骨骼疾病的生物化学检验.ppt

骨骼疾病的生物化学检验.ppt

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骨骼疾病的生物化学检验,生物化学检验技术,医学检验教研室董琦,1.掌握骨代谢疾病常用的生物化学标志物及检测方法2.熟悉骨代谢疾病的临床表现、骨代谢疾病常用的生物化学标志物的临床意义3.了解骨的组成，骨的溶骨与成骨作用,学习目标,4.具有对骨代谢疾病常用标志物测定的操作技术能力5.能结合患者临床表现对骨疾病的生化检验结果进行正确分析,学习目标,主要内容,text,.,.,第一节骨的生物化学,text,二、骨疾病的代谢变化,第二节骨疾病的生物化学检验,二、骨吸收标志物检验,一、骨的代谢,第一节骨的生物化学,二、骨疾病的代谢变化,一、骨的代谢,骨的组成,无机物,有机基质,骨细胞成骨细胞破骨细胞,返回节,骨组织,骨组织细胞,骨纤维,蛋白质、I型胶原、多糖类物质、脂类和糖蛋白,矿物质,骨盐,钙、磷、钠、镁、铁、氟,羟磷灰石结晶、磷酸氢钙,一、骨的代谢,骨的代谢,主要功能是生成骨组织的纤维和有机基质,成骨细胞,破骨细胞,7,又称骨形成，包括两个过程，即骨的有机基质形成和骨盐沉积,成骨作用,又称骨吸收，是破骨细胞释放溶酶体中的蛋白水解酶，使骨的有机基质（胶原）水解，同时破骨细胞还释放出一些酸性物质，如乳酸、柠檬酸和碳酸等，使局部酸性物质增加，促进骨盐溶解,溶骨作用,骨代谢疾病是指由多种因素引起骨组织中钙、磷等矿物质、成骨细胞和（或）破骨细胞功能异常，导致骨形成和骨吸收两者之间的转换异常，骨矿化缺乏、不足或沉积过多的全身性骨骼疾病,常见疾病是骨质疏松症和骨软化症和佝偻病,二、骨疾病的代谢变化,是因多种原因引起的骨组织显微结构受损，骨矿成分和骨基质等成比例地不断减少，骨质变薄，骨小梁数量减少，骨脆性增加，使骨折危险度升高的一种全身性代谢性疾病,骨质疏松症,骨质疏松症,骨质疏松症不仅仅是一个骨量的问题，还存在骨结构的受损及骨外因素造成的骨质疏松性骨折,病因,骨质疏松症,主要临床表现是骨骼疼痛、不适和易骨折,临床表现,骨质疏松症,疑有骨折的患者应对该部位进行X线摄片，对所有疑诊者均应检测骨密度,实验室检查,骨质疏松症,是继发于骨质疏松症的疾病，是骨矿化障碍造成的慢性全身性疾病，表现为骨组织内类骨组织（即非矿化骨）增加,骨软化症,1.维生素D缺乏/抵抗2.磷酸盐缺乏,病因,骨软化症,1.肌无力、肌张力过低、承重功能减弱使肢体弯曲，呈“O”型或“X”型腿、身材矮小2.肋软骨连接处肿胀形成串珠、方颅等3.成年人，骨发育完全，骨痛是最普通的症状，可能发生应力性骨折,临床表现,骨软化症,1.血钙正常或轻度下降，血磷明显下降。

血清钙、磷乘积明显低于正常2.尿钙减少，尿磷一般无变化3.血清骨碱性磷酸酶增高4.活性维生素D降低5.血PTH多升高,实验室检查,骨软化症,第二节骨疾病的生物化学检验,二、骨吸收标志物检验,三、骨代谢调节激素的测定,一、骨形成标志物检验,血清骨钙素水平基本上能够反映近期骨细胞合成骨钙素和骨形成的情况，是反映骨代谢状态的一项特异、灵敏的生化指标,（）骨钙素测定,【检测方法】1.放射免疫法用125I标记骨钙素和未标记的骨钙素对限量的特异性抗体竞争结合反应2.化学发光免疫分析法采用双抗体夹心法原理,（）骨钙素测定,【参考区间】放射免疫法：

成人4.751.33g/L化学发光免疫分析法：

成年男性：

14.070.0g/L女性：

绝经前11.043.0g/L绝经后15.046.0g/L,（）骨钙素测定,【临床意义】1.增高见于儿童生长期、肾性骨营养不良、Paget病、甲状旁腺功能亢进、甲状腺功能亢进、骨折、骨转移癌、低磷血症、肾功能不全等2.降低见于甲状旁腺功能减退、甲状腺功能减退、肝病、长期应用肾上腺皮质激素治疗等,B-ALP在反映成骨细胞活性和骨形成上有较高的特异性，优于骨钙素。

B-ALP在血清中比骨钙素更稳定，半寿期为12天，并且不受昼夜节律变化的影响，标本不需要特殊处理,

（二）骨性碱性磷酸酶,【检测方法】先识别或分离出B-ALP，再测定其活性。

近来建立了对B-ALP特异性很强的单克隆抗体免疫分析法，具有高度的特异性和敏感性，而且操作简便，是目前检测B-ALP的最佳方法。

1.免疫活性测定法2.酶联免疫法,

（二）骨性碱性磷酸酶,【参考区间】免疫活性测定法：

成年男性24.97.0U/L成年女性19.75.6U/L酶联免疫法：

成年男性12.34.3g/L女性（绝经前）8.72.9g/L女性（绝经后）13.24.7g/L,

（二）骨性碱性磷酸酶,【临床意义】1.增高见于甲状腺功能亢进、甲状旁腺功能亢进、骨转移癌、佝偻病、骨软化症、骨折、Paget病、氟骨症、高转换型骨质疏松症2.降低极为少见,

（二）骨性碱性磷酸酶,血清中I型胶原前肽水平在一定范围内是反映成骨细胞活动、骨形成及I型胶原合成速度的一项特异性指标。

PINP与骨形成标志物骨性碱性磷酸酶和骨钙素水平呈高度正相关，目前多以测定血清PINP水平为主,（三）I型胶原前肽,【检测方法】1.放射免疫法目前市售的试剂盒，均是针对PINP1链的特异性抗体，只能检测PINP的高分子量型2.化学发光免疫分析法,（三）I型胶原前肽,【参考区间】放射免疫法：

男性38202g/L女性50170g/L化学发光免疫分析法：

成年男性2040g/L女性（绝经前）2040g/L女性（绝经后）2070g/L,（三）I型胶原前肽,【临床意义】1.增高见于儿童发育期；妊娠最后3个月；骨肿瘤和肿瘤的骨转移；其他2.降低见于绝经期后骨质疏松患者经雌激素治疗后,（三）I型胶原前肽,二、骨吸收标志物检验,（四）尿羟脯氨酸,尿Pyr和D-Pyr是反映骨胶原降解和骨吸收的最灵敏、最特异的生化指标之一。

其中D-Pyr有更高的特异性和灵敏度,

（一）吡啶酚和脱氧吡啶酚,【检测方法】纸层析法、高效液相色谱法、酶联免疫法、化学发光免疫分析法和放射免疫法,

（一）吡啶酚和脱氧吡啶酚,【参考区间】Pyr/Cr：

男性13.625.8nmol/mmolCr女性（绝经前）16.331.9nmol/mmolCrD-Pyr/Cr：

男性22.038.5nmol/mmolCr女性3.07.4nmol/mmolCr,

（一）吡啶酚和脱氧吡啶酚,【临床意义】吡啶酚水平评价已用于骨质疏松症、Paget病、原发性甲状旁腺功能亢进、甲状腺功能亢进及其他伴有骨吸收增加性疾病的诊断、治疗及病情评价,

（一）吡啶酚和脱氧吡啶酚,血清CTX的变化与骨形态计量学骨吸收参数呈显著正相关，并与其他骨吸收生化指标如Pyr和D-Pyr呈正相关。

因此血清CTX水平是破骨细胞性胶原降解的灵敏指标,

（二）I型胶原羟基端肽降解产物测定,【检测方法】测定CTX的方法有高效液相色谱法、化学发光免疫分析法、酶联免疫法和放射免疫法,

（二）I型胶原羟基端肽降解产物测定,【临床意义】血清CTX水平增高表明患者的骨吸收程度增加，骨吸收抑制治疗后血清CTX水平会恢复正常CTX水平可用于骨质疏松症、Paget病、原发性甲状旁腺功能亢进、甲状腺功能亢进及其他伴有骨吸收增加性疾病的诊断、治疗及病情评价,

（二）I型胶原羟基端肽降解产物测定,由破骨细胞产生和分泌的。

当骨吸收时，TRAP释放入血液循环，故认为血浆中TRAP水平是一项评价骨吸收的生化指标，主要反映破骨细胞活性和骨吸收状态,（三）抗酒石酸酸性磷酸酶,【检测方法】1.酶动力学法2.酶联免疫法,（三）抗酒石酸酸性磷酸酶,【参考区间】酶动力学法：

成人血浆3.15.4U/L酶联免疫法：

男性2254U/L女性（绝经前）2254U/L健康老人5579U/L,（三）抗酒石酸酸性磷酸酶,【临床意义】1.增高见于原发性甲状旁腺功能亢进、慢性肾功能不全、Paget病、骨转移癌、卵巢切除术后、高转换型骨质疏松症2.降低见于骨吸收降低的疾病，如甲状旁腺功能降低,（三）抗酒石酸酸性磷酸酶,尿HOP排出量可以反映骨吸收和骨转换程度，但受饮食影响较大，特异性差，收集24小时尿之前，应素食23天,（四）尿羟脯氨酸,【检测方法】氯胺T化学法：

尿中与肽结合的羟脯氨酸，经酸水解后释出。

用氯胺T（N-氯-对甲基苯磺酰胺钠）将羟脯氨酸氧化，使其形成含吡咯环的氧化物。

再用过氯酸破坏多余的氯胺T，终止氧化过程。

同时，使氧化物与对二甲氨基苯甲醛反应，生成红色化合物进行比色定量,（四）尿羟脯氨酸,【参考区间】清晨第二次空腹晨尿，尿羟脯氨酸与肌酐的比值（HOP/Cr）的参考区间：

0.060.01624小时尿HOP测定的参考区间：

114300mol/24h,（四）尿羟脯氨酸,【临床意义】1.增高见于儿童生长期、甲状旁腺功能亢进、甲状腺功能亢进、骨转移癌、慢性肾功能不全、Paget病、佝偻病和骨软化症、高转换型骨质疏松症、绝经后骨质疏松症等，严重骨折患者尿HOP中也可增加2.降低见于甲状腺功能低下、侏儒症等,（四）尿羟脯氨酸,三、骨代谢调节激素的测定,存在形式：

PTH-N、PTH-C和PTH-M测定形式：

PTH-C、PTH-M和完整PTH国外应用最普遍的是免疫放射法、化学发光免疫分析法测定完整的PTH分子。

国内应用最普遍的放射免疫法和化学发光免疫分析法,（）甲状旁腺激素测定,【检测方法】1.放射免疫法2.化学发光免疫分析法,（）甲状旁腺激素测定,【参考区间】放射免疫法：

成人PTH-M50330ng/L；PTH-C28693ng/L（仅供参考）化学发光免疫分析法：

成人PTH1565ng/L,（）甲状旁腺激素测定,【临床意义】1.增高见于原发性和继发性甲状旁腺功能亢进、甲状旁腺瘤、佝偻病、骨软化症、骨质疏松症等2.降低见于甲状旁腺功能减退、先天性甲状旁腺和胸腺发育不全等,（）甲状旁腺激素测定,维生素D在体内的活性形式有25-（OH）D3、1,25-（OH）2D3、24,25-（OH）2D3等。

其中25-（OH）D3为主要形式，浓度比1,25-（OH）2D3高5001000倍，并且半寿期最长（1545天），是反映皮肤合成和食物摄取维生素D营养状态的理想指标，是指导维生素D用量的最适指标,

（二）活性维生素D测定,【检测方法】

（1）放射免疫法

（2）酶联免疫法应用双抗体夹心法测定标本中人25-（OH）D3水平,1.25-（OH）D3测定,【参考区间】放射免疫法：

成人1170g/L酶联免疫法：

成人47.7144nmol/L,25-（OH）D3测定,【临床意义】1.生理性变化血清25-（OH）D3有随季节变化的特点，夏秋季高于冬春季；有随年龄增高而后下降的趋势2.病理性变化升高见于维生素D中毒症；降低见于维生素D缺乏性佝偻病、骨软化症、手足搐搦症、肾脏疾病、乳儿肝炎、骨肿瘤等,25-（OH）D3测定,【检测方法】酶联免疫法：

采用人类血清或血浆中的1,25-（OH）2D3阳离子从高度特异性单克隆抗1,25-（OH）2D3的电势交叉反应孵育中萃取，然后用酶联免疫分析方法进行定量分析,2.1,25-（OH）2D3的测定,【参考区间】成人：

39193pmol/L,1,25-（OH）2D3的测定,【临床意义】1.升高见于妇女妊娠期、原发性甲状旁腺功能亢进、维生素D依赖性佝偻病型、高钙血症性类肉瘤等2.降低见于尿毒症、骨质疏松症、甲状旁腺功能减退、维生素D缺乏性佝偻病、维生素D依赖性佝偻病I型等,1,25-（OH）2D3的测定,【检测方法】降钙素在血中的含量甚微，到目前为止，降钙素的测定方法主要有放射兔疫测定法、化学发光免疫分析法,（三）降钙素测定,【参考区间】放射免疫法：

成人95.926.0ng/L,（三）降钙素测定,【临床意义】1.增高见于孕妇、儿童、甲状旁腺功能亢进、血胃泌素过多、肾功能衰竭、慢性炎症、泌尿系统感染、急性肺损伤、甲状腺降钙素分泌细胞癌、白血病、骨髓增殖症、肺癌、食管癌、乳腺癌2.降低见于甲状腺先天发育不全、甲状腺全切患者、妇女停经后、低血钙、老年性骨质疏松症等,（三）降钙素测定,谢谢大家！

青岛市市立医院医学检验部,生物化学检验教学课件,2023/5/31,