第六讲蛋白质的生物合成.docx
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第六讲蛋白质的生物合成
第六讲蛋白质的生物合成
什么是蛋白质生物合成或翻译？
一、蛋白质生物合成过程中的物质
1、mRNA是合成蛋白质的直接模板
在1956年-1961年期间，由Jacob等人领导的四个不同的实验室，通过用T4噬菌体感染大肠杆菌，发现了真正的模板。
T4噬菌体感染后，宿主细胞E.coli的RNA合成停止，转录出的RNA仅来源于T4DNA，T4RNA的碱基组成不仅与T4DNA非常相似，而且能与tRNA和E.coli核糖结合。
但并不是核糖体本身的构成成份。
因为T4RNA携带T4DNA来的遗传信息，并在核糖体上指导合成蛋白质，所以称为信使RNA（messengerRNA）。
到目前为止，所发现的mRNA都有合成一种多肽链的信息。
它们具有一些共同的结构特征。
例如，成熟的卵清蛋白mRNA含1859个碱基。
在5‘端有一个“帽子”（5’-Cap），3‘端含多聚腺苷酸（polyA）序列。
在5’端非翻译顺序（64个碱基）和3‘端非翻译顺序（637个碱基）之间是翻译区或编码区（长1158个碱基）。
2、遗传密码
1）定义：
mRNA中蕴藏遗传信息的碱基顺序称为遗传密码（Geneticcode）。
mRNA中每个相邻的三个核苷酸，这个三联体称为一个密码子（codon），因此，密码是密码子的总和。
2）遗传密码的破译
基因密码的破译是六十年代分子生物学最辉煌的成就。
先后经历了五十年代的数学推理阶段和1961-1965年的实验研究阶段。
1954年，物理学家GeorgeGamov根据在DNA中存在四种核苷酸，在蛋白质中存在二十种氨基酸的对应关系，做出如下数学推理：
如果每一个核苷酸为一个氨基酸编码，只能决定四种氨基酸（41=4）；;如果每二个核苷酸为一个氨基酸编码，可决定16种氨基酸（42=16）。
上述二种情况编码的氨基酸数小于20种氨基酸，显然是不可能的。
那么如果三个核苷酸为一个氨基酸编码的，可编64种氨基酸（43=64）；若四个核苷酸编码一个氨基酸，可编码256种氨基酸（44=256），以此类推。
Gamov认为只有43=64这种关系是理想的，因为在有四种核苷酸条件下，64是能满足于20种氨基酸编码的最小数。
而44=256以上。
虽能保证20种氨基酸编码，但不符合生物体在亿万年进化过程中形成的和遵循的经济原则，因此认为四个以上核苷酸决定一个氨基酸也是不可能的。
1961年，Brenner和Grick根据DNA链与蛋白质链的共线性（colinearity），首先肯定了三个核苷酸的推理。
随后的实验研究证明上述假想是正确的。
破译密码的实验研究先后由三个实验逐步发展了四种破译方法，于1965年完成。
1）在体外无细胞蛋白质合成体系中加入人工合成的polyＵ开创了破译遗传密码的先河。
自1961年发现mRNA后，许多实验室开始在无细胞蛋白质合成系统中加入mRNA，去研究蛋白质生物合成过程，并表明加入mRNA能刺激无细胞系统中蛋白质合成。
1961年，美国NIH的Nirenberg和Mathaei，设想：
即然mRNA有刺激无细胞系统中的蛋白质合成作用，加入人工合成的多聚核苷酸亦将会有这种促进作用。
按此设想，他们合成了polyU作为模板，以观察无细胞系统中蛋白质合成速率。
因为在反应体系中加入高Mg2+浓度，可有利于IF（起始因子）的作用和fMet-tRNANet的形成，从而保证肽链合成的起始不需mRNA的适当信号。
当把翻译产物分离、纯化和做序列分析后，结果出乎意料，合成的肽链中的氨基酸残基全部是苯丙氨酸，即polyPhe。
于是第一次确认了UUU是Phe的密码子。
这样，就在一个偶然的机会开创了破译密码的工作。
随后，他们又以polyA和polyC为模板，证明了分别可指导合成polyLys和polyPro，即确定了AAA是Lys的密码子，CCC是pro的密码子。
但是类似的实验不能证明GGG是何种氨基酸的密码子，因为polyG产生牢固的氢键结合，形成三股螺旋，而不与核糖体结合。
2）混合共聚物（mixedcopolymers）实验对密码子中碱基组成的测定：
1963年，Speyer和Ochoa等发展了用两个碱基的共聚物破译密码的方法。
例如，以A和C原料，合成polyAC。
polyAC含有8种不同的密码子:
CCC、CCA、CAA、AAA、AAC、ACC、ACA和CAC。
各种密码子占的比例随着A和C的不同而不同，例如当A和C的比例等于5:
1时，AAA:
AAC的比例=5×5×5:
5×5×1=125:
25。
依次类推。
实验显示AC共聚物作模板翻译出的肽链由六种氨基酸组成，它们是Asp，His，Thr，Pro，和Lys，其中Pro和Lys的密码子早先已证明分别是CCC和AAA。
根据共聚物成份不同的比例和翻译产物中氨基酸比例亦不同的关系，Speyer等确定了Asp、Glu和Thr的密码子含2AlC；His的密码子含1A2C；Thr的密码子也可以含1A2C；Pro为3C或1A2C；Lys为3A。
但上述方法不能确定A和C的排列方式，而只能显示密码子中碱基组成及组成比例。
例如，Asp，Glu和Thr的2A1C可能有三种排列方式，即AAC、ACA、CAA。
此外，通过反复改变共聚物成份比例的方法亦十分麻烦和费时。
3）aa-tRNA与确定的三核苷酸序列（密码子）结合：
正当Speyer等人按上述2）方法奋力时，Nirenberg和Leder于1964年建立了破译密码的新方法，即tRNA与确定密码子结合实验。
该方法利用了如下事实：
即是在缺乏蛋白质合成所需的因子的条件下，特异氨基酸-tRNA（aa-tRNA）也能与核糖体-mRNA复合物结合。
最重要的是这种结合并不一定需要长的mRNA分子，而三核苷酸实际上就可以与核糖体结合。
例如，当polyU与核糖体混合时，仅有Phe-tRNA（苯丙氨酰-tRNA）与之结合；相应地Pro-tRNA（脯氨酰-tRNA）特异地与polyC结合。
还有GUU可促进Val-tRNA（缬氨酰-tRNA）结合，UUG促进Leu-tRNA（亮氨酰-tRNA）结合等。
虽然所有64个三核苷酸（密码子）都可按设想的序列合成，但并不是全部密码子均能以这种方法决定因为有一些三核苷酸序列与核糖体结合并不象UUU或GUU等那样有效，以致不能确定它们是否能为特异的氨基酸编码。
4）用重复共聚物（repeatingcopolymers）破译密码：
几乎在上述Nirenberg和Leder工作的同时，Nishimura，Jones，和Khorana等人应用有机化学和酶学技术，制备了已知的核苷酸重复序列。
蛋白质在核糖体上的合成可以在这些有规律的共聚物的任一点开始，并把特异的氨基酸参入肽链。
例如，重复序列CUCUCUCUCU......是多肽Leu-Ser-Leu-Ser......或者是多肽Ser-Leu-Ser......的信使分子。
使用共聚物构成三核苷酸为单位的重复顺序，如（AAG）n，它可合成三种类型的多肽：
polyLys、polyArg和polyGlu，即AAG是Lys的密码子，AGA是Arg的密码子，GAA是Glu的密码子。
又如（AUC）n序列是polyIle、polySer和polyHis的模板。
如此至1965年破译了所有氨基酸的密码子。
3）遗传密码子具有以下基本特点：
（1）每个密码子三联体（triplet）决定一种氨基酸；
（2）两种密码子之间无任何核苷酸或其它成分加以分离，即密码子无逗号；
（3）密码子具有方向性，例如AUC是Ile的密码子，A为5'端碱基，C为3'端碱基。
因此密码也具有方向性，即mRNA从5'端到3'端的核苷酸排列顺序就决定了多肽链中从N端到C端的氨基酸排列顺序;
（4）密码子有简并性（degeneracy），一种氨基酸有几个密码子，或者几个密码子代表一种氨基酸的现象称为密码子的简并性。
除了Met和Trp只有一个密码子外，其它氨基酸均有二个以上密码子，例如Arg有6个密码子。
（5）共有64个密码子，其中AUG不仅是Met或者fMet（在原核细胞）的密码子，也是肽链合成的起始信号，故称AUG为起始密码子。
UAA、UAG和UGA为终止密码子，不代表任何氨基酸，也称为无意义密码子。
（6）密码子有通用性，即不论是病毒、原核生物还是真核生物密码子的含义都是相同的。
但真核细胞线粒体mRNA中的密码子与胞浆中mRNA的密码子有以下三点不同：
一是线粒体中UGA不代表终止密码子，而是编码Trp；二是肽链内的Mer由AUG和AUA二个密码子编码，起始部位的Met由AUG、AUA、AUU和AGG均为密码；三是AGA和AGG不是Arg的密码子，而是终止密码子，即UAA、UAG、AGA和AGG均为终止密码子。
（7）密码子结构与氨基酸侧链极性之间有一定关系。
A氨基酸侧链极性性质在多数情况下由密码子的第二个碱基决定。
第二个碱基为嘧啶（Y）时，氨基酸侧链为非极性，第二个碱基为嘌呤（P）时，氨基酸侧链侧有极性。
B当第一个碱基为U或A，第二个碱基为C，第三个碱基无特异性时，所决定的氨基酸侧链为极性不带电；C当第一个碱基不是U，第二个碱基是G时，氨基酸侧链则带电。
在此前提下，若第一个是C或A时，表示带正电的氨基酸;第一、第二个碱基分别是G、A时，此种氨基酸带负电。
但上述关系也有个别例外。
（8）摆动性
转运氨基酸的tRNA的反密码需要通过碱基互补与mRNA上的遗传密码反向配对结合，但反密码与密码间不严格遵守常见的碱基配对规律，称为摆动配对。
一度认为在tRNA上的反密码子（anticodon）只能识别一种密码子。
后来发现二个事实不能用这种理论解释。
一是纯化的tRNAAla（随后也证明了其它tRNA）可识别几种不同的密码子。
二是某些反密码子中含稀有核苷酸次黄嘌呤核苷酸
（1）I并不按标准配对，但与密码子中的三种碱基形成氢键。
对于一种tRNA能识别几种密码子的现象，Crick（1966）提出了所谓"摆动假说"（Wobblehypothesis），他认为碱基间除标准配对外，还可以有非标准的配对，即密码的第一、第二碱基是必需严格按标准配对（A-U、G-C）而第三碱基则不然，它的配对不如此严格，可以有一定程度的摆动灵活性，但也不是可以任意组合。
例如，反密码子5'端的G可以与密码子3'端的C或U配对；但反密码子5'端的C或A却必需严格地按标准配对，不得摆动。
一般说来，摆动假说是正确的，但有一个例外，tRNAGly的反密码子3'CCA5'可识别Gly密码子5'GGC3'。
摆动规则所允许的碱基间配对，必须满足核-核糖间距接近于标准碱基间距（G-C间为1.08nm，A-U间为1.1nm）.嘌呤间或嘧啶间的配对全导致核糖-核糖间距过大或过小。
摆动规则并不允许任何一种tRNA去识别四种以上不同的密码子。
事实上只有当I占据反密码子第一位（5'端）时，该反密码子才能识别三种密码子，例如三种tRNASer（tRNASer，tRNASer，tRNASer）能识别Ser的六种密码子（UCU、UCC、UCA、UCGⅠⅡⅢ、AGU和AGC）。
从80年代中期所建立的tRNA三维结构表明，反密码子的第一位碱基在摆的一端，它的移动受限性比其它二个碱基要小。
相反，反密码子的第三位碱基不仅处在摆的中间，而且其3'端毗邻碱基部是烷基化修饰的嘌呤，这样该碱基的移动性严格受限。
因此，反密码子的5'端碱基在与密码子3'端碱基配对时，可产生一定范围的摆动。
（9）专一性
mRNA上的密码子的第一、第二个碱基与tRNA上的反密码子相应的碱基形成强的配对；密码的专一性主要是由这两个碱基对的作用。
有些反密码子的第一个碱基（按5’-3’）决定了该tRNA识别密码子的数目。
当一种氨基酸有几个密码子时，只要他们的第一和第二个碱基中有一个不同，则需要不同的tRNA来识别。
开放阅读框架（openreadingframe,ORF）
从mRNA5端起始密码子AUG到3端终止密码子之间的核苷酸序列，各个三联体密码连续排列编码一个蛋白质多肽链。
2、tRNA
tRNA是分子最小，但含有稀有碱基最多的RNA，其稀有碱基的含量可多达20%。
1958年Hoagland等人首先发现了在蛋白质生物合成过程中，一种可溶性RNA起介导作用，称为可溶性RNA（solubleRNA），现在称为tRNA；tRNA的分子量最小，一般在25-30KD范围，沉降常数约4S，由73-93个核苷酸组成，其中含大量稀有碱基，可多达20%；tRNA分子是单股RNA，但其分子中的某些局部也可形成双螺旋结构；绝大多数胞浆tRNA含（76+1或76-1）个核苷酸，是保守性最强的RNA，其中有15-16个核苷酸为固定核苷酸，其它的61-62个核苷酸为可变核苷酸。
在氨基酸tRNA合成酶催化下，特定的tRNA可与相应的氨基酸结合，生成氨基酸tRNA，从而携带氨基酸参与蛋白质的生物合成。
tRNA反密码环中部的三个核苷酸构成三联体，可以识别mRNA上相应的密码，此三联体就称为反密码子（anticoden）。
tRNA的二级结构（三叶草结构）
tRNA的结构是在1965年由Holley,R.N.及其同事对酵母丙氨酸tRNA的研究首先发现的，因此他荣获了1968年度的诺贝尔化学奖。
几百种来自细菌和真核生物的tRNA的顺序通过碱基的互补配对都能形成三叶草型（cloverleaf）的结构。
其特点是：
（1）各种tRNA均含有70~80个碱基，其中22个碱基是恒定的。
（2）其5’端总是配对的，此与tRNA的稳定性有关。
5’端和3’端配对（常为7bp）形成茎区，称为受体臂（acceptorarm）或称氨基酸臂。
在3’端永远是4个碱基（XCCA）的单链区，在其末端有2’-OH或3’-OH，是被氨基酰化位点。
此臂负责携带特异的氨基酸。
其它的臂都为茎环结构。
（3）TψC臂存在着特殊的碱基ψ（假尿嘧啶），常由5bp的茎和7Nt和环组成。
此臂负责和核糖体上的rRNA识别结合；
（4）反密码子臂（anticodonarm）常由5bp的茎区和7Nt的环区组成，在环区的中央总存在着反密码子三联体，它负责对mRNA上的密码子的识别与配对。
（5）D环（Darm）的茎区长度常为4bp，环区有4个碱基不恒定，此环位于17，17：
120：
1，20：
2含有特殊的碱基D（双氢尿嘧啶），故也称为（双氢尿嘧啶环）。
（6）额外环（extraarm）可变性大，从4Nt到21Nt不等，其功能是在tRNA的L型三维结构中负责连接两个区域（D环－反密码子环和TψC-受体臂）。
（二）tRNA的三维结构
tRNA的三叶草结构并没有使我们明确tRNA的各个臂在空间上如何排列，只有通过X－衍射来研究tRNA的晶体才能获得tRNA真实的构象。
从几种酵母的tRNA晶体的研究表明，各种tRNA存在共同的三维结构。
它主要是依靠茎中的碱基配对来维持，形成了稳定的L型结构。
此结构的检测结果如下：
（1）氨基酸受体臂位于L型的一侧，距反密码子环约70。
（2）D环和TψC环形成了“L”的转角。
（3）在一些保守和半保守的碱基之间形成很多的三级氢键，使分子形成L形，并使结构稳定。
（4）使得三维结构得以形成的这些碱基配对不同于DNA双链中的碱基配对。
涉及到与磷酸核糖主链相互作用的三级结构的磷酸二酯键分布在核糖的2’-OH上。
（5）几乎所有的碱基其轴向使得碱基平面之间产生堆积的作用。
这种作用也是tRNA构象稳定的主要因素之一。
（6）在反密码子茎中仅有很少的三级氢键，这可能由于在蛋白质合成时，反密码子区的相对方向会发生改变之故。
酵母和大肠杆菌tRNA的三级结构都呈L形折叠式。
这种结构是靠氢键来维持的，tRNA的三级结构与AA-tRNA合成酶的识别有关。
受体臂和TφC臂的杆状区域构成了第一个双螺旋，D臂和反密码子臂的杆状区域形成了第二个双螺旋。
校正tRNA
分离tRNA突变体最有效的方法是分析tRNA对mRNA中的密码子所具有的反应能力，并能确定tRNA分子不同部位对密码子反密码子识别所起的作用。
有些tRNA的突变体能抑制基因突变，正如前面我们已经描述过的基因回复突变中就已涉及到抑制基因（suppressor）或称校正基因。
在tRNA校正系统中，第一次突变是发生在mRNA上，改变了某个密码子，使有义密码子变成了无义密码子，因而合成的产物是截短的或平截（trucation）的，一般都是没有功能的。
而第二次发生的抑制突变或校正突变是改变tRNA上的反密码子，这样它仍可识别突变密码子，插入了一个氨基酸，使蛋白质的功能得到恢复。
此抑制称为依赖于原来突变特点的无义抑制（nonsensesuppressor）或错义抑制（missensesuppressor）。
在一个野生型的细胞中，无义突变只被一种释放因子所识别而终止蛋白质的合成。
校正突变（suppressormutation）产生了一种氨基酰-tRNA能识别终止密码子，通过一个氨基酸的插入使蛋白质的合成能持续下去（图14-11）。
翻译系统这种新的能力使完整的蛋白质得以合成。
如果抑制tRNA所携带的氨基酸和野生型蛋白氨基酸不同的话，此蛋白质的活性可能会降低。
（一）无义抑制通过抑制tRNA识别无义突变位点，将某种氨基酸插入该位点，使得多肽链继续延伸而不中途停止，此就称为无义抑制或无义校正。
无义抑制是通过三个不同的途径来进行的：
①tRNA反义密码子的突变；②副密码子或其他结构的改变；③tRNA反密码子化学修饰。
tRNA反密码子的突变是抑制基因的主要途径。
根据抑制基因的反密码子，无义抑制分为三类，对应于三个终止密码子。
表14-6表示几种研究得最多的抑制基因。
最容易研究的是琥珀突变（am）抑制基因。
在大肠杆菌中至少有六种tRNA突变后可识别密码子UAG，所有的am抑制tRNA都有反密码子CUA，它是由各种野生型tRNA反密码子中单个碱基的改变而产生的（表14-7）。
（二）错义抑制
通过反密码子突变而带有正确的氨基酸的tRNA与错义突变的密码子结合，使错义突变得到抑制称为错义抑制或错义校正。
同样错义抑制也可通过不同的途径来进行的（图14-12）。
3、核糖体
在原核生物中，rRNA有三种：
5S，16S，23S。
其中，16S的rRNA参与构成核蛋白体的小亚基，而5S和23S的rRNA参与构成核蛋白体大亚基。
在真核生物中，rRNA有四种：
5S，5.8S，18S，28S。
其中，18S的rRNA参与构成核蛋白体小亚基，其余的rRNA参与构成核蛋白体大亚基。
核糖体（ribosome）亦称核蛋白体,由rRNA和蛋白质组成
原核生物中的核蛋白体大小为70S，可分为30S小亚基和50S大亚基。
小亚基由16SrRNA和21种蛋白质构成，大亚基由5SrRNA，23SRNA和35种蛋白质构成。
真核生物中的核蛋白体大小为80S，也分为40S小亚基和60S大亚基。
小亚基由18SrRNA和30多种蛋白质构成，大亚基则由5SrRNA，28SrRNA和50多种蛋白质构成，在哺乳动物中还含有5.8SrRNA。
1）原核生物的核糖体
大肠杆菌的tRNA为一椭圆球体，其30S亚基呈哑铃状，50S亚基带有三角，中间凹陷形成空穴，将30S小亚基抱住，两亚基的结合面为蛋白质生物合成的场所。
核蛋白体的大、小亚基分别有不同的功能：
1．小亚基：
可与mRNA、GTP和起动tRNA结合。
2．大亚基：
（1）具有两个不同的tRNA结合点。
A位（右）——受位或氨酰基位，可与新进入的氨基酰tRNA结合；P位（左）——给位或肽酰基位，可与延伸中的肽酰基tRNA结合。
（2）具有转肽酶活性：
将给位上的肽酰基转移给受位上的氨基酰tRNA，形成肽键。
（3）具有GTPase活性，水解GTP，获得能量。
（4）具有起动因子、延长因子及释放因子的结合部位。
4、蛋白因子
5、氨酰－tRNA合成酶
该酶存在于胞液中，与特异氨基酸的活化以及氨基酰tRNA的合成有关。
每种氨基酰tRNA合成酶对相应氨基酸以及携带氨基酸的数种tRNA具有高度特异性，这是保证tRNA能够携带正确的氨基酸对号入座的必要条件。
目前认为，该酶对tRNA的识别，是因为在tRNA的氨基酸臂上存在特定的识别密码。
a、专一性：
对氨基酸有极高的专一性，每种氨基酸都有专一的酶，只作用于L-氨基酸，不作用于D-氨基酸。
对tRNA具有极高专一性。
b、校对作用：
氨酰-tRNA合成酶的水解部位可以水解错误活化的氨基酸。
6、供能物质和无机离子
多肽链合成时，需ATP、GTP作为供能物质，并需Mg2+、K+参与。
氨基酸活化时需消耗2分子高能磷酸键，肽键形成时又消耗2分子高能磷酸键，故缩合一分子氨基酸残基需消耗4分子高能磷酸键。
二、合成过程
1、氨基酸的活化
在蛋白质生物合成中，各种氨基酸在参入肽链之前必须先经活化，然后再由其特异的tRNA携带至核糖体上，才能以mRNA为模板缩合成肽链。
氨基酸活化后与相应的tRNA结合的反应，均是由特异的氨基酰-tRNA合成酶（aminoacyl-tRNAsynthetase，简写为aaRS）催化完成的。
氨基酸的活化以及活化氨基酸与tRNA的结合，均由氨基酰tRNA合成酶催化完成。
其反应过程为在此反应中，特异的tRNA3’端CCA上的2’或3’位自由羟基与相应的活化氨基酸以酯键相连接，形成氨基酸tRNA，从而使活化氨基酸能够被搬运至核蛋白体上参与多肽链的合成。
氨基酸tRNA的合成，可使氨基酸①活化；②搬运；③定位。
每一种氨基酸至少有一种对应的氨基酰-tRNA合成酶。
它既催化氨基酸与ATP的作用,也催化氨基酰基转移到tRNA。
氨基酰-tRNA合成酶具有高度的专一性。
每一种氨基酰-tRNA合成酶只能识别一种相应的tRNA。
tRNA分子能接受相应的氨基酸,决定于它特有的碱基顺序,而这种碱基顺序能够被氨基酰-tRNA合成酶所识别。
第一步反应
氨基酸＋ATP-E—→氨基酰-AMP-E＋AMP＋PPi
第二步反应
氨基酰-AMP-E＋tRNA—→氨基酰-tRNA＋AMP＋E
这些过程是通过形成氨酰-腺苷酸来活化氨基酸羧基而克服成肽时的热力学和能量障碍的。
在这些过程中，第一步是在蛋白质合成酶作用下氨基酸与ATP反应生成氨酰-腺苷酸，这种氨酰-腺苷酸是酶反应中间体，它们在同种酶的作用下能与RNA形成氨酰-tRNA
每种氨基酸都靠其特有合成酶催化,使之和相对应的tRNA结合,在氨基酰tRNA合成酶催化下,利用ATP供能,在氨基酸羧基上进行活化,形成氨基酰-AMP,再与氨基酰tRNA合成酶结合形成三联复合物,此复合物再与特异的tRNA作用,将氨基酰转移到tRNA的氨基酸臂（即3'-末端CCA-OH）上。
aa-tRNA复合物的形成是非常精确的。
aaRS（氨酰合成酶）在非常类似的氨基酸之间怎样进行选择，过去长时间迷惑不解。
后来当发现IleRS如何精确区别Ile和Val后，特别令人鼓舞。
Ile和Val仅有单个甲基之差，以致这二种氨基酸与IleRS的结合能之差仅2-3Kcal，这样小的能差并不能阻止发生错误的结合，即阻止IleRS去识别Val。
例如，当等克分子的Ile和Val混合并加入IleRS后，可产生10-2的错误频率。
但活化的Val与tRNAIle结合率非常低。
当tRNA与Val-AMP-IleRS结合成复合物时，几乎所有的Val-AMP分解为Val和AMP。
这样，在Ile和Val之间的鉴别能够发生二次，最终的错误频率为10-2×10-2=10-4。
现在进一步清楚单通过这些酶的校正是不足以达到足够精确度。
近年来，通过对TyrRS三维结构的研究获得了对aaRS
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