菌落总数实验报告.docx
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菌落总数实验报告
云阳金谷农业发展有限公司
检验汇报
试验名称:
菌落总数检验
试验方法:
平板计数法
商品名称:
夸夸唔、有友、奇爽、乐棒棒、香猪脆、香脆肚。
参考标准:
GB4789-17
总责任人:
熊经理
检验人员:
徐恒琴、崔艳霞、游惠
检验时间:
7月26—8月6号
8月8日
菌落总数检测
平板计数法
一、试验目
为了深入了解与熟悉我们产品操作规范和关键点控制,掌握菌落总数检验方法和了解超净工作台操作规范。
二、试验仪器设备和所需试剂及试剂配制。
1、试验仪器及设备
杀菌锅YXQ—LS—SU编号5090、无菌超净工作台SW—CJ—IC编号24、JJ-Z型组织捣碎机、隔水或智能恒温培养箱GHP—9080、出厂编号13475、烘箱ZFD—5040（全自动型鼓风干燥箱）、蒸馏水制备机、灭菌过250ml锥形瓶、1ml吸量管、10ml吸量管、酒精灯、锥形瓶1000ml、培养皿、电子天平AL104、电磁炉、锅、锅铲、PH试纸、恒温水浴锅HH—4出厂标号160.53。
2、试验试剂及配制
2.1关键试剂:
琼脂、无菌生理盐水、无菌水、75%酒精、1moL/L氢氧化钠、1moL/L盐酸。
2.2药品试剂
2.21琼脂:
正确称取12.5g胰蛋白胨、酵母浸膏7.5g、葡萄糖3.0g、琼脂37.5g、蒸馏水2500ml,加入至锅中煮沸溶解,先加入琼脂将其熬化,在加入其它样品,直至样品熬化即可关掉火,冷却后调解PH值（7.0左右即可）。
酸性用氢氧化钠调整、碱性用盐酸进行调整,将在1200C高压灭菌15min即可。
2.22无菌生理盐水:
正确称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中。
2.23无菌水:
吸收1000ml蒸馏水,将在1200C高压灭菌15min即可。
2.241moL/L氢氧化钠:
称取40g氢氧化钠溶于1000ml蒸馏水中在1200C高压灭菌15min即可。
2.4575%酒精:
分别吸收400ml95%无水乙醇和100ml蒸馏水与500ml容量瓶中。
2.461moL/LDE盐酸:
移取浓盐酸90ml,用蒸馏水稀释至1000ml,在1200C高压灭菌15min即可。
三．试验步骤
1、样品稀释
1.1固体和半固体样品:
称取25g样品置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水无菌均质杯内,8000r/min～10000r/min均质1min～2min,或放入盛有225ml稀释液无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min～2min,制成1:
10样品匀液。
1.2液体样品:
以无菌吸管吸收25ml样品置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水无菌锥形瓶（瓶内预置合适数量无菌玻璃珠）中,充足混匀,制成1:
10样品匀液。
36℃±1℃48h±2h.
2、检样与接种:
25g（ml）样品+225ml稀释液,均质,10倍系列稀释选择2个～3个适宜稀释度样品匀液,各取1ml分别加入无菌培养皿内。
2.1用1ml无菌吸管或微量移液器吸收1:
10样品匀液1ml,沿管壁缓慢注于盛有9ml稀释液无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面）,振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:
100样品匀液。
2.2.按上述操作程序,制备10倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次,换用1次1ml无菌吸管或吸头。
12.2.依据对样品污染情况估量,选择2个～3个适宜稀释度样品匀液（液体样品可包含原液）,在进行10倍递增稀释时,吸收1ml样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。
同时,分别吸收1ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
3、倒平板:
在酒精灯开着条件下进行到培养皿3分之一即可,而其中琼脂温度需要在46℃即可倒入琼脂,不然会影响其细菌生长繁殖。
平板计数琼脂培养基,混匀.
4、培养:
待琼脂凝固后,将平板翻转,36℃±1℃培养48h±2h。
水产品30℃±1℃培养72h±3h。
假如样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长菌落时,可在凝固后琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4ml）,凝固后翻转平板,
5、报告
6.菌落计数
可用肉眼观察,必需时用放大镜或菌落计数器,统计稀释倍数和对应菌落数量。
菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits,CFU）表示。
6.1选择菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长平板计数菌落总数。
低于30CFU平板统计具体菌落数,大于300CFU可统计为多不可计。
每个稀释度菌落数应采取两个平板平均数。
6.2其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采取,而应以无片状菌落生长平板作为该稀释度菌落数;若片状菌落不到平板二分之一,而其它二分之一中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。
6.3当平板上出现菌落间无显著界线链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。
7结果与汇报
7.1菌落总数计算方法
7.1.1若只有一个稀释度平板上菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数平均值,再将平均值乘以对应稀释倍数,作为每g（ml）样品中菌落总数结果。
7.1.2若有两个连续稀释度平板菌落数在适宜计数范围内时,按公式
（1）计算:
N=∑C/（N1+0.1n2）d…………………………
（1）
式中:
N——样品中菌落数;
ΣC——平板（含适宜范围菌落数平板）菌落数之和;
n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数;
n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数;
d——稀释因子（第一稀释度）。
上述数据按7.2.2数字修约后,表示为25000或2.5×104。
7.1.3若全部稀释度平板上菌落数均大于300CFU,则对稀释度最高平板进行计数,其她平板可
统计为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
7.1.4若全部稀释度平板菌落数均小于30CFU,则应按稀释度最低平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7.1.5若全部稀释度（包含液体样品原液）平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
7.1.6若全部稀释度平板菌落数均不在30CFU～300CFU之间,其中一部分小于30CFU或大于300CFU时,则以最靠近30CFU或300CFU平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7.2菌落总数汇报
7.2.1菌落数小于100CFU时,按“四舍五入”标准修约,以整数汇报。
7.2.2菌落数大于或等于100CFU时,第3位数字采取“四舍五入”标准修约后,取前2位数字,后面用0替换位数;也可用10指数形式来表示,按“四舍五入”标准修约后,采取两位有效数字。
7.2.3若全部平板上为蔓延菌落而无法计数,则汇报菌落蔓延。
7.2.4若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。
7.2.5称重取样以CFU/g为单位汇报,体积取样以CFU/mL为单位汇报。
四、数据处理及结果计算
一、乐棒棒菌落总数数据分析
稀释倍数
平板个数
空白
1细菌菌落数
2细菌菌落数
3细菌菌落数
10
0
37
39
38
100
0
5
8
0
1000
0
0
0
0
若只有一个稀释度平板上菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数平均值,再将平均值乘以对应稀释倍数,作为每g（ml）样品中菌落总数结果。
所以:
N=37+38+39/3×10
N=380个/g
二、奇爽菌落总数数据分析
稀释倍数
平板个数
空白
1
2
3
10
0
267
281
295
100
0
44
34
29
1000
0
4
0
6
若有两个连续稀释度平板菌落数在适宜计数范围内时,按公式
（1）计算:
N=∑C/（N1+0.1n2）d…………………………
（1）
式中:
N——样品中菌落数;
ΣC——平板（含适宜范围菌落数平板）菌落数之和;
n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数;
n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数;
d——稀释因子（第一稀释度）。
N=267+281+295+44+34+29/（3+0.1×3）×10
N=2879个/g
三、香猪脆菌落总数数据分析
结果1
稀释倍数
平板个数
空白
1
2
3
10
0
57
60
34
100
0
12
感杂
4
1000
0
0
0
1
若只有一个稀释度平板上菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数平均值,再将平均值乘以对应稀释倍数,作为每g（ml）样品中菌落总数结果。
所以:
N=57+60+34/3×10
N=503个/g
结果2
稀释倍数
平板个数
空白
1
2
3
10
0
57
60
34
100
0
12
感杂
4
1000
0
0
0
1
若只有一个稀释度平板上菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数平均值,再将平均值乘以对应稀释倍数,作为每g（ml）样品中菌落总数结果。
所以:
N=36+35+12/3×10
N=243个/g
四、夸夸唔菌落总数数据分析
稀释倍数
平板个数
空白
1
2
3
10
0
452
336
650
100
0
53
118
84
1000
0
15
8
7
若只有一个稀释度平板上菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数平均值,再将平均值乘以对应稀释倍数,作为每g（ml）样品中菌落总数结果。
所以:
N=53+118+84/3×100
N=8500
五、有友菌落总数数据分析
稀释倍数
平板个数
空白
1
2
3
10
0
1
7
2
100
0
感杂
感杂
0
1000
0
0
0
0
只有一个稀释度平板上菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数平均值,再将平均值乘以对应稀释倍数,作为每g（ml）样品中菌落总数结果。
所以:
N=1+7+3/3×10
N=33个/g
六、香脆肚菌落总数数据分析
稀释倍数
平板个数
空白
1
2
3
10
0
131
444
376
100
0
158
121
136
1000
0
43
47
55
若有两个连续稀释度平板菌落数在适宜计数范围内时,按公式
（1）计算:
N=∑C/（N1+0.1n2）d…………………………
（1）
式中:
N——样品中菌落数;
ΣC——平板（含适宜范围菌落数平板）菌落数之和;
n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数;
n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数;
d——稀释因子（第一稀释度）。
N=158+121+136+43+47+55/【3+0.1×3】×10-1
N=16969
五、数据分析。
经过一系列试验论证表明:
自己贴牌产品菌落总数含量较高,而其中香脆肚菌落总数含量更高,而泡椒风爪菌落总数都控制都很好。
所以,在以后生产过程中药控制好贴牌产品环境和杀菌效果。
菌落总数对环境要求较高需要在无菌条件下进行,以免被污染。
在倒平板时要注意琼脂温度,温度控制在46℃左右。
还有在放入培养箱之前要将凝固好琼脂倒置,以免水蒸气影响其结果。
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