《生物技术一》实验教案DOC.docx
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《生物技术一》实验教案DOC
蚌埠医学院
《生物技术一》实验教案
2010/2011学年第二学期
选用教材医用生物化学实验(自编,3版)
生物化学实验(上海交通大学出版社)
授课教师夏俊
职称教授
授课专业2009级生物科学本科
教研室检验系生物化学与分子生物学
蚌埠医学院教案
2010-2011年度第二学期
教师姓名:
职称:
系(部):
生物科学系教研室:
实验中心
授课对象:
08生物本科专业生物班级授课时间:
2011年3月4日
课程
名称
中文
实验动物技术1
选用教材
现代生物学技术与探索性实验
授课
时数
5
英
文
章节及
内容
实验动物技术
授课
地点
406
教学目的
与要求
目的要求
1、了解实验动物选取、饲喂和处理方法(大、小鼠的日常饲养管理)
2、了解实验动物的编号和分组原则
3、掌握动物的抓取与保定技术
4、掌握实验动物常用的给药技术
教学重点
与难点
重点:
实验动物的随机分组方法。
难点
实验动物的抓取和保定技术
实验动物常用的给药技术
教学方法
讲述法、讨论法、示教法
教具使用
随机数字表、实验动物
教学过程及时间分配
主要教学内容
教学方法
一、了解实验动物选取、饲喂和处理方法(大、小鼠的日常饲养管理)
(一)实验动物的选取
(二)实验动物的日常饲喂与处理方法--大小鼠的日常饲养管理
二、实验动物编号和分组原则
(一)实验动物的编号
实验动物的分组
(一)、分组原则
随机分组
(二)建立对照组
自身对照组
平行对照组
三、实验动物的抓取与固定技术
(一)实验动物的抓取固定方法
1.小鼠抓取固定方法
2.大鼠抓取固定方法
3.兔的抓取固定方法
四、实验动物给药途径及方法
(1)皮下注射
(2)皮内注射
(3)腹腔注射
(4)静脉注射
a.兔
b.小白鼠和大白鼠
学生操作
1、大鼠和兔子的随机分组操作。
2、小鼠、大鼠、兔子的抓取和固定,要求每位同学熟练掌握
3、实验动物给药:
灭菌生理盐水
5分钟
讲述法
讲述法
10分钟
15分钟
讲述法
示教法
10分钟
讲述法
巡回指导
巡回指导
35分钟
示教
巡回指导
35分钟
教学过程及时间分配
主要教学内容
教学方法
30分钟
小鼠(每人1只):
皮下注射0.1ml、腹腔注射0.2ml、尾部静脉注射0.2ml
大鼠(每组1只):
皮下注射0.5ml、腹腔注射2ml.
兔子(每组1只):
耳缘静脉注射0.5ml。
巡回指导
30分钟
30分钟
布置作业或思考题
参考书籍与常用网址
课后小结
蚌埠医学院教案
2010-2011年度第二学期
教师姓名:
职称:
系(部):
生物科学系教研室:
实验中心
授课对象:
08生物本科专业生物班级授课时间:
2011年3月4日
课程
名称
中文
实验动物技术2
选用教材
现代生物学技术与探索性实验
授课
时数
5
英
文
章节及
内容
实验动物技术
授课
地点
406
教学目的
与要求
目的要求
1、掌握实验动物的麻醉方法
2、掌握实验动物的采血方法
3、掌握实验动物的处死方法
教学重点
与难点
重点:
1、实验动物的麻醉方法
2、实验动物的采血方法
3、实验动物的处死方法
教学方法
讲述法、示教法
教具使用
实验动物,大小鼠固定器,家兔固定器
教学过程及时间分配
主要教学内容
教学方法
一、掌握实验动物的麻醉方法
1.麻醉方法
(1)全身麻醉
①吸入麻醉法
②注射麻醉法
(2)动物局部麻醉方法
2.常用的麻醉药
(1)常用局部麻醉剂
(2)常用全身麻醉剂
3.使用全身麻醉剂的注意事项
二、掌握实验动物的采血方法
1.注意事项
2.常用实验动物的采血方法
三、掌握实验动物的处死方法
1.大鼠和小鼠的处死方法
2.狗、兔、豚鼠的处死方法
学生操作
1、小鼠、大鼠和家兔的麻醉方法
小鼠吸入乙醚麻醉
大鼠、家兔先乙醚诱导麻醉再注射20%的氨基甲酸乙酯麻醉
2、小鼠、大鼠、家兔的采血方法
10分钟
讲述法
10分钟
讲述法
5分钟
讲述法
讲述法
5分钟
示教法
10分钟
讲述法
10分钟
示教法
10分钟
巡回指导
45分钟
45分钟
巡回指导
教学过程及时间分配
主要教学内容
教学方法
小鼠断尾采血和尾静脉采血;大鼠尾静脉采血;家兔耳静脉采血、耳动脉采血或心脏采血
3、小鼠、大鼠和家兔的处死方法
小鼠颈椎脱臼法、击打法或吸入乙醚麻醉处死;大鼠颈椎脱臼法处死;家兔空气栓塞法或急性失血法处死
小鼠每人一只;大鼠每组一只;家兔每组一只
课堂小结
40分钟
巡回指导
10分钟
布置作业或思考题
参考书籍与常用网址
课后小结
蚌埠医学院教案
2010-2011年度第二学期
教师姓名:
职称:
系(部):
生物科学系教研室:
实验中心
授课对象:
08生物本科专业生物班级授课时间:
2011年3月4日
课程
名称
中文
现代生物学技术
选用教材
现代生物学技术与探索性实验
授课
时数
5学时
英
文
章节及
内容
实验二:
胎鼠细胞原代培养
授课
地点
教学目的
与要求
1、熟悉无菌操作技术,强化无菌操作概念,并为细胞传代培养、细胞纯
化和冷冻保存等实验鉴定基础。
2、理解并掌握细胞原代培养原理。
3、掌握独立进行细胞原代培养操作方法与过程。
以小鼠胎儿为材料,学
习细胞原代培养中常用组织块培养法和消化培养法。
教学重点
与难点
重点
无菌操作技术,原代培养的操作过程。
掌握组织取材、剪切、细胞分离、
混匀、接种和器械使用等操作要领。
难点
掌握动物细胞培养中的无菌操作技术细节和注意事项。
教学方法
讲授法、演示法、设问启发法、讨论法、图表法。
教具使用
多媒体课件、激光笔等
教学过程及时间分配
主要教学内容
教学方法
复习旧课:
(略)
2~3分钟
新课导言:
细胞培养概念和意义
细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一。
可
分为原代培养和传代培养两种。
原代培养是直接从生物
体获取组织或器官的一部分进行培养。
由于培养的细胞
刚刚从活体组织分离出来,故更接近于生物体内的生活
状态。
这一方法可为研究生物体细胞生长,代谢,繁殖
提供有力的手段,同时也为以后传代培养创造条件。
举例:
细胞各种生理活动如增殖的研究
讲授新课:
实验九:
胎鼠细胞原代培养
2分钟
一、实验目的要求
讲授
1、以小鼠胎儿为材料,学习细胞原代培养中常用的组织
块培养法和消化培养法;
2、掌握组织取材、剪切、细胞分离、混匀、接种和器械
使用等操作要领;
3、掌握动物细胞培养中的无菌操作技术,并为下一步细
胞传代培养、细胞纯化和冷冻保存等实验提供材料。
二、主要器材与试剂
培养箱(调整至37℃),培养瓶、平皿、吸管、移液管、
手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱(37℃)
10分钟
三、实验原理
(一)细胞培养的分类
启发式提问
细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一。
可
分为原代培养和传代培养两种。
(二)细胞原代培养的原理
原代培养:
是直接从生物体获取的细胞、组织或器官的
一部分进行培养;由于刚从活体组织分离出来,故更接
近于生物体内的生活状态。
这一方法可为研究生物体细
胞生长,代谢,繁殖提供有力的手段,同时也为以后传
代培养创造条件。
(三)胰酶消化法原理
将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常
用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,
分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生
存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。
25分钟
四、内容与操作
(一)组织块直接培养法
1、将孕鼠拉颈椎致死,取胎鼠带入超净台内。
2、超净台内,将孕鼠子宫剪开取胚胎。
3、用小镊子撕破胎膜,取出胎鼠,用PBS洗涤3次。
4、将胚胎转移到另一装有PBS的平皿中,用手术剪将其
剪成小块(1mm3),再用PBS液洗三次。
5、将组织块转移到培养瓶,贴附瓶壁。
翻转此壁朝上,
将培养液加至瓶中,培养液勿接触组织块。
6、37℃静置3-5小时,轻轻翻转培养瓶,使组织浸入培
养液中(勿使组织漂起),37℃继续培养。
(二)、酶消化分离细胞培养法
原理:
在组织块培养法基础上,经各种酶(常用胰蛋白
酶与胶原酶)处理,分散成单细胞,置合适的培养基中
培养。
1、将孕鼠拉颈椎致死,取胎鼠带入超净台内。
2、超净台内,将孕鼠子宫剪开取胚胎。
3、用小镊子撕破胎膜,取出胎鼠,用PBS洗涤3次。
4、将胚胎转移到另一装有PBS的平皿中,用手术剪将其
剪成小块(1mm3),再用PBS液洗三次。
5、视组织块量加入5-6倍0.25%胰酶液,37℃中消化
20-40分钟,每隔5分钟振荡一次,使细胞分离。
6、加入3-5ml培养液以终止胰酶消化作用。
7、静置5-10分钟,使未分散的组织块下沉,取悬液加入
到离心管中。
8、1000rpm,离心10分钟,弃上清液。
9、加入培养液l—2ml(视细胞量),血球计数板计数。
10、将细胞调整到5×105/ml左右,转移至25ml细胞培
养瓶中,37℃下培养。
80分钟
(三)操作
演示
学生分组,进入无菌操作室具体操作。
教师巡视指导
五注意事项
1、操作前,提前将操作间和超净工作台内紫外灯打开,
消毒杀菌30分钟。
2、进操作间前要洗手,进入超净台后手要用75%酒精或
0.2%新洁尔灭擦试。
试剂等瓶口也要擦试。
3、点燃酒精灯,操作在火焰附近进行。
4、手不能在开盖的消毒物品上方活动。
5、凡在超净台外操作的步骤,各器皿需用盖子或橡皮塞,
以防止细菌落入。
六、思考题
1、比较组织块培养法和消化培养法获得原代培养物的效
果和优缺点。
2、观察原代培养细胞中的细胞类型,并根据以往的知识
初步分析哪类细胞属于成纤维样细胞,哪类细胞属于上
皮样细胞
布置作业或思考题
1、比较组织块培养法和消化培养法获得原代培养物的效果和优缺点。
2、观察原代培养细胞中的细胞类型,并根据以往的知识初步分析哪类细胞属于成纤维样细胞,哪类细胞属于上皮样细胞。
参考书籍与常用网址
1、章静波,《医学细胞生物学实验指导》,人民卫生出版社,2007.6
2、翟中和,《细胞生物学》(第三版),高等教育出版社,2007.8
3、生物谷
课后小结
蚌埠医学院教案
2010-2011年度第二学期
教师姓名:
职称:
系(部):
生物科学系教研室:
实验中心
授课对象:
08生物本科专业生物班级授课时间:
2011年3月4日
课程
名称
中文
选用教材
现代生物学技术与探索性实验
授课
时数
5
英
文
章节及
内容
实验三人类外周血淋巴细胞染色体标本的制备
授课
地点
F座层流室及实验室
教学目的
与要求
要求学生学会人类外周血淋巴细胞染色体的制备方法
教学重点
与难点
重点:
人类外周血淋巴细胞染色体的制备方法
难点:
实验原理
教学方法
讲述法、板书
教具使用
教案、讲稿、粉笔
教学过程及时间分配
主要教学内容
教学方法
【导言】
2分钟
2分钟
5分钟
5分钟
15分钟
90分钟
1分钟
目前染色体的研究几乎深入到生物学科的每一个领域,因为染色体是把细胞生物学与分子生物学联系起来的重要桥梁,所以在遗传学研究中工者在医学研究中被广泛重视及应用。
今天我们就来学习如何制备人类的染色体标本。
【板书】实验三人类外周血淋巴细胞染色体标本的制备
【实验目的】
初步掌握人类外周血细胞染色体标本的制备方法。
【实验原理】
1)低渗处理分裂细胞可使CS展开;
2)PHA可使淋巴细胞转化为淋巴母细胞,并进行mitosis;
3)秋水仙素可使分裂的细胞停止在中期;
4)标本的空气干燥法使细胞和CS展平。
【器材及药品】
1.5ml无菌注射器(7号针头),培养瓶、离心管、吸管、预冷载玻片等。
2.超净工作台,恒温培养箱,天平,离心机、显微镜等。
3.试剂:
1)RPMI-1640
2)小牛血清(BSA)
3)植物血凝素(PHA)
4)肝素钠(肝素)
5)抗菌素:
青霉素100U/ml、链霉素100U/ml
6)秋水仙素(秋水仙碱)
7)低渗液:
0.075MKCl
8)Carnoy固定液:
甲醇∶冰HAC(3∶l),现配现用。
9)Giemsa染色液:
1份原液和9份PBS,现配现用。
10)磷酸缓冲液(PBS):
1/15MNa2HPO4、1/15MKH2PO4等体积混和。
【操作步骤】
1.采血 1~2ml
2.接种 0.2~0.3ml
3.恒温培养 37℃ 72h 终止前2~4h 秋水仙素一滴
4.收集细胞 1000rpm 8~10min 弃上清
5.低渗处理 37℃低渗液6~8ml 细胞打匀 37℃水浴低渗25~30min
6.预固定 Carnoy固定液1ml 细胞打匀 1000rpm 8~10min
7.第一次固定 弃上清 固定液6~8ml 细胞打匀 静置15~20min 1000rpm 8~10min
8.第二次固定 重复上一步操作
9.制细胞悬液 弃上清 留适量固定液 0.5~1ml
10.滴片 Slide冷冻 2~3滴 轻吹散 过火
11.染色 Giemsa染液染色10~15min 细水洗去多余染液 晾干
12.镜检 低倍镜 油镜
五【学生操作】
【作业】
1.将分散良好的标本观察人类染色体的形态、结构特点。
讲述法
讲述法
布置作业或思考题
1为了获得较好的分裂相供以后核型分析,在实验操作过程中应注意那些问题?
参考书籍与常用网址
1《遗传学》(第二版).,刘祖洞
2《细胞生物学与医学遗传学实验指南》蔡绍京第二军医大学出版社
课后小结
1总体教学效果较好,讲解实验过程仔细并强调注意事项,使学生较好的掌握了实验原理和步骤。
2要进一步锻炼学生的动手能力,特别是关于无菌操作的过程和注意事项。
蚌埠医学院教案
2010-2011年度第二学期
教师姓名:
职称:
系(部):
生物科学系教研室:
实验中心
授课对象:
08生物本科专业生物班级授课时间:
2011年3月4日
课程
名称
中文
选用教材
现代生物学技术与探索性实验
授课
时数
5
英
文
章节及
内容
实验三人类染色体核型分析
授课
地点
F座实验室
教学目的与要求:
1、掌握核型分析的基本过程&方法
2、掌握核型的书写
3、初步掌握镜下人类非显带核型分析方法
教学重点与难点:
重点:
1、核型分析的基本过程和方法
2、镜下人类非显带染色体核型分析方法
难点:
镜下人类非显带染色体核型分析方法
教学方法:
设问启发讲述演示
教具使用:
黑板粉笔&挂图
教学过程及时间分配
主要教学内容
教学方法
【复习理论课】
5分钟
【新课导入】
3分钟
【讲授新课】
2分钟
10分钟
20分钟
50分钟
20分钟
10分钟
复习人类染色体相关内容,人类染色体的结构,数目及其分组情况。
导言:
当人类染色体异常时,就会导致染色体疾病的发生,在临床上我们通常通过人类外周血细胞制的染色体标本来观察,那么我们如何观察和判断人类染色体的核型呢?
【板书】实验一人类染色体核型分析
一实验目的
二实验原理
1染色体核型
2核型分析
3核型表达式
4丹佛体制
三实验步骤
1染色体数目分析
2形态结构分析
3核型照片剪贴
4染色体测量
四学生动手操作
巡视指导
五结果观察并绘图
六总结&讨论
七布置预习实验二
提问
设问
启发
讲述
演示讲述
示教
启发
布置作业或思考题
1、绘制人类非显带染色体快速线条图
2、正常人非显带核型照片剪贴
参考书籍与常用网址
1.细胞生物学与医学遗传学实验指南蔡绍京第二军医大学出版社,2002
2.医学遗传学原理孙开来译科学出版社,2001
网站:
1、www.ncbi.nlm.nih,gov/dmim
2、www.sanger,ac.uls
课后小结
蚌埠医学院教案
2010-2011年度第二学期
教师姓名:
职称:
系(部):
生物科学系教研室:
实验中心
授课对象:
08生物本科专业生物班级授课时间:
2011年3月4日
课程
名称
中文
探索性实验
选用教材
现代生物学技术与探索性实验
授课
时数
5
英
文
章节及
内容
实验四荧光原位杂交
授课
地点
教学目的
与要求
【目的与要求】
1.通过实验了解常用荧光原位杂交技术的种类和基本原理;
2.初步掌握原位杂交技术的操作方法和步骤;
3.了解荧光原位杂交方法的应用。
教学重点
与难点
教学重点、难点:
初步掌握原位杂交技术的操作方法和步骤;
教学方法
讲述,示教等
教具使用
教学过程和时间分配
主要教学内容
教学方法
一、荧光原位杂交技术(FluorescenceinsituhybridizationFISH)是近几年来发展起来的一项新技术,它是基于Southernblot原理,在同位素标记探针进行原位杂交基础上发展起来的。
二、FISH技术原理与方法
三、FISH探针
(一)、FISH探针的标记
(二)FISH的探针类型
四、内容与操作
布置作业或思考题
(1)通过实验总结荧光原位杂交实验的技术关键。
(2)实验中会不会出现假阳性,为什么?
参考书与常用网址
王延华,分子杂交理论与技术(第2版)科学出版社,2009年,北京。
贝蒂(BeattyBarbara)(作者),王瑛(译者),张诗武(译者),荧光原位杂交技术,天津科技翻译出版公司;第1版(2003年)
课后小结
蚌埠医学院教案
2010-2011年度第二学期
教师姓名:
职称:
系(部):
生物科学系教研室:
实验中心
授课对象:
08生物本科专业生物班级授课时间:
2011年3月4日
课程
名称
中文
探索性实验课程
选用
教材
现代生物学技术与探索性实验
授课
时数
5学时
英文
章节
内容
组织切片技术
-----HE染色
授课
地点
教学目的
与要求
1、了解组织石蜡切片法的原理与整个过程。
2、了解组织切片HE染色的原理与整个过程步骤。
3、初步掌撑石蜡切片技术。
4、初步掌握HE染色技术。
5、了解组织切片的方法。
教学重点
与难点
【重点】:
1石蜡切片技术与HE染色的原理。
2石蜡切片技术的技巧掌握。
【难点】:
石蜡切片技术的技巧掌握。
教学方法
讲授、演示、示教、讨论、总结。
主要词汇
•取材、固定、脱水、透明、浸蜡、
•包埋、石蜡切片、水化、HE染色。
教具使用
石蜡切片机、水浴锅、显微镜、多媒体教学设备等。
教学过程及时间分配
主要教学内容
教学方法
新课导入
5分钟
讲授新课
10分钟
20分钟
设问:
什么方法能够看到组织的细微结构,导入石蜡切片的概念。
讲述石蜡切片的应用范围。
实验三石蜡切片与HE染色技术
一、实验目的要求
强调需要初步掌握石蜡切片与HE染色技术。
二、主要器材与试剂
三、实验原理
细胞核内的染色质主要是脱氧核糖核酸(DNA),DNA的双螺旋结构中,两条链上的磷酸基向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精(硷性染料)以离子键或氢键结合而染色。
苏木精在碱性染料中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。
细胞浆内主要成分是蛋白质,在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷(阳离子),就可被带负电荷(阴离子)的染料染色。
伊红是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷(阳离子)结合而使细胞浆染色,细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。
伊红是细胞浆的良好染料。
四、内容与操作
取材、材料越新鲜越好,一般不超过死后24小时。
活体应选择病变部与可疑病变部切取,切取时要由表及里,有浅入深并包括周围正常组织一部分。
切取组织块大小,以1.5×1.5×0.3厘米为宜,最厚不宜超过0.5厘米。
组织块病变一面应平整光滑,另一面可不平整,以便包埋时辨认。
特殊材料应根据器官的结构特点切取。
管状,囊状和皮肤组织应注意垂直切取(横切)。
带有薄膜的组织,要防止切时薄膜分离和脱落。
启发
PPT课件讲授
PPT课件讲授
教学过程及时间分配
主要教学内容
教学方法
80分钟
80分钟
30分钟
做好标记。
固定、固定的目的是迅速将组织细胞杀死,使细胞中的