常用蛋白质分子量标准参照物.docx
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常用蛋白质分子量标准参照物
十、常用蛋白质分子量标准参照物
高分子量标准参照中分子量标准参物低分子量标准参照
蛋白质
Mr
蛋白质
Mr
蛋白质
Mr
肌球蛋白
212000
磷酸化酶B
97400
碳酸酐酶
31000
3半乳糖苷酶
116000
牛血清清蛋白
66200
大豆胰蛋白酶制剂
21500
磷酸化酶B
97400
谷氨酸脱氢酶
55000
马心肌球蛋白
16900
牛血清清蛋白
66200
卵清蛋白
42700
溶菌酶
14400
过氧化氢酶
57000
醛缩酶
40000
肌球蛋白（F1）
8100
醛缩酶
40000
碳酸酐酶
31000
肌球蛋白（F2）
6200
大豆胰蛋白酶抑制剂
21500
肌球蛋白（F3）
2500
溶菌酶
14400
十^一、层析法常用数据表及性质
（一）离子交换纤维素
目前常用的离子交换纤维素列于下表
DEAE-
纤维素
形状
长度
（微米）
交换当量
（毫克当量/克）
蛋白吸附容量（毫克/克）
床体积（毫升/克）
胰岛素
（pH8.5）
牛血清清蛋白
（pH8.5）
pH6.0
pH7.5
DE-22
DE-23
DE-32
DE-52
CM-纤维素
CM-22
CM-23
CM-32
CM-52
改良纤维性*同上（除细粒）微粒性（干粉）同上（溶胀）
改良纤维性
同上（除细粒）微粒性（干粉）同上（溶胀）
12~400
18~400
24~63
24~63
12~400
18〜400
24~63
24~63
1.0±0.1
1.0±0.1
1.0±0.1
1.0±0.1
0.6±0.06
0.6±0.06
1.0±0.1
1.0±0.1
750
750
850
850
溶菌酶
（pH5.0）
600
600
1,260
1,260
450
450
660
660
7S-y球蛋白
（pH5.0）
150
150
400
400
7.7
8.3
6.0
6.0
pH5.0
7.7
9.1
6.8
6.8
7.7
9.1
6.3
6.3
pH7.5
7.7
9.1
6.7
6.7
*:
英国Whatman厂的型号，原来有旧型号如DE-1，为长纤维性，长度1000微米。
还有DE-11,纤维性，50〜250微米，对牛血清清蛋白的吸附容量仅为130毫克/克。
（二）聚丙烯酰胺凝胶的技术数据
型号
排阻的下限
（Mr）
分级分离的范围
（Mr）
膨胀后的床体积
（mL/g干凝胶）
膨胀所需最少时间
（室温，小时）
Bio-gel-P-2
1600
200~2000
3.8
2~4
Bio-gel-P-4
3600
500~4000
5.8
2~4
Bio-gel-P-6
4600
1000~5000
8.8
2~4
Bio-gel-P-10
10000
5000~17000
12.4
2~4
Bio-gel-P-30
30000
20000~50000
14.9
10~12
Bio-gel-P-60
60000
30000~70000
19.0
10~12
Bio-gel-P-100
100000
40000~100000
19.0
24
Bio-gel-P-150
150000
50000~150000
24.0
24
Bio-gel-P-200
200000
80000~300000
34.0
48
Bio-gel-P-300
300000
100000~400000
40.0
48
注：
上述各种型号的凝胶都是亲水性的多孔颗粒，在水和缓冲溶液中很容易膨胀，生产厂为
Bio-RadLaboratories,Rich-mond,California,U.S.A.
（三）琼脂糖凝胶的技术数据
（琼脂糖是琼脂内非离子型的组分，它在0~4C,pH4~9范围内是稳定的。
）
名称、型号
凝胶内琼脂糖百分
含量（W/W）
排阻的下限（Mr）
分级分离的范围（Mr）
生产厂商
Sagavac10
10
2.5氷05
1M04~2.5105
SeravacLaboratories,
Sagavac8
8
7X105
2.5104~7X105
Maidenhead,England
Sagavac6
6
2X106
5M04~2X106
Sagavac4
4
15X106
2M05~15>106
Sagavac2
2
150XI06
5M05~15X107
Bio-GelA-0.5M
10
0.5105
<1X104~2.5为06
Bio-RadLaboratories,
Bio-GelA-1.5M
8
1.5106
<1X104~1.5为06
California,U.S.A.
Bio-GelA-5M
6
5X106
1M04~5X106
Bio-GelA-15M
4
15M05
4M04~15X106
Bio-GelA-50M
2
50M06
1M05~50>106
Bio-GelA-150M
1
150XI06
1M06~150X106
（四）凝胶过滤层析介质的技术数据
凝胶过滤介质
名称
分离范围
颗粒
大小
（卩m）
特性/应用
pH稳定
性工作
耐压
（Mpa）
最快
流速
（cm/h）
Superdex30
<10000
24〜44
肽类、寡糖、小蛋白等
3~12
0.3
100
Superdex75
3000〜70000
24〜44
重组蛋白、细胞色素
3~12
0.3
100
Superdex2000
10000~600000
24~44
单抗、大蛋白
3~12
0.3
100
Superose6
5000~5X106
20~40
蛋白、肽类、多糖、核酸
3~12
0.4
30
Superose12
1000~300000
20~40
蛋白、肽类、寡糖、多糖
3~12
0.7
30
SephacrylS-100HR
1000~100000
25~75
肽类、小蛋白
3~11
0.2
20~39
SephacrylS-200HR
5000〜250000
25~75
蛋白，如清蛋白
3~11
0.2
20~39
SephacrylS-300HR
10000〜1.5X06
25~75
蛋白、抗体
3~11
0.2
20~39
Sephacryl
20000~8X106
25~75
多糖、具延伸结构的大分
3~11
0.2
20~39
S-400HR
子如蛋白多糖、脂质体
Sepharose6FastFlow
10000~4X106
平均90
巨大分子
2~12
0.1
300
Sepharose4FastFlow
60000~20X106
平均90
巨大分子如重组乙型肝炎表面抗原
2~12
0.1
250
Sepharose2B
70000~40X106
60~200
蛋白、大分子复合物、病毒、不对称分子如核酸和多糖（蛋白多糖）
4~9
0.004
10
Sepharose4B
60000~20X106
45~165
蛋白、多糖
4~9
0.008
11.5
Sepharose6B
10000~4X106
45~165
蛋白、多糖
0.02
14
Sepharose
70000~40X106
60~200
蛋白、大分子复合物、病
4~9
0.005
15
CL-2B
毒、不对称分子如核酸和多糖（蛋白多糖）
SepharoseCL-4B
60000~20X105
45~165
蛋白、多糖
3~13
0.012
26
SepharoseCL-6B
10000~4X106
45~165
蛋白、多糖
3~13
0.02
30
颗粒
pH
干凝胶
溶胀最少
最快
凝胶过滤介质
分离
大小
特性/应用
稳定性
溶胀体积
平衡时间（h）
流速
名称
范围
（卩m）
工作
（mL/g）
室温
沸水
（cm/h）
SephadexG-10
<700
干粉40~120
2~13
2~3
3
1
2~5
SephadexG-15
<1500
干粉40~120
2~13
2.5~3.5
3
1
2~5
SephadexG-25Coarse
1000~5000
干粉100~300
脱盐及交换缓冲液用
2~13
4~6
6
2
2~5
SephadexG-25Medium
1000~5000
干粉50~150
脱盐及交换缓冲液用
2~13
4~6
6
2
2~5
SephadexG-25
Fine
1000~5000
干粉20~80
脱盐及交换缓冲液用
2~13
4~6
6
2
2~5
SephadexG-25Superfine
1000~5000
干粉10~40
脱盐及交换缓冲液用
2~13
4~6
6
2
2~5
SephadexG-50Coarse
1500~30000
干粉100~300
小分子蛋白质分离
2~10
9〜11
6
2
2~5
SephadexG-50
Medium
1500~30000
干粉50~150
小分子蛋白质分离
2~10
9〜11
6
2
2~5
SephadexG-50
Fine
1500~30000
干粉20~80
小分子蛋白质分离
2~10
9~11
6
2
2~5
SephadexG-50Superfine
1500~30000
干粉10~40
小分子蛋白质分离
2~10
9~11
6
2
2~5
SephadexG-75
3000~80000
干粉40~120
中等蛋白质分离
2~10
12~15
24
3
72
SephadexG-75
Superfine
3000~70000
干粉10~40
中等蛋白质分离
2~10
12~15
24
3
16
SephadexG-100
4000〜1.5X05
干粉40~120
中等蛋白质分离
2~10
15~20
48
5
47
SephadexG-100
Superfine
4000~1X105
干粉10~40
中等蛋白质分离
2~10
15~20
48
5
11
SephadexG-150
5000~3X105
干粉40~120
稍大蛋白质分离
2~10
20~30
72
5
21
SephadexG-150
Superfine
5000~1.5X05
干粉10~40
稍大蛋白质分离
2~10
18~22
72
5
5.6
SephadexG-200
5000~6X105
干粉40~120
较大蛋白质分离
2~10
30~40
72
5
11
SephadexG-200
Superfine
5000~2.5X05
干粉10~40
较大蛋白质分离
2~10
20~25
72
5
2.8
SephadexLH20
100~
干粉
特别为使用有机溶剂而设计。
适合分离脂类、胆固醇、脂肪酸、激素、
（嗜脂性）
4000
25~106
维生素及其他小生物分子。
此分离范围指以酒精为溶剂的分离
（五）离子交换层析介质的技术数据
离子交换介质名称
最高载量
颗粒大小
（卩m）
特性/应用
pH稳定性工作
耐压
（MPa
最快
流速
（cm/h）
SOURCE15Q
25mg
蛋白
15
2〜12
4
1800
SOURCE15S
25mg
蛋白
15
2〜12
4
1800
QSepharoseH.P.
70mgBSA
24〜44
2〜12
0.3
150
SPSepharoseH.P.
55mg
核糖核酸酶
24〜44
3〜12
0.3
150
QSepharoseF.F.
120mg
HSA
45〜165
2〜12
0.2
400
SPSepharoseF.F.
75mgBSA
45〜165
4〜13
0.2
400
DEAESepharose
F.F.
110mg
HSA
45〜165
2〜9
0.2
300
CMSepharoseF.F.
50mg
核糖核酸酶
100〜300
6〜13
0.2
300
QSepharoseBigBeads
100〜300
2〜12
0.3
1200〜
1800
SPSepharoseBigBeads
60mgBSA
干粉
40〜120
4〜12
0.3
1200〜
1800
离子交换介质名称
最高载量
颗粒大小（卩m
特性/应用
pH稳定性工作
耐压
（MPa）
最快流速
（cm/h）
QAESephadex
A-25
1.2mg甲状腺球
蛋白
80mgHSA
干粉
40〜120
纯化低分子量蛋白、多肽、核苷以及巨大分子
（Mr>200000）,在
工业传统应用上具有重要作用
2〜10
0.11
475
QAESephadex
A-50
1.2mg甲状腺球
蛋白
80mgHSA
干粉
40〜120
批量生产和预处理用，分离中等大小的生物分子
（30〜200000）
2〜11
0.01
45
SPSephadex
C-25
1.1mgIgG70mg牛羰合血红蛋白230mg核糖核酸酶
干粉
40〜120
纯化低分子量蛋白、多肽、核苷以及巨大分子
（Mr>200000）,在
工业传统应用上具有重要作用
2〜10
0.13
475
SPSephadex
C-50
8mgIgG
110mg牛羰合
血红蛋白
干粉
40〜120
批量生产和预处理用，分离中等大小
的生物分子
（30〜200000）
2〜10
0.01
45
DEAESephadex
A-25
1mg甲状
腺球蛋白
30mgHAS
140mga-乳清蛋白
干粉
40〜120
纯化低分子量蛋白、多肽、核苷以及巨大分子
（Mr>200000）,
在工业传统应用上具有重要作用
2〜9
0.11
475
DEAESephadex
A-50
2mg甲状腺球蛋白
110mgHSA
干粉
40〜120
批量生产和预处理用，分离中等大小
的生物分子
（Mr>200000）,在
工作传统应用上具
有重要作用
2〜9
0.11
45
CMSephadex
C-25
1.6mgIgG70mg牛羰合血红蛋白190mg核糖核酸酶
干粉
40〜120
纯化低分子量蛋白、多肽、核苷以及巨大分子
（Mr>200000）,在
工业传统应用上具有重要作用
6〜13
0.13
475
CMSephadex
C-50
7mgIgG140mg牛羰合血红蛋白120mg核糖核酸酶
干粉
40〜120
批量生产和预处理用，分离中等大小
的生物分子
（30〜200000）
6〜10
0.01
45
十二、常用缓冲溶液的配制方法
1.甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05mol/L）
X毫升0.2mol/L甘氨酸+Y毫升0.2mol/LHCI，再加水稀释至200毫升
pH
X
Y
pH
X
Y
2.0
50
44.0
3.0
50
11.4
2.4
50
32.4
3.2
50
8.2
2.6
50
24.2
3.4
50
6.4
2.8
50
16.8
3.6
50
5.0
甘氨酸分子量=75.07,0.2mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。
2.邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（0.05mol/L）
X毫升0.2mol/L邻苯二甲酸氢钾+0.2mol/LHCl，再加水稀释到20毫升
pH（20C）
X
Y
pH（20C）
X
Y
2.2
5
4.070
3.2
5
1.470
2.4
5
3.960
3.4
5
0.990
2.6
5
3.295
3.6
5
0.597
2.8
5
2.642
3.8
5
0.263
3.0
5
2.022
令邻苯二甲酸氢钾分子量
=204.23,0.2mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升
3.磷酸氢二钠-
-柠檬酸缓冲液
pH
0.2mol/L
0.1mol/L
pH
0.2mol/L
0.1mol/L
Na2HPO4
柠檬酸
Na2HPO4
柠檬酸
（毫升）
（毫升）
（毫升）
（毫刑
2.2
0.40
10.60
5.2
10.72
9.28
2.4
1.24
18.76
5.4
11.15
8.85
2.6
2.18
17.82
5.6
11.60
8.40
2.8
3.17
16.83
5.8
12.09
7.91
3.0
4.11
15.89
6.0
12.63
7.37
3.2
4.94
15.06
6.2
13.22
6.78
3.4
5.70
14.30
6.4
13.85
6.15
3.6
6.44
13.56
6.6
14.55
5.45
3.8
7.10
12.90
6.8
15.45
4.55
4.0
7.71
12.29
7.0
16.47
3.53
4.2
8.28
11.72
7.2
17.39
2.61
4.4
8.82
11.18
7.4
18.17
1.83
4.6
9.35
10.65
7.6
18.73
1.27
4.8
9.86
10.14
7.8
19.15
0.85
5.0
10.30
9.70
8.0
19.45
0.55
Na2HPO4分子量=14.98,0.2mol/L溶液为28.40克/升。
Na2HPO4-2H2O分子量=178.05,0.2mol/L溶液含35.01克/升。
C4H2O7•H2O分子量=210.14,0.1mol/L溶液为21.01克/升。
4•柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液
pH
钠离子浓度
（mol/L）
柠檬酸（克）
C6H8O7•H2O
氢氧化钠（克）
NaOH97%
盐酸（毫升）
HCl（浓）
最终体积（刑①
2.2
0.20
210
84
160
10
3.1
0.20
210
83
116
10
3.3
0.20
210
83
106
10
4.3
0.20
210
83
45
10
5.3
0.35
245
144
68
10
5.8
0.45
285
186
105
1010
6.5
0.38
266
156
126
①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液
或浓盐酸调节，冰箱保存。
5•柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（0.1mol/L）
pH
0.1mol/L
柠檬酸
（毫升）
0.1mol/L
柠檬酸钠
（毫升）
pH
0.1mol/L
柠檬酸
（毫升）
0.1mol/L
柠檬酸钠
（毫升）
3.0
18.6
1.4
5.0
8.2
11.8
3.2
17.2
2.8
5.2
7.3
12.7
3.4
16.0
4.0
5.4
6.4
13.6
3.6
14.9
5.1
5.6
5.5
14.5
3.8
14.0
6.0
5.8
4.7
15.3
4.0
13.1
6.9
6.0
3.8
16.2
4.2
12.3
7.7
6.2
2.8
17.2
4.4
11.4
8.6
6.4
2.0
18.0
4.6
10.3
9.7
6.6
1.4
18.6
4.8
9.2
10.8
柠檬酸C6H8O7・H20:
分子量210.14,0.1mol/L溶液为21.01克/升。
柠檬酸钠Na3C6H5O7•2H2O:
分子量294.12,0.1mol/L溶液为29.41克/毫升。
6.乙酸-乙酸钠缓冲液（0.2mol/L）
pH（18C）
0.2mol/L
NaAc
（毫升）
0.3mol/L
HAc
（毫升）
pH（18C）
0.2mol/L
NaAc
（毫升）
0.3mol/L
HAc
（毫升）
2.6
0.75
9.25
4.8
5.90
4.10
3.8
1.20
8.80
5.0
7.00
3.00
4.0
1.80
8.20
5.2
7.90
2.10
4.2
2.65
7.35
5.4
8.60
1.40
4.4
3.70
6.30
5.6
9.10
0.90
4.6
4.90
5.10
5.8
9.40
0.60
Na2Ac3H2O分子量=136.09,0.2mol/L溶液为27.22克/升。
7•磷酸盐缓冲液
（1）磷酸氢二钠-磷
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