血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书.docx

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血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书

血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书

1.实验原理

脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。

尿素被脲酶水解产氨。

在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD＋。

NADH的减少和样品中尿素浓度成正比。

本法是连续监测法。

脲酶

尿素+2H2O2NH4＋+2HCO3－

谷氨酸脱氢酶

NH4＋+α-酮戊二酸+NADHL-谷氨酸+NAD＋+H2O

2标本：

2.1病人准备：

血清无特殊要求。

要留取24小时尿样。

2.2类型：

血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。

无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。

用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:

100稀释。

3.标本存放：

血清或血浆稳定性：

4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。

尿液稳定性：

20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。

4.标本运输：

常温条件下保存运输。

5.标本拒收标准：

细菌污染的标本。

6.实验材料

6.1试剂：

申能尿素测定试剂盒（14231071701试剂1：

6×64ml＋试剂2：

6×16ml）

6.1.1试剂组成

试剂1：

Tris缓冲液pH7.8120mmol/L

α-酮戊二酸7mmol/L

ADP0.6mmol/L

谷氨酸脱氢酶≥1000U/L

脲酶≥6000U/L

试剂2：

NADH0.25mmol/L

6.1.2试剂准备：

试剂为即用式。

6.1.3试剂稳定性与贮存

试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂不可冰冻。

6.1.4变质指示：

当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.5注意事项：

此试剂为体外诊断用。

不要入口，吞下有害。

保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。

应采取必要的预防措施使用试剂。

6.2校准品：

使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

6.3质控品：

具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

7.仪器：

奥林巴斯AU1000生化分析仪

8.操作步骤

8.1项目基本参数：

参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件

8.2仪器操作步骤：

参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件

9.检验结果的判断与分析

10.质量控制：

在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11.计算方法：

以TruCalU复合校准品尿素氮校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。

将尿素量乘以系数2.8可以换算成尿素氮量；将尿素氮量乘以系数0.357可以换算成尿素量。

手工测定计算方法为：

Au

尿素氮浓度（mmol/L）＝×校准液浓度

As

12.参考值范围

血清/血浆[1]

成人（mmol/L）

全球2.8～7.2

女性<50岁2.6～6.7

女性>50岁3.5～7.5

男性<50岁3.2～7.3

男性>50岁3.0～9.2

儿童

1～3岁1.8～6.0

4～13岁2.5～6.0

14～19岁2.9～7.5

尿素/肌酐比率[1]25～40[（mmol/L）/（mmol/L）]

尿液[2]0.43～0.72mol/d

（注：

各实验室应有自己的参考范围。

）参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。

根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

13.临床意义：

尿素是蛋白质分解代谢的含氮终产物。

高尿素血症或氮血症表现为血液中尿素水平升高。

鉴别肾前和肾后氮血症时可以同时检测尿素和肌酐。

因脱水、蛋白质代谢增加、皮质醇治疗或肾脏灌注减少等引起的肾前氮血症，表现为尿素水平升高而肌酐水平正常。

由泌尿管道阻塞引起的肾后氮血症，表现为尿素和肌酐水平都升高，但肌酐升高程度较小。

发生肾病时，肾小球滤过作用明显下降或蛋白质摄入量大于200g/天都会导致尿素浓度升高。

尿素氮的检测用于诊断和治疗某些肾脏疾病和代谢紊乱。

尿素氮大约占血液中非蛋白氮的75%。

它通过肝脏中的氨进行合成，是蛋白质脱氨作用的产物。

通过肾小球从血液中过滤尿素到尿中，是消除体内多余氮的主要方法。

血液尿素氮（BUN）水平是肾功能以及肾前状态和肾后状态的度量标准，肾前因素引起的BUN的升高包括心脏代偿失调，缺水或增加的蛋白质分解代谢。

水平增加的肾脏因素有急性肾小球肾炎，慢性肾炎，多囊肾，肾纤维化和肾小管坏死。

任何类型的泌尿道的梗塞受阻是BUN水平升高的肾后因素1。

肾小球清除尿素和肌酸酐，但是，尿素随后部分地被肾小管重吸收，然而肌酸酐却不会。

因此，血清尿素氮和血清肌酸酐测定经常同时用于肾功能的不同诊断中。

14.操作性能

14.1线性范围：

0.3～50mmol/L

14.2精密度：

精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU1000批内不精密度小于3%，总不精密度小于5%。

用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。