实验室常用试剂配方.docx

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实验室常用试剂配方

常用试剂的配方

常用贮液与溶液

1mol/L亚精胺（Spermidine）

溶解2.55g亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L精胺（Spermine）

溶解3.48g精胺于足量的水中，使终体积为10ml。

分装成小份贮存于-20℃。

10mol/L乙酸胺（ammonium acetate）

将77.1g乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L后，用孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白（BSA）

加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）于水中（为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）

在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加水，分成小份贮存于-20℃。

或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管，加的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassium acetate）

溶解78.5g乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl）

溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodium acetate）

溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中，用冰乙酸调溶液的pH至，再加水定容到100ml。

L EDTA

配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（L），混合后形成EDTA的三钠盐。

或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH，并溶于水中，定容至1L。

1mol/L HEPES

将溶于约90ml的水中，用NaOH调pH（），然后用水定容至100ml。

1mol/L HCl

加的浓盐酸至的水中。

25mg/ml IPGT

溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）于10ml水中，分成小份贮存于-20℃。

1mol/LMgCl2

溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中，定容到100ml。

100mmol/L PMSF

溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。

分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）

将200mg的蛋白酶L加入到水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。

不要涡旋混合。

加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。

10mg/mlRnase（无DNase）（DNase－free RNase）

溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH ）。

溶解后于水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。

用1mol/L的Tris－HCl调pH至，于-20℃贮存。

（配制过程中要戴手套）

5mol/L氯化钠（NaCl）

溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至100ml。

10N氢氧化钠（NaOH）

溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

10％SDS（十二烷基硫酸钠）

称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

用水定容至1L。

2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol）

溶解36.4g山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。

100％三氯乙酸（TCA）

在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

（稀释液应在临用前配制）

％ X－gal（5-溴-4-氯-3-吲哚－β-半乳糖苷）

溶解25mg的X－gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF）,用铝箔包裹装液管，贮存于-20℃。

100×Denhardt试剂（Denhardt’s regent）

成分及终浓度 配制100ml溶液各成分的用量 

2%聚蔗糖（Ficoll，400型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA（组分V）

水  2g2g2g

加水至总体积为100ml ,依照上表称取各组分，溶于水中定容。

过滤除菌及杂质，分装成小份于-20℃贮存。

10×标准DNA连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接）

成分及终浓度 配制10ml溶液各成分的用量 

试剂

储藏液

所需量

L Tris-HCl

1mol/L 贮液

5ml

100mmol/L MgCl2

1mol/L 贮液

1ml 

100mmol/L DTT

1mol/L 贮液

1ml 

2mmol/L ATP

 100 mmol/L 贮液

200ul

5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）

1 mmol/L 贮液

50ul 

ml BSA（组分V）（可选）

 10 mg/mL 贮液

水

将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃ 。

100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions）

可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80℃可贮存至少6个月。

10mmol/L dNTP混合液

成分及终浓度 配制20ul溶液各成分的用量 

10mmol/L dATP

10mmol/L dCTP 

10mmol/L dGTP

10mmol/L dTTP

2ul100 mmol/L dATP 贮液

2ul 100 mmol/L dCTP 贮液

2ul 100 mmol/L dGTP 贮液

2ul 100 mmol/L dTTP 贮液

12ul 水 

20％PEG 8000/2.5M NaCl

成分及终浓度 配制10ml溶液各成分的用量

质量浓度为20％聚乙二醇

L 氯化钠

水  20g

50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠

补足100ml 

加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。

20×SSC

成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量

300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）

3mol/L 氯化钠

水  88.2g

175.3g

补足1L 

溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴10N NaOH溶液调pH为，用水补足体积至1L。

DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水

加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC的体积分数为％。

在37℃温浴至少12h，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min，以使残余的DEPC失活。

DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺（deionized formamide）

直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。

经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80℃贮存（防止氧化）。

磷酸缓冲液（phosphate buffer）

TE（用于悬浮和贮存DNA）

成分及终浓度 配制100ml溶液各成分的用量 

10mmol/L Tris－HCl

1mmol/L EDTA

水  

1ml 1mol/L Tris-HCl（，25℃）

200ul  mol/L EDTA（pH ）

 水

Tris缓冲液（Tris-HCl buffer）

将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH（25℃下）加一定量的浓盐酸（），用水调整终体积至1L。

30%丙烯酰胺溶液

【配制方法】

将29g丙烯酰胺和1gN，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。

加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。

用Nalgene滤器（μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于，置棕色瓶中保存于室温。

【注意】

丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。

称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。

可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。

一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman1号滤纸过滤以纯化之。

在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。

40%丙烯酰胺

【配制方法】

把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20gN，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。

继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。

【注意】

见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。

放线菌素D溶液

【配制方法】

把20mg放线菌素D溶解于4ml100%乙醇中，1：

10稀释贮存液，用100%乙醇作空白对照读取OD440值。

放线菌素D（分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21，900，故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为，放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20℃。

【注意】

放线菌素D是致畸剂和致癌剂，配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作，而不能在开放在实验桌面上进行，谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。

药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。

只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。

L腺苷三磷酸（ATP）溶液

【配制方法】

在水中溶解60mgATP,用LNaOH调至pH值至，用蒸馏水定容1ml，分装成小份保存于-70℃

10mol/L乙酸酰溶液

【配制方法】

把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。

10%过硫酸铵溶液

【配制方法】

把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。

BCIP溶液

【配制方法】

把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃

2×BES缓冲盐溶液

【配制方法】

用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6gNaCl和0.027gNa2HPO4，室温下用HCl调节该溶液的pH值至、然后加入蒸馏水定容至100ml，用μm滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-20℃。

1mol/LCaCl2溶液

【配制方法】

在200ml蒸馏水中溶解54gCaCl2·6H2O，用μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。

【注意】

制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器（μm孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。

LCaCl2溶液

【配制方法】

在20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl2·6H2O，用μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。

1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液

【配制方法】

用20mlL乙酸钠溶液（）溶解3.09gDTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。

【注意】

DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。

脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液

【配制方法】

把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取LTris碱分别调节每一dNTP溶液的pH值（用pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分装成小份贮存于-70℃。

碱基

波长（nm）

消化系数（ε）[L/（mol·cm）]

A

259

×104

G

253

×104

C

271

×103

T

260

×103

比色杯光径为1cm时,吸光度=εM

LEDTA溶液

【配制方法】

在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na·2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至（约需20gNaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。

【注意】

EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近，才能完全溶解。

溴化乙锭（10mg/ml溶液）

【配制方法】

在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。

【注意】

小心：

溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。

2×HEPES缓冲盐溶液

【配制方法】

用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6gNaCl、0.074gKCl、0.027gNa2PO4·2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用LNaOH调节pH值至，再用蒸馏水定容至100ml。

用μm滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20℃。

IPTG溶液

【配制方法】

IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为），在8ml蒸馏水中溶解2gIPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。

1mol/L乙酸镁溶液

【配制方法】

在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。

1mol/LMgCl2溶液

【配制方法】

在800ml水中溶解203.4gMgCl2·6H2O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。

【注意】

MgCl2极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。

β-巯基乙醇（BME）溶液

【配制方法】

一般得到的是L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。

【注意】

BME或含有BME的溶液不能高压处理。

NBT溶液

【配制方法】

把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。

酚/氯仿溶液

【配制方法】

把酚和氯仿等体积混合后用LTris·HCl抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的LTris·HCl液层，保存于4℃。

【注意】

酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。

所有操作均应在化学通风橱中进行。

与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液

【配制方法】

用异丙醇溶解PMSF成ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。

如有必要可配成浓度高达ml的贮存液（100mmol/L）。

【注意】

PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。

一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。

凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。

PMSF在水溶液中不稳定。

应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。

PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。

pH值为时，20μmmol/LPMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。

磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液

【配制方法】

在800ml蒸馏水中溶解8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,用HCl调节溶液的pH值至加水定容至1L，在15lbf/in2（1034×105Pa）高压下蒸气灭菌20min。

保存于室温。

1mol/L乙酸钾（）溶液

【配制方法】

将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节pH值至后加入纯水定容到1L，保存于-20℃。

乙酸钾溶液（用于碱裂解）

【配制方法】

在60ml5mol/L乙酸钾溶液中加入冰乙酸和水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。

3mol/L乙酸钠（和）溶液

【配制方法】

在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至或用稀乙酸调节pH值至，加水定容到1L，分装后高压灭菌。

5mol/LNaCl溶液

【配制方法】

在800ml水中溶解292.2gNaCl加水定容至1L，分装后高压灭菌。

10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液

【配制方法】

在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至，加水定容至1L，分装备用。

【注意】

SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。

20×SSC溶液

【配制方法】

在800ml水中溶解175.3gNaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/LNaOH溶液调节pH值至，加水定容至1L，分装后高压灭菌。

20×SSPE溶液

【配制方法】

在800ml水中溶解17.5gNaCl、27.6gNaH2PO4·H2O和7.4gEDTA，用NaOH溶液调节pH值至（约需10ml/LNaOH），加水定容至1L，分装后高压灭菌。

100%三氯乙酸溶液

【配制方法】

在装有500gTCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。

1mol/LTris溶液

【配制方法】

在800ml水中溶解121.91gTris碱，加入浓HCl调节pH值至所需值。

pH　　　HCl

　　70ml

　　60ml

　　42ml

应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。

【注意】

如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。

尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。

Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，pH值大约降低个单位。

例如：

L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为、和。

Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/LTris）

【配制方法】

在800ml蒸馏水中溶解8gNaCl、0.2gKCl和3gTris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至，用蒸馏水定容至1L，分装后在151bf/in2×105Pa）高压下蒸汽灭菌20min，于室温保存。

X-gal溶液

【配制方法】

X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。

用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。

保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20℃。

X-gal溶液无须过滤除菌。

PBS:

取ZLI-9061PBS溶于1000ml的蒸馏水中，混匀，测pH值应在~之间，若偏离此范围，请用的HCL或NaOH调整。

TBS：

Tris缓冲液配方：

（0.5M）

Tris（三羟甲基氨基甲烷）

60.57g

1NHCL

约420ml

双蒸水

加至1000ml

Tris缓冲液配制方法：

先以少量双蒸水（300~500ml）溶解Tris，加入HCl后，用HCl（1N）或NaOH（1N）将pH调至，最后双蒸水加至1000ml。

此液为储备液，4℃冰箱中保存。

TBS配方：

Tris-HCI缓冲液（0.5M）

100ml

NaCI

~9gL）

双蒸水

加至1000ml

TBS配制方法：

先以少量双蒸水溶解NaCl，再加入Tris-HCl缓冲液，最后加双蒸水至1000ml，充分摇匀。

枸橼酸盐缓冲液（Citratebuffer）：

储存液：

A.0.1M枸橼酸溶液：

称取21.01g枸橼酸（C6H8O7·H20）溶于1000ml蒸馏水中。

B.0.1M枸橼酸钠溶液：

称取29.41g枸橼酸钠（C6H5Na3O7·2H20）溶于1000ml蒸馏水中。

工作液：

取9mlA液和41mlB液加入450ml蒸馏水中，溶液pH值应为±

胰酶（Trypsin）：

ZLI-9011胰蛋白酶消化液：

常用浓度为%，即使用前将一滴试剂1胰酶溶液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混合（1:

3稀释），则可直接滴加使用。

胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从%（1:

10稀释）至%（1:

1稀释）。

ZLI-9010胰蛋白酶：

取0.05g或0.1g胰蛋白酶加入到100ml%或%的无水氯化钙水溶液中，溶解即可。

胃酶（Pepsin）：

4%胃蛋白酶，用LHCL配制。

（我公司备有ZLI-9013胃蛋白酶消化工作液，不需稀释直接滴加使用，欢迎选购）

DAB：

ZLI-9032/9033DABKit：

使用前只需将试剂盒提供的A、B、C三种试剂各一滴加至1ml双蒸水中，即可获得1mlDAB工作液，简单易用。

ZLI-9030DAB：

6mgDAB溶于10mlTBS（0.05M），再加入浓度为3％的H2O2，过滤掉沉淀物，即可。

AEC：

4mgAEC溶于1ml二甲基甲酰胺中，加入14ml浓度为0.1M的醋酸缓冲液（），然后加入3%H2O2，过滤掉沉淀物。

RIPA：

1×PBS，1%NP40，sodiumdeoxycholate，%SDS（此液体可长期保存）。

以下抑制剂以储存液方式保存，临用前加入RIPA中。

10mg/mlPMSF异丙醇溶液（用量为10μl/ml）

Aprotinin（Sigma产品，用量为30μl/ml）

1000mMsodiumorthovanadate冷冻液

（用量为10μl/ml）

9、BlottoA：

常规使用1×PBS，5%milk，%Tween20。

10、BlottoB：

与Phosphotyrosine抗体共用，1×PBS，1%milk，%Tween20。

部分实验中milk可完全去除，但可能引起背景增高。

电泳缓冲液、染料和凝胶加样液

电泳缓冲液

50×Tris-乙酸（TAE）缓冲液

成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 

2mol/L Tris碱

1mol/L 乙酸

100 mmol/L EDTA

水  242g

 ml的冰乙酸（ mol/L）

200ml的 mol/L EDTA（pH ）

补足1L  

5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液

成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 

445 mmol/L Tris碱

445 mmol/L 硼酸盐

10 mmol/L EDTA

水  54g

27.5g 硼酸

20 ml的 mol/L EDTA（pH ）

补足1L  

染料

1％溴酚蓝（bromophenol blue）

加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1％二甲苯青FF（xylene cyanole FF）

溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙锭（ethidium bromide）

小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。

用铝箔包裹装液管，于4℃贮存。

凝胶上样液（gel loading solutions）

6×碱性凝胶上样液（室温贮存）

成分及终浓度 配制10ml溶液各成分用量 

 N 氢氧化钠

6 mmo