现代生化技术复习题.docx

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现代生化技术复习题

.第一章提取与分离技术

一、名词解释

1、机械破碎法

2、物理破碎法

3、温度差破碎法

4、压力差破碎法

5、超声波破碎法

6、渗透压变化法

7、化学破碎法

8、酶促（学）破碎法

9、自溶法

10、抽提

11、盐溶

12、盐析

13、沉淀分离法

14、分段盐析

15、KS分段盐析

16、β分段盐析

17、等电点沉淀法

18、有机溶剂沉淀法

19、复合沉淀法

20、金属盐沉淀法

21、选择性变性沉淀法

二、填空题

1、细胞破碎的方法有、和。

2、机械破碎法按照使用机械的不同可分为、和。

3、常用的物理破碎法有、和等。

4、常用的压力差破碎法有、和等。

5、化学破碎法采用的表面活性剂有和两种。

其中之一按其带电荷性质又可分为和

两种。

6、根据抽提时所采用的溶剂或溶液的不同。

抽提的方法主要有、、和等

7、常用的沉淀分析法有、、、、和等。

8、常用的金属盐沉淀法有和。

9、蛋白质盐析时，带入大量盐离子杂质，可采用、和方法脱盐。

10、要分离和提纯核酸过程中，常用来沉淀DNA和RNA。

11、常用的使蛋白质沉淀的方法有、、、和等。

12、

三、是非题（对的打√、错的打×）

1、渗透压变化法可用于革兰氏阳性菌的破碎。

（）

2、有机溶剂破碎细胞主要是使细胞膜磷脂结构破坏，从而使细胞膜的透过性增强。

（）

3、用化学法破碎细胞提取酶时，经常用离子型表面活性剂。

（）

4、用化学法破碎细胞提取酶时，用非离子型表面活性剂最好。

（）

5、对于具有细胞壁结构的细胞采用酶法破碎时，应根据细胞壁结构选择不同的酶。

（）

6、酸性物质易溶于酸性溶剂中，碱性物质易溶于碱性溶液中。

（）

7、在等电点时两性电解质溶解度最小。

（）

8、抽提两性电解质时应避开其等电点。

（）

四、选择题

1、利用突然降压法破碎革兰氏阴性大肠杆菌应选择期的细胞破碎效果最佳。

A调整期B对数生长期C平衡期D衰退期

2、提取膜结合酶采用法破碎细胞最佳。

A高压冲击法B突然降压法C渗透压变化法

3、超声波破碎法最适合于破碎。

A动物细胞B植物细胞C微生物细胞

4、利用超声波法破碎微生物细胞对期的细胞破碎效果最佳。

A调整期B对数生长期C平衡期D衰退期

5、破碎革兰氏阳性菌选用。

A溶菌酶Bβ-葡聚糖酶C几丁质酶

6、破碎酵母细胞选用。

A溶菌酶Bβ-葡聚糖酶C几丁质酶

7、破碎霉菌选用。

A溶菌酶Bβ-葡聚糖酶C几丁质酶

8、纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶共用适合破碎。

A动物细胞B植物细胞C微生物细胞

9、胰蛋白酶可采用提取。

A盐溶液B酸溶液C碱溶液D有机溶剂

10、在提纯α-淀粉酶时，常采用。

A盐析沉淀法B有机溶剂沉淀法C复合沉淀法D选择性变性沉淀法

11、在DNA提取中起沉淀DNA作用的是。

　　　A、EDTA　B、SDSC、酚　D、无水乙醇

五、简答题、

1、细胞破碎有哪些方法？

2、突然降压法破碎细胞的效果取决于哪几个因素？

3、抽提有哪些方法？

4、沉淀法有哪些？

5、蛋白质盐析沉淀时为什么选择中性盐硫酸铵？

6、蛋白质用硫酸铵沉淀时应注意哪些事项？

六、问答题

1、试论述影响有效成分抽提的因素。

2、试用三种或三种以上的方法分离RNA和DNA。

3、用以下原料试剂，设计一个实验来提取RNA（粗品）

原料：

干酵母粉。

试剂：

0.2%氢氧化钠溶液;乙酸;95%乙醇;无水乙醚

仪器;自选,但必须为生化实验室常用仪器。

4、请设计一种方法来纯化真核细胞裂解液中的成熟mRNA。

第二章过滤与膜分离技术

一、名词解释

1、过滤

2、非膜过滤

3、粗滤

4、常压过滤

5、加压过滤

6、减压过滤

7、过滤速度

8、膜过滤

9、加压膜分离

10、微滤

11、超滤

12、反渗透

13、电场膜分离

14、扩散膜分离

15、流率

16、浓差极化

17、透析

二、填空题

1、根据过滤介质的不同，过滤可以分为和两种。

2、根据过滤介质截留物质颗粒大小不同，过滤分为、、和4大类。

3、非膜过滤主要包括和两类。

4、根据推动力产生的条件不同，过滤分为、和3种。

5、根据物质颗粒或分子通过薄膜的原理和推动力的不同，膜拜分离可以分为、和

3大类。

6、根据所截留物质颗粒大小不同，加压膜分离可分为、和3种。

7、电场膜主要包括和两类。

三、是非题（对的打√、错的打×）

1、所有的微滤都属于粗滤。

（）

2、膜过滤中要防止浓差极化现象。

（）

四、选择题

1、实验室和生产过程用的吊篮和吊袋过滤属于。

A常压过滤B加压过滤C减压过滤

2、实验室和生产中使用的各种真空抽滤机过滤属于。

A常压过滤B加压过滤C减压过滤

3、截留的主要物质是细胞的过滤属于。

A粗滤B微滤C超滤D反渗透

4、截留的主要物质是细菌和灰尘的过滤属于。

A粗滤B微滤C超滤D反渗透

5、截留的主要物质是病毒和生物大分子的过滤属于。

A粗滤B微滤C超滤D反渗透

6、截留的主要物质是生物小分子、盐、离子的过滤属于。

A粗滤B微滤C超滤D反渗透

7、营养物质过滤除菌属于。

A粗滤B微滤C超滤D反渗透

8、海水淡化属于。

A粗滤B微滤C超滤D反渗透

五、简答题

1、请把过滤进行分类并说明每一类的主要特征。

2、影响过滤速度和效果的因素有哪些？

六、问答题

1、论述电场膜分离的原理。

2、论述影响膜过滤流率的主要因素。

3、某一酶提取液，实验已证明在适宜条件下，它对底物有催化作用，用该酶制剂做如下实验：

（1）取出上述提取液一部分，充分加热煮沸后，冷却至室温，在同等条件下，加底物，结果对底物无催化作用。

为什么？

2）另一部分酶提取液置于透析袋内对蒸馏水充分透析，然后在同样条件下，进行酶反应实验，结果对底物也不起作用。

为什么？

（3）如果将

（1）中冷却溶液和

（2）中透析袋中剩余物加在一起，混合后，在同样条件下用原底物试验，是否有催化活性？

为什么？

第三章萃取分离技术

一、名词解释

1、萃取分离

2、有机溶剂萃取

3、双水相萃取

4、超临界萃取

5、夹带剂（携带剂）

6、反胶束萃取

7、反胶束（反胶团）

8、正胶束

9、胶束

二、填空题

1、按照两相的组成不同，萃取可以分为、、和。

2、双水相萃取的效果是由组分在双水相体系中的决定的。

3、超临界萃取的工艺过程分为和两个过程。

4、二氧化碳超临界点的温度是0C，超临界压力为Mpa。

三、是非题（对的打√、错的打×）

1、降低水相的离子强度，有利于极性物质进入反胶束中（）

2、对于阳离子表面活性剂，当水相中pH低于蛋白质等电点时，有利于蛋白质进入反胶束中。

（）

3、温度升高不利于反胶束萃取。

（）

4、增加离子强度，有利于将反胶束内的物质反萃取出来。

（）

四、选择题

1、超临界CO2适合萃取物质。

A、酸性B、碱性C、极性D、非极性

2、

五、简答题

1、简述双水相萃取的原理

2、双水相萃取中影响组分在两相中的分配系数的主要因素有哪些？

3、简述超临界萃取的操作过程。

4、简述反胶束萃取的过程。

六、问答题

1、试论述超临界萃取的原理。

2、试论述反胶束萃取的原理。

第四章层析分离技术

一、名词解释

1、层析分离

2、固定相

3、流动相

4、吸附层析

5、分配层析

6、分配系数

7、薄层层析法

8、气相层析

9、载气

10、担体

11、离子交换层析

12、凝胶层析（分子筛层析、分子排阻层析）

13、洗脱体积

14、外体积

15、内体积

16、亲和层析

17、层析聚焦

18、多缓冲离子交换剂

19、多缓冲溶液

20、疏水层析

21、免疫印迹

二、填空题

1、按照流动相不同把层析分为和两大类。

2、吸附层析法装柱有和两种。

3、吸附层析法洗脱方法有、和三种。

4、根据固定相的不同气相层析分为和两种。

5、气固层析分离组分的依据是，气液层析分离组分的依据是。

6、离子交换剂是由　　　　、　　　　和　　　　构成的。

7、PAGE电泳分离蛋白质的主要依据是样品中各种蛋白质的　　　和　　　　的不同。

8、在凝胶层析中，为了使物质能有效地分离，一般分配系数Kd选择的范围是___________，而当

Kd＞1时，则表示有__________现象。

三、是非题（对的打√、错的打×）

1、在吸附层析法中对于极性组分，用极性大的溶剂洗脱效果较好。

（）

2、聚酰胺薄膜层析只适用于能够形成氢键的极性分子的分离。

（）

3、凝胶层析中分离组分的唯一依据是分子量（）

四、选择题

1、DEAE-纤维素是一种交换剂。

A、阴离子B、阳离子C、中性分子

2、在凝胶层析中，若被分离物质能全部进入凝胶网孔内，则洗脱体积为。

A、Vo+Vg　　B、Vo+Vt　　C、Vo+Vi　　D、Vo+Ve

3、已知甲、乙、丙三种物质其分子量大小顺序是甲﹥乙﹥丙，则通过凝胶过滤时，最先洗脱下来的是。

A、甲物质B、乙物质C、丙物质D、无法确定

4、对一个富含组氨酸残基的蛋白质，在使用离子交换层析时应优先考虑。

A、严格控制蛋白质上样液的浓度B、严格控制盐浓度

C、严格控制洗脱液的PH值D、严格控制洗脱液的体积

5、SDS-PAGE测定蛋白质的相对分量是根据各种蛋白质。

A、在一定PH值条件下所带净电荷的不同B、分子大小不同

C、分子极性不同D、溶解度不同

6、将抗体固定在层析柱的载体上，使抗原从流经此柱的蛋白质样品中分离出来，这技术属于。

A、吸附层析B、离子交换层析C、分配层析D、亲和层析E、凝胶过滤

7、SDS是一种去污剂。

　　A、阴离子B、阳离子C、非离子

8、亲和层析分离豌豆凝集素的实训中与豌豆凝集素特异结合的物质是　　　。

　　A、半乳糖　　B、葡聚糖凝胶　　C、糖基　　D、氯化钠

9、有关凝胶层析的说法错误的是　　　　。

　　　　A、凝胶层析也称为排阻层次　　B、凝胶的是一类具有三位多空网状的结构

　　　　C、凝胶的网孔大小与交联度有关D、分子量大的组分移动较慢，后出峰

10、进行疏水吸附作用层析时，以下哪种条件比较合理？

A、在有机溶剂存在时上柱，低盐溶液洗脱。

B、在有机溶液存在时上柱，高盐溶液洗脱。

C、低盐溶液条件下上柱，高盐溶液洗脱。

D、高盐溶液上柱，按低盐，水和有机溶剂顺序洗脱。

E、低盐缓冲液上柱，低盐洗脱。

11、有关Sephadex的叙述错误的是。

　　　A、具有三维空间网状结构

　　　　B、G后面的数字表示每克干凝胶吸水量×10

　　　　C、网孔的大小取决于交联度　

　　　D、数字越大，交联度越小，分离分子量大的物质

12、以下哪种方法可测定蛋白质的相对分子量。

A、吸附层析B、凝胶过滤层析C、亲和层析D、离子交换层析

13、以下哪种方法可测定蛋白质的相对分子量。

A、吸附层析B、密度梯度离心C、亲和层析D、离子交换层析

14、用阳离子交换树脂来分离氨基酸，随着pH的升高，氨基酸洗脱下来的次序是。

A、先碱性氨基酸，再中性氨基酸，后酸性氨基酸。

B、先酸性氨基酸，再中性氨基酸，后碱性氨基酸。

C、先中性氨基酸，再酸性氨基酸，后碱性氨基酸。

D、先中性氨基酸，再碱性氨基酸，后酸性氨基酸

5、简答题

1、简述影响Rf的主要因素

六、问答题

1、试论述吸附层析法的原理。

2、试论述分配层析的原理。

3、试论述离子交换层析的原理。

4、试论述凝胶层析的原理。

5、试论述亲和层析的原理。

.

6、试论述层析聚焦的原理.。

7、在一抽提液中含有三种蛋白质，其性质如下：

蛋白质相对分子量等电点

A200008.5

B210005.9

C50006.0

试设计一个方案来分离这三种蛋白质。

8、等电点相同、互不反应的A、B、C三种蛋白质混合液，其分子量分别为12000、70000、75000。

B是含葡萄糖的糖蛋白，A和C为普通蛋白质。

试设计一种分离这三种蛋白质的方案。

9、请设计两种方案测定某种末知蛋白质分子量并阐述其原理。

10、一蛋白质的混合物在pH6的DEAE-纤维素柱中被分离，pH6稀盐溶液缓冲液洗脱中主要有C蛋白质，用pH6的高盐缓冲液，B蛋白质和A蛋白质依次被洗脱，用凝胶过滤测定分子量，A蛋白质的表观分子量是240000，B蛋白质的分子量是120000，C蛋白质的分子量是60000。

但SDS-PAGE只发现一条带。

请分析实验结果。

10、论述分子排阻层析的原理并指出从分子排阻层析柱上洗脱下列蛋白质的顺序。

分离蛋白质的范围是5000到400000。

这些蛋白质的分子量如下：

蛋白质分子量

肌红蛋白（马心肌）16900

过氧化氢酶247500

细胞色素C（牛心肌）13370

肌球蛋白（鳕鱼肌）524800

糜蛋白酶原（牛胰）13240

血清清蛋白（人）68500

10、利用阴离子交换层析分离下列每一对氨基酸。

哪一对氨基酸首先被pH=7的确Buffer从离子交换机柱上洗脱下来。

A、Asp和LysB、Arg和MetC、Glu和ValD、Ser和Ala

11、用离子交换层析法分离纯化生物大分子时应考虑的因素有哪些？

12、某同学对经过若干分离纯化步骤后的蛋白质进行PAGE，结果只得到一条电泳谱带，于是该同学认为目的蛋白已完全纯化，你同意他的观点吗？

为什么？

13、

第五章电泳技术

一、名词解释

1、电泳

2、泳动度

3、电渗

4、纸电泳

5、薄膜电泳

6、凝胶电泳

7、聚丙烯酰胺凝胶电泳

8、等电点聚焦电泳

9、对角线电泳

10、Southernblot

11、Northernblot

12、Westernblot

13、Easternblot

二、填空题

1、带电颗粒在电场中移动的速度主要决定于颗粒的、和。

2、根据电场电压的高低可将电泳分为和。

3、凝胶电泳与其它电泳的主要区别在于其同时具有和双重作用。

4、按凝胶的组成系统可将聚丙烯酰胺分为、、和四种。

5、聚丙烯酰胺凝胶电泳中，组分迁移率主要决定于它的、和。

6、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中，组分的电泳迁移率主要取决于其，而与组分的和

无关。

7、不连续的凝胶电泳具有、和等三种效应，

8、凝胶电泳中最常用的凝胶有和两种。

9、在PAGE电泳中，T%越大，表示凝胶孔径越，而机械强度越，适合于分离分子量的

物质。

10、双向电泳时，通常将________作为第一相电泳，以__________作为第二相电泳。

11、用层析聚焦方法分离纯化蛋白质的依据是和。

12、Southern印迹法是研究转移和鉴定的常规技术。

13、Northern印迹法是研究转移和鉴定的常规技术。

14、Western印迹法是研究转移和鉴定的常规技术。

15、Easternbloting法是研究转移常规技术。

16、脉冲场电泳被用来分离。

17、Northernbloting是将变性后转移到时硝酸纤维素膜上，再与进行杂交。

18、Western印迹法原理是用鉴定蛋白质的一种方法。

三、是非题（对的打√、错的打×）

1、溶液的离子强度越高，颗粒在其中泳动的速度越快。

（）

2、凝胶层析与凝胶电泳分离物质中分子筛效应是一样的（）

四、选择题

1、制备聚丙烯酰胺凝胶常用催化系统是。

　　A、Bis-TEMEDB、过硫酸铵-TEMED　C、过硫酸铵和核黄素

D、TEMEDE、Bis-过硫酸铵

2、不连续PAGE电泳中浓缩胶中称为快离子的是　　　　。

　A、氯离子　B、甘氨酸　C、蛋白质　　D、Tris

3、有关DNA的转移电泳分析为　　　。

A、SouthernblotB、Northernblot　C、Westernblot　D、Easternblot

4、可用于等点聚焦电泳的两性电解质是。

　A、Acr　　B、Bis　　C、Ampholine　D、SDS

5、SDS-PAGE的蛋白质电流迁移率只与哪种因素有关。

A、电荷B、分子量C、等电点D、形状

6、以下哪种方法可测定蛋白质的相对分子量。

A、吸附层析B、SDS-PAGEC、亲和层析D、离子交换层析

五、简答题

1、影响泳动速度的因素有哪些？

2、简述等电聚焦的优缺点。

六、问答题

1、试论述电泳的基本原理。

2、试论述聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理。

3、试论述SDS－凝胶电泳测定蛋白质相对分子量的原理。

4、试论述等电点聚焦电泳的原理。

5、怎样从组织中分离提纯某一特定蛋白质？

（简述主要步骤和使用方法）

5、凝胶过滤或分子筛层析是一种以蛋白质大小为基础的分离蛋白质的方法，蛋白质溶液放在填有高度水化的交联聚合材料（如sephadex-交联葡聚糖）细珠上。

不同大小的蛋白质穿过水化细珠微孔的能力不同。

较小的蛋白质要比较大的容易穿过，因而较小的蛋白质过柱的速度要比较大的慢。

分离蛋白质的第二种技术是圆盘电泳。

它使蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶支持物中，受到电场的作用。

在变性剂十二烷基硫酸钠（SDS）存在下进行电泳，蛋白质分子按大小被分离开来，较小的分子移动得最快。

（SDS可使蛋白质变性，并与它们进行非特异性结合，给出一个恒定的电荷质量比）。

这两种方法都是根据分子大小对蛋白质进行分级分离的。

并且都使用交联聚合物作为支持介质。

为什么在凝胶过程中小分子比大分子更易滞留，而在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中情况恰好相反？

6、已知混合样品中有Gly、Asp、Gln、Hyp。

将此样品在pH=6.0的磷酸缓冲液中进行电泳，能否将这几种氨基酸分开？

迁移的相对位置如何？

试分析说明并用图表示。

（注Gly：

pK1=2.34,pK2=9.60;Asp:

pK1=2.09,pK2=3.65,pK3=9.65;Gln:

pK1=2.17,pK2=9.13;

Hyp:

pK1=1.92,pK2=9.73）

7、分离生物大分子的方法有哪些？

它们的依据是什么？

8、根据分离的基本原理的不同，电泳可以分为几类？

简述它们的基本原理及用途。

9、请例举三种蛋白质分子量的测定方法、并简述其原理。

10、通过SDS电泳和分子筛层析测定血红蛋白的相对分子量为何不同？

11、测定蛋白质等电点的方法有哪几种？

12、电泳是分离生物大分子的主要方法之一，请简述其原理；SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可用以测定蛋白质的相对分子质量，其原理是什么？

相对分子质量不同的蛋白质在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率与其相对分子质量之间有什么关系？

第九章气体检测技术

一、名词解释

1、气体检测技术

2、华勃氏呼吸仪检压法

二、填空题

1、气体检测技术检测的气体主要有、和。

2、气体检测技术的主要仪器有和。

3、华勃氏呼吸仪检压法主要用于检测和的检测。

三、问答题

1、试论述华勃氏呼吸仪检压法的原理。

2、试论述范·斯莱克检测仪测定α-氨基酸的原理。

第十章生物检测技术

一、名词解释

1、生物检测技术

2、生物效价

3、毒性试验

4、急性毒性试验

5、半致死剂量（LD50）

6、长期毒性试验

7、特殊毒性试验

8、局部刺激性试验

9、溶血试验

10、热原试验

11、热原

12、过敏试验

13、过敏反应

14、致敏原

15、脱敏

16、致敏率

二、填空题

1、生物检测的范围主要包括和。

2、安全性试验的主要内容包括、、、和等。

3、毒性试验可分为和两类。

4、一般毒性试验包括和两类。

5、特殊毒性实验包括、和等。

6、过敏试验包括和等。

7、抗生素等生长抑制物质的效价测定的方法主要有和。

三、是非题（对的打√、错的打×）

1、LD50越大，表明药物的毒性越大（）

四、简答题

1、安全性试验包括哪些？

2、生长抑制物质的生物效价测定有哪些方法？

3、生长促进物质的生物效价测定的方法有哪些？

第十一章放射性同位素检测技术

一、名词解释

1、放射性同位素检测技术

2、放射性强度

3、比放射性

4、放射自显影技术

5、放射荧光显影

6、本底值

7、熄灭（猝灭）、

8、放射性同位素的搀入

二、填空题

1、衰变过程中放出的射线有、和三种。

2、放射性同位素危害人体的途径有和两种。

3、在生化中常用的检测放射性的方法有、和。

4、闪烁计数器主要有和两类。

5、液体闪烁剂主要由、和三部分构成。

6、放射性同位素的搀入的方法主要有、和等。

三、选择题

1、G-M管最适宜作的探测。

Aα-粒子Bβ-粒子Cγ-射线

四、简答题

1、放射性同位素检测方法有哪些？

2、举例说明放射性同位素搀入方法有哪些？

五、问答题

1、试论述盖革计数管的工作原理。