仁里县人民医院室内质控操作规程.docx
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仁里县人民医院室内质控操作规程
室内质控
操作规程
文件编号：
ZKSOP
第A版
编制：
审核：
批准：
生效日期：
2011年5月22日
仁寿县第二人民医院检验科
目录
序号
主题内容
页号
1
临检室室内质控操作规程
4
2
血涂片评价质量控制流程
12
3
白细胞分类计数的质量控制
14
4
尿液分析和临床显微镜检查的质量控制流程
16
5
生化室室内质控作业指导书
18
6
免疫室内质量控制作业指导书
29
7
全血细胞质计数和白细胞分类复检规则
38
8
尿常规审核与显微镜复检规则
39
9
10
11
12
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临检室室内质控操作规程
1.目的
室内质控是实验室的工作人员采用一系列统计学的方法，连续地评价本实验室测定工作的可靠程度，判断检验报告是否可发出的过程。
室内质控的目的是检测、控制本室测定工作的精密度，并检测准确度的改变，提高常规测定工作的批间、批内标本检测结果的一致性。
2.范围
临检室开展的定量及定性测定项目。
3.职责
3.1检测人员：
负责每天室内质量控制的实施、记录、质控图的绘制、失控原因分析及处理。
3.2专业组长：
负责制定本组室内质控规则，质控计划，以及失控时纠正措施，定期总结，归档保存记录。
4.术语
4.1质量控制：
为达到质量要求所采取的操作技术和活动，包括：
4.1.1质量控制包括作业技术和活动，其目的在于监视过程，并排除质量环节中所有阶段中导致不满意的原因，以取得质量保证。
4.1.2质量控制和质量保证的某些活动是相互联系的。
4.2室内质控：
实验室内为达到质量要求的操作技术和活动，包括：
4.2.1在医学实验室，室内质控的目的在于监测过程，以评价检验结果是否可靠，以及排除质量环节中所有阶段中导致不满意的的原因。
4.2.2广义上室内质控适用于得出检验结果所有步骤的活动，从临床需要考虑，从收集标本，检测直至报告测定结果。
4.3控制限：
判断质控品测定的允许范围的上、下限，通常以标准差的倍数表示。
4.4质控规则：
从质控品的测定数据分析该批测定操作是否合格的判断标准。
4.5在控：
质控结果符合质控规则。
4.6失控：
质控结果未符合质控规则。
4.7精密度：
在一定条件下进行多次测定时，所得测定结果之间的符合程度，通常表示测量结果中随机误差的大小。
4.8准确度：
是测量结果中系统误差与随机误差的综合，表示测量结果与真值的一致程度。
4.9偏倚：
指测定结果与真值的偏离程度。
4.10变异系数：
测定结果的标准差与平均值的百分比值，通常用CV%表示。
4.11溯源性：
通过一条具有规定不确定度的不间断比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是国家标准或国际标准联系起来的一种特性。
5.工作程序
5.1临检室开展质控的项目及单位
5.1.1血液
（1）血液分析仪分析项：
WBC（109/L）、RBC（1012/L）、HGB（g/L）、PLT（109/L）、HCT（%）、MCV（fL）。
（2）血凝仪分析项：
PT、APTT、PT、Fbg
（3）血细胞显微镜检查项：
细胞形态、分类、计数。
5.1.2体液
（1）尿液干化学分析项：
GLU（mmol/L）、BLD（Cell/ul）、WBC（Cell/ul）、PRO（g/L）、URO（umol/L）、BIL（umol/L）、KET（mmol/L）、PH、SG、NIT。
（2）尿液沉渣镜检项：
WBC、RBC、EC、CAST（/HP）。
5.2质控方法：
5.2.1血常规、凝血、尿干化学、随仪器操作采用均值质控法。
5.2.2血细胞镜检、尿沉渣镜检、采用人员比对。
5.3质控品的选择、放置位置及保存
5.3.1血液仪器项目：
XT1800i采用SYSMEX公司提供的中值五分类全血质控血球；CD1800采用迈克公司提供的中值全血三分类质控血球。
质控品需在2-8℃冰箱冷藏；使用前恢复室温，使用后立即置2-8℃冰箱冷藏保存。
5.3.2血凝仪项目：
SF8000采用太阳生物提供的凝血质控物，使用前每瓶用1毫升蒸馏水复溶，分装成每支0.3毫升的子弹头存放于冰箱冷冻层，可保存一周，需用时取出37摄氏度水浴箱复溶。
5.3.3尿液干化学项目:
优利特公司提供尿液质控物；2-8℃冰箱冷藏。
使用时恢复室温,每次室温放置时间<1小时。
开瓶后有效时间<30天。
5.3.4检验人员比对采用5个病人标本。
5.4质控分析批长度及频次
5.4.1血细胞仪器分析项、血凝仪、尿液干化学分析项；每天一次。
5.4.2检验人员比对：
每半年一次。
5.5质控的要求
5.5.1每天在检测标本前先检测质控品，质控结果在控后才开始检测病人标本。
5.5.2严格按质控品说明书操作和保存。
5.5.3不使用超过保质期的质控品。
5.5.4质控品要在与患者标本同样测定条件下进行测定。
5.6质控品均值和标准差的确定及质控规则的选择：
5.6.1血液仪器项目、血凝项目：
采用Levey-Jennings质控图。
（1）Levey-Jennings质控图的绘制：
质控数据自动存储在实验室报告系统质控管理软件由软件自动绘图。
（2）均值、标准差及控制线的确定：
a质控品新旧交替重叠时候：
在月底的3天内，新批号质控品与旧批号质控品同时进行测定，在旧批号质控品不失控的情况下，每天分析新批号各水平质控品重复3-4次,至少收集10次结果。
收集数据后，计算平均数。
对数据进行离群值检验（剔除超过3S外的数据）。
如果发现离群值，需重新计算余下数据的平均数。
以此作为新质控品的均值，并以累积变异系数（CV）*均值计算标准差（SD）作为当月标准差。
b设立新质控图的平均值和标准差。
以均值为中心线，x±2SD上下警告线，x±3SD为上下失控线。
（3）“失控”与否的判断规则：
Westgard多规则。
1）12S：
1个控制品测定值超过
±2S控制限，作为警告界限；一旦出现，将观察是否出现违反以下几条规则的情况（即违反l3S、22S、R4S、41S、10
、），如果出现，为失控。
不出现为在控
2）l3S：
1个控制品测定值超过
±3S控制限，判定为失控
3）22S：
2个连续的控制品测定值同时超过
+2s或
-2s控制限，提示系统误差；
4）R4S：
在同一批内控制品最高测定值和最低测定值之间的差值超过4s，提示严重随机误差；
5）41S：
4个连续的控制品测定值同时超过
+S或
-S，提示系统误差；
6）10
：
10个连续的控制品测定值落在均值的一侧，提示系统误差。
（4）"即刻法"质控
采用Crubbs氏法，只需连续测定3次，即可对第3次检验结果进行检验和控制。
具体计算方法如下：
（1）计算出测定结果（至少3次）的平均值（x）和标准差（s）。
（2）计算SI上限值和SI下限值：
SI上限=（x最大值-x）/s
SI下限=（x-x最小值）/s
（3）查表3，将SI上限和SI下限与SI值表中的数值进行比较
SI值表
N
n3s
n2s
n
n3s
n2s
3
1.15
1.15
12
2.55
2.29
4
1.49
1.46
13
2.61
2.33
5
1.75
1.67
14
2.66
2.37
6
1.94
1.82
15
2.70
2.41
7
2.10
1.94
16
2.75
2.44
8
2.22
2.03
17
2.79
2.47
9
2.32
2.11
18
2.82
2.50
10
2.41
2.18
19
2.85
2.53
11
2.48
2.23
20
2.88
2.56
当SI上限和SI下限值〈n2s时，表示处于控制范围之内，可以继续进行测定，并重复以上计算；当SI上限和SI下限有一值处于n2s和n3s值之间时，说明该值在2s–3s范围，处于“警告”状态；当SI上限和SI下限有一值〉n3s时，说明该值已在3s范围之外，属“失控”。
数字处于“警告”和“失控”
状态应舍去，重新测定该项质控品和病人样本。
舍去的只是失控的这次数值，其它次测定值仍可继续使用。
当检测的数字超过20次以后，可转入使用常规的质控方法进行质控。
（5）本科室室内质量分析要求：
项目
CV（%）
Hct
4.0
Hb
2.0
WBC
6.0
MCV
2.5
RBC
2.5
5.6.2尿液干化学项目：
5.6.2.1质控物:
优利特尿液质控
5.6.2.2质控方法
1）、仪器：
龙鑫LX7860、优利特200B。
2）、将质控物按照说明书配好后，轻轻颠倒混匀放置半小时后倒入试管中，龙鑫LX7860在系统菜单中开启打印机设置为内置，再用急诊位进行急诊测试，测试结果将会被打印出来。
优利特200B按照常规测试即可，具体参加优利特200B操作规程。
5.6.2.3判定规则
1、质控物某一膜块测定结果与“靶值”相差±1个膜块内是允许的，否则为“失控”。
2、质控物的测定结果由“正常”变为“异常”或相反，均为“失控”。
3、配套质控物要求90%的结果完全与予定结果相符,10%的结果只允许相差一个“级差”（如尿蛋白测定,予期结果为++,则90%的结果应为++,10%的结果可为+或+++）。
5.7质控品的测定
5.7.1血常规质控程序：
1）将血常规质控品放置室温平衡20分钟后，颠倒混匀5-8次。
2）主机清洗后各项空白指标正常后，处于ready状态下，放入质控品（编号为QC01）测试质控标本，方式如同普通病人样本。
3）待测试完成后，在LIS系统中将得数据。
4）打开质控系统检查当天质控结果。
5）如超出±2SD，进入WESTGARD规则进行是否失控。
5.7.2血凝仪质控程序
1）将凝血质控品1支放置于37摄氏度水浴箱复溶20分钟后，轻轻混匀。
2）将质控品放在血凝仪1号测试位，点击质控—设置—选中质控物批号—添加质控—开始—结果出来以后点击保存，在质控系统中将得数据。
3）打开质控系统检查当天质控结果，按照WESTGARD规则进行是否失控。
5.7.3尿分仪的质控程序
1）将质控物按照说明书配好后，轻轻颠倒混匀放置半小时后倒入试管中，龙鑫LX7860在系统菜单中开启打印机设置为内置，再用急诊位进行急诊测试，测试结果将会被打印出来。
优利特200B按照常规测试即可，具体参加优利特200B操作规程。
2）将质控品做为普通样本在尿分仪上测定。
3）待测试完成后，将结果张贴在质控本上并进行判定。
5.8质控结果的处理
5.8.1在控
（1）做好质控记录后可进行病人标本检测。
（2）做好比对记录,比对合格者方可进行病人标本检测。
5.8.2失控
操作者在测定质控时，如发现质控数据违背了控制规则，详细填写失控报告单（包括违背哪一项失控规则，失控原因、采取的纠正措施）。
查找原因，如当天质控未通过，请示专业组长，同时报质量负责人。
a失控原因分析:
当得到失控信号时，可以采用如下步骤去寻找原因：
检查原因（各个通道、试剂、电源等）
1重测同一质控品。
此步主要是用以查明人为误差，每一步都认真仔细操作，以查明失控的原因；另外，这一步还可以查出偶然误差，如是偶然误差，则重测的结果应在允许范围内（在控）。
如果重测结果仍不在允许范围，则可以进行下一步操作。
2新开一瓶质控品，重测失控项目。
如果新开的质控结果正常，那么原来那瓶质控可能室温放置时间过长而变质，或者被污染，丢弃。
如果结果仍不在允许范围，则进行下一步。
3进行仪器维护，重测失控项目。
检查仪器状态，查明光源是否需要更换，比色杯是否需要清洗或更换?
对仪器进行清洗等维护.另外还要检查试剂，此时可更换试剂以查明原因。
如果结果仍不在允许范围，则进行下一步。
4重新校准，重测失控项目。
用新的校准液校准仪器，排除校准液的原因。
5请专家帮忙。
如果前四步都未能得到在控结果，那可能是仪器或试剂的原因，只有和仪器或试剂厂家联系请求他们的技术支援。
b失控后可按下面进行操作：
第1步,用质控物进行质控
在质控范围内超出质控范围
开始进行标本测定进行2步
第2步，检查质控物是否失效、是否正确储存、是否污染
使用新的质控物重新实验
在质控范围内超出质控范围
开始进行标本测定
检查试剂、仪器
进行仪器检修
在质控范围内再做质控
进行常规标本检测
5.9质控数据的管理
5.9.1质控数据的统计学处理:
每个月末,应将当月的所有质控数据汇总和统计学处理，内容包括:
计算当月均值、标准差，及CV值，确定CV值是否在允许范围内。
并做出评价。
5.9.2质控数据的保存：
每个月末,应将当月的所有质控数据汇总整理后存档保存,存挡的质控数据包括:
（1）当月所有项目原始数据。
（2）当月所有项目质控图。
（3）所有计算的数据（包括平均值,标准差,变异系数等）。
（4）当月失控报告单（包括失控数据,违背规则,失控原因,采取的纠正措施等）。
5.9.3每月上报质控数据图表:
即所有测定质控数据汇总表及质控图。
5.9.4室内质控数据的周期性评价：
（1）质量监督员对每天,每月的室内质控过程监督并做出评价。
（2）组织工作人员对每月质控情况进行讨论,提出改进措施。
6.相关记录
6.1《室内质控失控报告单》
6.2《内部比对记录及结果分析评价表》
血涂片评价质量控制流程
（一）样本采集
将静脉血采集于EDTA－K2抗凝剂中（浓度为每毫升血液含1.5～2.2mgEDTA－K2·H2O）。
采血后立即混匀，应拒绝分析有肉眼可见凝块的样本。
（2）血涂片制备
血涂片制备是否合格、染色的好坏直接关系到检验结果的质量。
1、要求所用玻片清洁、干燥、无尘，大小为25mm×75mm，厚度为0.8～1.2mm。
使用载玻片时，不要用手触及玻片表面。
2、做好明确标记。
3、使用EDTA－K2抗凝血液样本时，应在采集后4小时内制备血涂片。
在制片前，样本应充分混匀。
注意，样本不能冷藏。
4、每份样本制作3张血涂片。
5、如果样本中白细胞数量少时，需要制备更多血涂片（如6张）。
6、用楔形技术制备血涂片。
在玻片近一端1/3处，加一滴（约0.05ml）充分混匀的血液，握住另一张较狭窄的、边缘光滑的推片，从血滴前沿方向接触血液，以30o～45o角使血滴沿推片迅速散开，快速、平稳地推动推片至玻片的另一端。
7、血细胞比容与涂片关系。
血细胞比容高于正常时，红细胞较多，血液粘度较高，用较小的角度涂片，可获得满意的血膜。
相反，血细胞比容低于正常时，血液粘度较低，需用较大角度涂片。
8、良好血涂片的要求
1）血膜至少长25mm，至玻片两侧边缘的距离至少为5mm。
2）血膜边缘要比玻片边缘窄，且边缘光滑，适用于油镜检查。
3）血细胞从厚区到薄区逐步均匀分布，末端呈方形或羽毛状。
4）血膜末端无粒状、划线或裂隙。
所有这些情况会使白细胞集中在这些区域内。
5）在镜检区域内，白细胞形态应无人为异常改变。
通常，随着保存时间的延长，抗凝血会造成白细胞形态的改变，如胞浆内形成空泡，核分解破裂等。
应将抗凝血液保存时间的影响减小到最低限度。
除部分淋巴细胞增生性疾病外，镜检区域内破损白细胞量应<2％。
6）无人为污染。
9、血膜必须充分干燥，否则在染色过程中容易脱落。
（三）血涂片染色
染色的目的是使细胞的主要结构，如细胞膜、细胞质、细胞核等染上不同的颜色，以便于镜下观察识别。
良好的染色能准确鉴别成熟和未成熟白细胞或异常细胞。
1.染料的选择
染料的质量直接影响染色效果。
在pH6.4～7.0条件下，染料与细胞中特定成分（细胞核和细胞浆特殊颗粒）相互作用，产生典型的颜色，如细胞核染深紫色，红细胞染鲜亮的橙红色。
粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和其他细胞必须能显示清晰的核浆分界，能识别核染色质成分和细胞浆的颜色差异。
本实验室采用BASO公司的商品化试剂瑞-姬染色液，保证了染料的质量。
2.染色效果分析：
2.1可接受的染色情况：
血膜外观呈淡粉红色或琥珀色。
显微镜下，成熟红细胞呈粉红色。
白细胞胞质中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。
2.2染色偏酸：
红细胞和嗜酸粒细胞颗粒偏红，白细胞核呈淡蓝色或不着色。
2.3染色偏碱：
所有细胞呈灰蓝色，颗粒深暗；嗜酸粒细胞可染成暗褐色，甚至紫黑色或蓝色；中性颗粒偏粗，染成紫黑色。
3.染色过深、过浅的处理
3.1染色过深、过浅与血涂片中细胞数量、血膜厚度、染色时间、染液浓度、pH值密切相关。
对于重要的标本可采用先试染的方法，根据试染效果调节第二次染色方式。
3.2纠正染色过深可缩短染色时间或稀释染液。
3.3纠正染色过浅可延长染色时间。
3.4如果标本片有限出现了染色过深、过浅的情况，可用如下办法挽救：
染色过深可加少量缓冲液覆盖血膜部分褪色，在显微镜下观察褪色情况及时终止。
染色过浅可重加染色液和缓冲液复染，也要在显微镜下观察及时终止。
白细胞分类计数的质量控制
1.需分类的外周血有核细胞
外周血可见多种有核细胞。
常见的有：
中性分叶核粒细胞、中性杆状核粒细胞、淋巴细胞、异型淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。
异常情况下，可有各种幼稚细胞和异常细胞。
2.血涂片检查步骤
2.1血涂片显微镜检查
2.1.1首先在低倍镜下（10倍～40倍）进行浏览，观察有无异常细胞和细胞分布情况。
然后，在100倍油镜下，观察细胞浆内的颗粒和核分叶情况。
2.1.2检查从约50％的红细胞互相重叠区域开始，向红细胞完全散开的区域推移。
血涂片较薄的区域，呈羽毛状，为“血片边缘”。
2.1.3中性粒细胞，单核细胞和淋巴细胞分布均匀的区域为血涂片分类“可接受”区域。
当白细胞总数正常时，在血涂片尾部和边缘，每油镜视野所见的白细胞数量不超过血涂片体部的2～3倍。
2.1.4除某些病理情况（如慢性淋巴细胞白血病）外，破碎细胞或不能识别细胞的数量不超过白细胞总数的2%。
若破碎细胞仍能明确鉴别（如破碎的嗜酸性粒细胞）应包括在分类计数中。
在结果报告中，应设其他栏，以备填写破碎细胞或不能识别细胞，并作适当描述。
2.2计数方法
2.2.1采用“城垛式”方法检查血涂片。
每个明确识别的细胞必须归入下列分类中：
中性分叶核粒细胞；中性杆状核粒细胞；淋巴细胞；异型淋巴细胞；单核细胞；嗜酸性粒细胞；嗜碱性粒细胞；其他有核细胞（除有核红细胞外）。
能明确识别的破碎细胞，应恰当分类
。
2.2.2每张血涂片应计数200个白细胞，若样本中白细胞数量减少，应增加检查血涂片的数量。
2.2.3白细胞分类结果以百分率和绝对值表示。
2.2.4计数所有的有核红细胞，结果以每100个白细胞计数中见到几个表示。
3、检验人员要求和考核
3.1检验人员的要求
3.1.1检验人员的经验
检验人员必须能对所有常见白细胞进行分类，并了解大多数白细胞的形态异常，包括先天性和获得性。
参与细胞形态学检查的检验人员必须进行专业培训，并具备实际工作经验。
3.1.2检验人员的态度
检验人员的工作态度、动机和专心程度是关键因素。
因为白细胞分类计数是一项主观性很强的工作，影响分类计数的因素很多，有检验人员的态度、实验室环境条件和工作量等。
对于以每张血涂片计数200个白细胞的参考方法工作量来说，每天每个检验人员血涂片检验数量约为15～25张。
3.2血涂片考核
3.2.1考核样本
3.2.1.1保留一套考核血涂片作为标准片，用于检验人员的培训和考核。
样本必须包含7种类型白细胞（中性分叶核粒细胞、中性杆状核粒细胞、淋巴细胞、异型淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞）。
其中，至少有一份样本含有少量有核红细胞，一份含有少量未成熟白细胞。
3.2.1.2血细胞形态考核：
选取任意年份形态学室间质评图片资料进行考核评分。
尿液分析和临床显微镜检查的质量控制流程
尿干化学分析：
尿常规检验自动化仪器由于多种因素的影响，会导致某些随机误差和系统误差，确保分析数据的准确可靠，尿液分析中应用质控品进行质量控制。
尿试剂带的质量管理
（1）尿试剂带要避免阳光直接照射，放在30摄氏度以下，防潮、通风条件好处密封保存。
（2）使用时取出必要数，盖紧容器。
取出而没有使用过的试剂带不要重复放回原试剂带瓶内，以免影响试验结果。
（3）开封后的尿试剂带严禁冰箱存放，以防潮湿，不要放置易污染场所。
4）试剂带的反应部分严禁用手接触，不要使用变色的试剂带、过期的试剂带。
（5）每瓶试剂带开封前用标准质控尿检测其敏感性和准确性，合格后方可使用。
二、仪器的质量管理
尿化学分析仪是一种光学电子仪器，需要正确使用和保养。
仪器均附有“空白试带”是用以检查仪器是否处于正常运转状态的工具，应在规定时间检测并作好记录，如果检测结果与"空白试带"要求结果不符，应停止使用并请厂商修理。
仪器的保养十分重要，如进样板上的污垢要及时处理；进样板上抽液小孔不能堵塞；以及试带位置有无移位；排液系统是否漏气；废液瓶每天都应清洗等措施，不注意这些同样会影响尿分析结果。
三、尿液质控品的质量管理
经常进行质控检测，掌握尿试带的状态，防止保存条件不妥可造成使用前已失活或变质，保证分析数据准确可靠。
做好质控记录并存档备查。
（一）室内质控流程
1、对新购进的仪器要进行技术性能全面测试和评价，鉴定合格后方可使用。
2、每天开机前，要对仪器进行全面检查后，确认无误后方可开机。
3、对使用中的仪器，要根据操作需要和厂家对仪器的要求定期对仪器进行校正，这是保证仪器准确的根本。
4、每天工作前对仪器和试剂带按室内质控流程图进行检查，在检查中首先应将质控物预温至室温，否则会因温度影响导致部分结果偏低。
5、操作应严格按照操作说明书进行，并建立完整的SOP文件，对每天操作出现的问题，以及维护保养、维修的情况逐一登记。
6、测定完毕后，要对仪器进行全面清理、保养，保证仪器每天处于最
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