第四节异常毒性检查法.ppt

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第四节异常毒性检查法授课人:

汪穗福（高级讲师）苏惠虹（助理讲师）广州市医药中专学校,教学目标:

学习异常毒性检查的方法教学重点:

异常毒性检查的方法、检查结果的判断标准教学难点:

异常毒性检查方法、检查结果的判断标准教学方法：

讲解法,第四节异常毒性检查法一、概述二、异常毒性检查法的步骤三、注意事项,一、概述,异常毒性检查法的概念:

异常毒性检查法系将一定量的供试品溶液注入小鼠体内或口服给药，在规定时间内观察小鼠死亡情况，以判断供试品是否符合规定的一种方法。

为了保证用药安全，一种新药或新的制剂临床使用前，以及一些毒性较大或生产、贮存中易引入毒性物质或分解导致毒性增大的药品制剂要进行毒性试验。

随着新科技的发展，药品生产工艺进行了较大改变，特别是改变提炼方法及精制工艺时，需要在生产过程中追踪检查各工艺段的半成品及成品是否引入了毒性反应的杂质。

如其中可能存在慢性毒性杂质时，还需要作亚急性及慢性毒性试验观察。

对生产过程中毒性杂质作追踪考察，弄清提炼精制过程中毒性杂质的踪迹，及时采取措施预防或去除，不但有利于保证药品使用的安全性，也有利于生产上进一步提高产品质量。

药品的异常毒性试验是用稳定剂量按指定的操作方法和给药途径给予规定体重的某种动物，观察其急性毒性反应。

反应的判断以试验动物死亡与否为终点，这实际上是一个限度试验。

在此剂量下，一般供试品不应使动物中毒致死；如果出现实验动物急性中毒而死亡，则反映该供试品中含有的急性毒性物质超过了正常水平。

因此，本试验又称为异常毒性检查法。

在出现试验动物死亡时，除动物试验方法存在的差异或偶然差错外，主要决定于供试品在生产过程中是否带入可引发异常毒性反应的杂质。

异常毒性检查的局限性：

因为毒性试验是用试验动物作为模型的，所以存在一定的局限性。

如氯霉素所致精神症状，在一般常规动物试验上是不可能显现的。

变态反应常与某些内在因素有关，常规异常毒性试验中是检不出的，只有用免疫学试验方法才能在动物身上表现出来。

异常毒性检查规定的方法：

中国药典（2005年版）规定异常毒性检查法为小白鼠法，通过检查结果了解药品在毒性方面是否有异常现象、被试药品的毒性强度及观察毒性症状的表现等。

中国药典（2005年版）收载该法，（二部）正文品种共有20个品种、（三部）正文品种共有86个品种规定应进行异常毒性检查（含特异性常毒检查）。

返回,二、异常毒性检查法的步骤:

1.对试验动物小白鼠的要求2.试验动物的准备3.试验操作4.结果的判断,1.对试验动物小白鼠的要求：

须健康，无伤，毛色光滑，眼睛红亮，活泼；体重1720g。

其来源、饲养条件、品种、性别均应相同。

雌者不得有孕。

动物体重是按正常饲养条件下的体重。

在正常动物饲养条件下，小白鼠体重1720g者，鼠龄约25d。

（图）,形态表现衰老体弱，背部弓起，行动蹒跚，毛皮松稀等现象者不宜供使用；由于饲养条件较差或差异较大的不同鼠龄的小鼠，虽体重符合要求，也不宜供使用。

复试时，用1819g小白鼠（称量精确至0.5g）。

试验动物在称重前，自然饱腹。

做过试验的动物不得重复使用。

返回,2.试验动物的准备,首次试验所用的小白鼠可用同一性别。

按体重1720g平均分配，复试则用1819g的小白鼠。

返回,3.试验操作,除另有规定外，取上述小鼠5只，按该药品项下规定的给药途径，每只小鼠分别给予供试品溶液0.5ml。

异常毒性试验操作方法有尾静脉注射法、皮下注射法、肌肉注射法、腹腔注射法及口服给药法。

静脉注射法,小白鼠的固定方法,可将其放在铁丝网盖内,通风较好且便于观察其活动。

注射速度与反应密切相关,应以准确5S匀速注入0.5ml。

注射完毕,立即将小白鼠松开,使其在铁丝网盖内自由活动以观察即时反应，并作记录,实验用具,供试品溶液,1.原料药精密称取适量，置适宜容器中。

按规定浓度，加精密量取的一定量溶剂，混匀。

2.注射液的稀释用75%乙醇棉球消毒安瓿颈部或瓶塞。

精密量取一定量药液。

按规定浓度，加精密量取的一定量溶剂，混匀。

静脉注射前的准备（给小白鼠光照）,用注射器吸取供试品溶液,取小白鼠,固定小白鼠,尾静脉注射,返回,注射完毕,立即将小白鼠松开,使其在铁丝网盖内自由活动以观察即时反应，并作记录。

小白鼠尾静脉注射影片,皮下注射法,可采用由小白鼠腹部皮下，于腹部左侧皮下刺入，并使针头在皮下平行通过腹部中线后，立即注入0.5ml供试品溶液。

拔出针头时，如发现有供试品溶液外溢，此小鼠应废弃，另取一只小白鼠依法注射。

返回,小白鼠皮下注射影片,肌肉注射法,可采用由小白鼠后腿肌偏于股静（动）脉血管外侧，将针头刺入至肌肉内缓缓注入0.5ml供试品溶液。

拔出针头时，如发现有血及供试品溶液外溢者，此小白鼠应废弃，另取一只小白鼠照上法注射。

返回,腹腔注射法,可采用由小白鼠腹部左侧皮下刺入，并使针头在皮下平行通过腹部中线后，进入小白鼠右侧腹腔部位，立即注入0.5ml供试品溶液。

拔出针头时，如发现有供试品溶液外溢，此小鼠应废弃，另取一只小白鼠照上法注射。

返回,小白鼠腹腔注射法影片,口服（灌胃）给药法,将注射器装上胃管，缓缓伸入小白鼠口腔至食道部，将注射器内栓缓缓推入供试品溶液0.5ml，如供试品溶液体积较大，给药量在1ml以上者，宜空腹给药。

口服（灌胃）给药法影片,4.结果判断,除另有规定外，全部小鼠在给药48h内不得有死亡；如有死亡时，应另取体重1819g的小鼠10只复试，全部小鼠在48h内不得有死亡。

三、注意事项,1.为了使试验结果真实可靠，试验动物要严格按规定的要求准备。

2.结果判断，中国药典（2005）规定“除另有规定外，全部小鼠在给药后48h内不得有死亡。

”给药后，在规定时间内不引起小鼠死亡的任何反应不属于异常毒性检查范围，不作为判断结果的依据。

3.室温在2030，过高或过低均可影响试验结果。

中国药典（2005年版）收载该法，（二部）正文品种共有20个品种、（三部）正文品种共有86个品种规定应进行异常毒性检查（含特异性常毒检查）。

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