电镜标本制作原理及方法.docx
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电镜标本制作原理及方法
电镜标本制作原理及方法
电镜标本制作原理及方法
一、相关理论
A1型
1.透射电镜最大放大倍数是：
A1000倍
B2000倍
C5万倍
D100万倍
E50万倍
答：
C易
X型
2.透射电镜取材应注意
A动作快捷
B组织体积小（1mmx1mmx1mm）
C固定迅速
D组织损伤小
E冷环境下操作（0-4C）
答案：
ABCDE中
二、专业知识
A1型
3.透射电镜标本超薄，切片厚为：
A1mm
B1卩m
C0.5卩m
D0.3iim
E0.1im
答案：
E中
X型
4.透射电镜标本常用固定液是：
A多聚甲醛
B戊二醛
C锇酸
D丙酮
E乙醇
答案：
BC易
三、实践能力
A2型
5.透射电镜标本制备超薄切片最常用的包埋剂
是：
A火棉胶
B蜜蜡
C石蜡
D明胶
E环氧树脂
答案：
E中
A3型
6.透射电镜超薄切片技术如同石蜡切片都需要切片支撑物，所不同是石蜡切片的支撑物为载玻片，超薄切片为载网，在其上覆盖支持膜问题1超薄切片载网最常用的是：
A铁网
B钢网
C锡网
D铜网
E银网
答案：
D难
问题2最常用的支持膜有：
A环氧树脂膜
B明胶
C火棉胶膜
D甲基丙烯酸甲酯膜
E甲基丙烯酸乙二醇膜
答案：
C难
问题3载网上覆盖支持膜的厚度要求是：
A4-7卩m
B10-20iim
C0.2-0.5卩m
D30-50nm
E60nm
答案：
B难
A4型
7.透射电镜的样品制备方法，超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。
超薄切片的制备流程与石蜡切片相似，需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋、切片、染色等步骤。
问题1透射电镜的样品要求
A新鲜标本组织
B陈旧标本组织
C石蜡标本块
D腐败标本
E冷冻标本
答案：
A易
问题2对动物组织，如脑、动脉、脊髓等最好采用的固定方法为：
A浸泡法
B蒸汽固定法
C微波固定法
D冷固定法
E灌流固定法
答案：
E难
问题3超薄切片技术通常采用双固定法，称
谓前固定和后固定，后固定液为：
A甲醛
B甲醇
C乙醇
D锇酸
E戊二醛
答案：
D中
问题4如当时不能完成浸透、包埋步骤时，标本应保存在
A50%脱水剂中
B60%脱水剂中
C70%脱水剂中
D95%脱水剂中
E100%脱水剂中
答案：
C难
X型
8.超薄切片，为了保证包埋介质完全渗入组织内部，必须将组织内水分驱除干净，最常用的脱水剂是乙醇和丙酮，为防止细胞收缩变形，梯度
脱水步骤应为：
A50%乙醇或丙酮
B70%乙醇或丙酮
C80%乙醇或丙酮
D90%乙醇或丙酮
E100%乙醇或丙酮（二次）
答案：
ABCDE易
9.脱水操作中应注意的问题
A脱水要彻底
B脱水剂要纯
C脱水剂中可加吸水剂（如无水硫酸铜）
D更换脱水步骤时，动作要迅速
E避免样品干燥出现气泡
答案：
ABCDE中
10.超薄切片常用的染色剂是：
A巴氏染色
B苏木素染色
C醋酸铀
D硝酸银
E柠檬酸铅
答案：
CE中
多项问题
11.透射电镜标本制备中，浸透就是利用包埋剂渗入到组织内部取代脱水剂，这种包埋剂在单体状态时为液体，能渗入组织内，当加入某些催化剂，经加温骤合成固定，便于超薄切片。
问题1理想的包埋剂应具有什么特点：
A粘度低，容易渗入组织
B骤合均匀而充分，骤合前后体积变化小
C具有良好的切割性
D能耐受电子轰击，高温下不变形
E对细胞成份抽提少，微细结构保存良好
F电镜的高倍放大下，本身不显示任何结构
G材料来源丰富，易得，价格低廉，对人体无害
答案：
ABCDFG难
问题2常用环氧树脂包埋剂的性质
A环氧树脂是一类高分子骤合物
B分子中含有两种反应基团，即环氧基和羟基
C加入酸酐类时，树脂分子中的羟基能与酸酐结合
D形成分子间横桥连接
E横桥式连接作用的交联剂叫做硬化剂
F硬化剂有十二烷基琥珀酸酐（DDSA）
G环氧树脂包埋剂骤合前后体积变化小
H耐电子束轰击
答案：
ABCDEFGH难
问题3包埋操作中，应注意什么
A所有试剂要防潮，保存干燥瓶中
B所有器具要烘干
C试剂要搅拌均匀，不能有气泡
D动作轻巧
E骤合时温度要控制适宜
F盛放包埋剂的器具及时用丙酮清洗干净
G皮肤不接触包埋剂
答案：
ABCDEFG中
12.超薄切片是透射电镜样品制备流程中，关键步骤之一，必须把标本切成厚度小于0.1卩m以下的薄片才适用，常用超薄切片厚度是50nm。
问题1超薄切片前的准备工作
A手工修包埋块（粗修）
B实体显微镜修块暴露组织
C包埋块修成锥体形
D制刀（玻璃刀和钻石刀）
E载网（100，200，300目）
F支持膜制备（厚度10-20nm）
G半薄切片
答案：
ABCDEFG难
问题2半薄切片制备及意义
A半薄切片厚度为0.2-2卩m
B美蓝染色
C显微镜下定位病变
D细修多余组织
E便于光镜、电镜对病变对比观察
F便于保留有用标本
答案：
ABCDEF难
问题3超薄切片步骤包括
A安装包埋块
B安装玻璃刀
C调节刀与组织块的距离
D调节水槽液面高度与灯光位置
E调节加热电流及切片速度
F切片
G捞取切片至载网上
答案：
ABCDEFG难
13.超薄切片技术虽然已在医学、生物学等领域中得到了广泛的应用，但它普及性、广泛性还有不足，更多的人还掌握的不好，常会在制备过程出现一些切片缺陷，这些缺陷原因是复杂的、相互关联的。
问题1经常出现的缺陷有
A超薄切片破碎
B超薄切片颤痕
C超薄切片刀痕
D超薄切片空洞
E超薄切片厚度不一
F超薄切片不成带
答案：
ABCDEF难
问题2如何解决超薄切片，破碎和颤痕问题
A标本彻底脱水
B包埋剂去除气泡和水分
C调整刀的间隙角和切速
D更换新刀
E调包埋块伸出的长度
F调整包埋剂配方
答案：
ABCDEF难
问题3如何解决超薄切片空洞，厚度不一，切片不成带问题
A除去包埋剂的气泡，使渗透完全
B更换新刀
C包埋剂搅拌均匀
D消除震动
E重新修块
F修去硬质材料
答案：
ABCDEF
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