼儿配方食品和乳粉乳糖、蔗糖和总糖的测定[S]1

[4]GB/T18932122-20031蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的测定方法液相色谱示差折光检测法[S]1

[5]离子色谱在食品饮料分析中的应用实例-碳水化合物[J]1戴安产品通讯,2002,4:

2-31

[6]傅若农1用HPLC和蒸发光散射检测对糖类分析的方法学[J]1国外分析仪器,2002,2:

26-291

（收稿日期:

2007-02-06

982中国卫生检验杂志2007年6月第17卷第6期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology,Jun2007;Vol17No6