银翘散检验方法验证方案.docx

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银翘散检验方法验证方案

1、目的：

确认所用分析方法的有效性。

2、范围：

所有用于与产品和验证有关的分析方法均应验证

3、责任：

质量部、工程部负责实施。

4、内容：

4.1、定义：

药品质量标准分析方法验证是证明采用的方法适合于相应检测要求。

4.2、验证对象：

所有用于与产品和验证有关的分析方法

4.3、验证范围：

在建立药品质量标准时，分析方法需经验证；在药品生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，则质量标准分析方法也需进行验证。

方法验证理由、过程和结果均应记载在药品标准起草说明或修订说明中。

4.4、验证的分析项目：

鉴别试验，杂质定量检查或限度检查，原料药或制剂中有效成分含量测定，以及制剂中的其他成分（如防腐剂等）的测定。

4.5、验证的内容：

准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。

5、验证小组成员及职责

5.1、验证小组成员：

5.2、人员职责：

人员

职责

验证小组组长

组织相关的验证培训；负责起草验证方案、组织项目的具体验证、督促验证小组成员按照验证方案的要求做好验证记录；起草并完成验证报告，对整个验证项目负责。

验证小组成员

按照方案实施验证、并做好记录、意外情况及时汇报和记录、协助起草验证方案和报告。

6、验证程序：

分析方法的验证内容

程序

内容

建立验证方案

1、确定标准及方法

2、确定试验及检查范围

3、确定步骤

4、方案审批

分析仪器的确认

1、安装：

确认安装、检查、文件检查及保存

2、仪器校正

3、适用性预试验

4、再确认：

制订再确认的周期

5、制订使用、清洁、保养规程，建立记录

适用性试验

1、准确度试验：

回收率测定

2、精密度试验：

重现性，相对标准差常规<1.0％，HPLC应<2.0％

3、专属性

4、检测限

5、定量限

6、线性

7、范围

8、耐用性

验证报告

评价及批准

验证证书

审核、签发

7、简介：

本品为棕黄色的粉未；气特异，味微甘而凉，主要用于辛凉透表，清热解毒。

治温病初起，发热无汗，或有汗不畅，微恶寒，头痛口渴，咳嗽咽痛，舌尖红，苔薄白或薄黄等症状。

8、验证实施步骤：

8.1、为了确保验证数据的准确可靠，采取以下几个先行保障措施

8.1.1仪器：

己经过校正并在有效期内

8.1.2人员：

均经过培训，熟悉方法及使用的仪器

8.1.3对照品：

金银花对照药材、绿原酸对照品、连翘对照药材、连翘苷、牛蒡子苷。

8.1.4材料：

均符合检验要求

8.1.5参考资料：

8.1.5.1《中国药典》2010年版一部

8.1.5.2《药品生产验证指南》（2010版）

9、鉴别：

9.1、试验A:

取本品，置显微镜下观察：

花粉粒类圆球形，直径约至76μm，外壁有刺状雕纹，具三个萌发孔。

内果皮纤维上下层纵横交错，纤维短梭形。

联结乳管直径14～25μm，含淡黄色颗粒状物。

非腺毛，多碎断，完整者1～8细胞，稍弯曲，直径10~43μm，疣状突起较细密。

气孔多存于近叶脉两侧的下表皮上，保卫细胞哑铃状。

内果皮组织碎片含草酸钙方晶及淡棕色物质。

宿萼表皮细胞垂周壁状弯曲。

纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维。

9.2、试验B：

取本品1.3g，加甲醇5ml，超声处理30分钟，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

另取金银花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。

再取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（SOP·JC·013·04-00）试验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水（7:

2.5:

2.5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光（365nm）下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

9.3、试验C：

取本品4g，加水80ml，煎煮30分钟，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次25ml,合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加30%乙醇5ml使溶解，通过D101型大孔吸附树脂（内径为1cm，柱高为24cm），用30%乙醇50ml洗脱，弃去洗脱液，在用稀乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加甲醇2ml使溶解作为供试品溶液。

另取连翘对照药材2g，同法制成对照药材溶液。

再取连翘苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法（SOP·JC·013·04-00）试验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同以偶硅胶G板薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸（17:

1）位展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与对照药材色谱盒对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

9.5、检测结果:

检验结果

结果判断

试验A

试验B

试验C

检测人:

检测日期:

年月日

9.6、验证标准:

试验A供试品，置显微镜下观察：

花粉粒类圆球形，直径约至76μm，外壁有刺状雕纹，具三个萌发孔。

内果皮纤维上下层纵横交错，纤维短梭形。

联结乳管直径14～25μm，含淡黄色颗粒状物。

非腺毛，多碎断，完整者1～8细胞，稍弯曲，直径10~43μm，疣状突起较细密。

气孔多存于近叶脉两侧的下表皮上，保卫细胞哑铃状。

内果皮组织碎片含草酸钙方晶及淡棕色物质。

宿萼表皮细胞垂周壁状弯曲。

纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维。

试验B供试品色谱中，供试品在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

试验C供试品色谱中，供试品色谱中，在与对照药材色谱盒对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

9.7、检验结果评价:

10、含量测定:

照高效液相色谱法测定；

仪器：

LC-20AT高效液相色谱仪。

10.1、准确度：

10.1.1色谱条件与系统适用性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（35:

65）为流动相；检测波长为280nm。

理论板数按牛蒡苷峰计算应不低于2500，流速；色谱柱规格：

；粒度：

；进样量：

10μl。

10.1.2对照品溶液的制备：

取牛蒡苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含80ug的溶液，即得。

10.1.3供试品溶液的制备：

取本品适量，混匀，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，，密塞，称定重量，超声处理（功率250W,频率30kHz）30分钟，放冷，在称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

10.1.4取本品粉末约0.25g，置25ml量瓶中，共称九份。

10.1.5三份中分别加10.1.2项下的对照品溶液2.5ml，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，，密塞，称定重量，超声处理（功率250W,频率30kHz）30分钟，放冷，在称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

10.1.6三份中分别加10.1.2项下的对照品溶液5ml，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，，密塞，称定重量，超声处理（功率250W,频率30kHz）30分钟，放冷，在称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

10.1.6三份中分别加10.1.2项下的对照品溶液7.5ml，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，，密塞，称定重量，超声处理（功率250W,频率30kHz）30分钟，放冷，在称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

10.1.7计算：

注：

式中f为对照品的浓度除以对照品峰面积得到的值的平均值；

AT为对照品峰面积；单位μv*sec；

nＴ为供试品的稀释倍数；

WT为供试品的称量；单位g。

10.1.8计算结果填入下表：

含量测定牛蒡苷加样回收率试验表

序号

样品称量（g）

样品中牛蒡苷的含量（mg）

对照品加入量（mg）

实测值（mg）

回收率（%）

回收率的平均值（％）

RSD（%）

检测人：

检测日期：

10.1.9结果评价：

10.2、精密度：

10.2.1重复性（设操作人员A）：

10.2.1.1色谱条件与系统适用性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（35:

65）为流动相；检测波长为280nm。

理论板数按牛蒡苷峰计算应不低于2500，流速；色谱柱规格：

；粒度：

；进样量：

10μl。

10.2.1.2对照品溶液的制备：

取牛蒡苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含80ug的溶液，即得。

10.2.1.3供试品溶液的制备：

10.2.1.4计算：

注：

式中f为对照品的浓度除以对照品峰面积得到的值的平均值；

AT为对照品峰面积；单位μv*sec；

nＴ为供试品的稀释倍数；

WT为供试品的称量；单位g。

10.2.1.5将计算的结果填入下表

含量测定牛蒡苷重复性试验表

序号

样品称量（g）

含量（g/g）

含量的平均值（g/g）

RSD（%）

检测人：

检测日期：

10.2.1.6结果评价：

10.2.2中间精密度（换一时间，换一操作人员，设操作人员为B）：

10.2.2.1色谱条件与系统适用性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（35:

65）为流动相；检测波长为280nm。

理论板数按牛蒡苷峰计算应不低于2500，流速；色谱柱规格：

；粒度：

；进样量：

10μl。

10.2.2.2对照品溶液的制备：

取牛蒡苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含80ug的溶液，即得。

10.2.2.3供试品溶液的制备：

10.2.2.4计算：

注：

式中f为对照品的浓度除以对照品峰面积得到的值的平均值；

AT为对照品峰面积；单位μv*sec；

nＴ为供试品的稀释倍数；

WT为供试品的称量；单位g。

10.2.2.5将计算的结果填入下表

含量测定牛蒡苷重复性试验表

序号

样品称量（g）

含量（g/g）

含量的平均值（g/g）

RSD（%）

检测人：

检测日期：

10.2.2.6结果评价：

10.3、专属性：

10.3.1色谱条件与系统适用性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（35:

65）为流动相；检测波长为280nm。

理论板数按牛蒡苷峰计算应不低于2500，流速；色谱柱规格：

；粒度：

；进样量：

10μl。

10.3.2取牛蒡苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含80ug的溶液，即得。

10.3.3供试品溶液的制备：

10.3.4空白溶液的制备：

精密称取阴性对照品0.5g，按供试品溶液的制备方法制备成阴性样品溶液。

含量测定专属性试验表

保留时间

供试品溶液

对照品溶液

空白溶液

检测人：

检测日期：

10.3.5验证标准：

供试品溶液中应呈现与牛蒡苷对照品保留时间相同的色谱峰；空白溶液中在这点应无色谱峰。

10.3.6结果评价：

10.4、线性及线性范围：

10.4.1色谱条件与系统适用性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（35:

65）为流动相；检测波长为280nm。

理论板数按牛蒡苷峰计算应不低于2500，流速；色谱柱规格：

；粒度：

；进样量：

10μl。

10.4.2取牛蒡苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含80ug的溶液，即得。

10.4.3标准曲线的制备：

分别吸取10.4.2项下对照品溶液0.4ml、0.8ml、1.2ml、1.6ml、2.0ml置5个2ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，既得。

10.4.4以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

将结果填入下表。

牛蒡苷不同浓度的峰面积

浓度（mg/ml）

峰面积（μv*sec）

回归方程