输血相容性检测室内质控操作规程.docx

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输血相容性检测室内质控操作规程

作者：

败转头

作品编号44122544：

GL568877444633106633215458

时间：

2020.12.13

输血相容性检测室内质控操作规程

【目的】规范输血科各级检验人员室内质控操作程序，确保检验结果准确、可靠。

【适用范围】适用于输血相容性检测项目。

【职责】输血科全体员工均遵守执行。

（一）ABO、RhD血型室内质控操作规程

【检验原理】

选择已知型别的红细胞和血清，根据其与在用试剂标准血清：

抗A、抗B、抗D、ABO血型反定型红细胞及ABO血型抗原检测卡（微柱凝胶）阳性及阴性检测结果，通过每天或每批与待检标本相同的试剂和方法进行检测，以监控实验室进行ABO、RhD血型检测过程中应用的试剂、设备及实验流程，并评估实验结果的有效性。

【主要试剂组成】

1.质控品：

样本1A1型RhD（+）红细胞

样本2B型RhD（+）红细胞

样本3A血清

样本4B血清

样本5O型RhD（+）红细胞

样本6RhD（-）红细胞

2.血型鉴定试剂：

标准血清：

抗A，抗B，抗D

ABO血型反定型红细胞：

Ac，Bc，Oc

ABO血型抗原检测卡（微柱凝胶）

【主要仪器】卡式专用离心机

【检验方法】首先将质控品、标准血清及ABO血型反定型红细胞从冰箱取出后平衡至室温。

操作步骤按不同检验方法（平板法、试管法、微柱凝胶法）具体如下：

1.平板法：

在玻片上（或纸片上）按表1加样各1滴（50ul），混匀（直径约20mm大小），前后缓慢摇晃玻片，2分钟左右肉眼判读结果，并记录。

2.试管法：

取13支（95mm×12mm或75mm×12mm）试管做好标记，按表1加样各1滴（50ul），混匀，离心（离心速度和时间可以选择转速1000rpm时间1分钟或转速3400rpm时间15秒），判定结果，并记录。

表1平板法、试管法ABO及RhD血型室内质控加样表

抗A+样本1

抗B+样本1

抗D+样本1

4%Ac+样本3

4%Bc+样本3

4%Oc+样本3

抗A+样本2

抗B+样本2

抗D+样本2

4%Ac+样本4

4%Bc+样本4

4%Oc+样本4

抗A+样本5

抗B+样本5

抗D+样本5

抗D+样本6

3.柱凝胶法：

取4张待检ABO血型抗原检测卡（微柱凝胶）做好标记。

将样本1分别加入第1张卡的1-3孔中各1滴（50ul），将样本2分别加入第2张卡的1-3孔中各1滴（50ul），将样本5分别加入第3张卡的1-3孔中各1滴（50ul），将样本6加入第4张卡的第3孔内。

使用卡式专用离心机离心，取出，肉眼判定结果，并记录。

【建立参考值】

首次使用质控品或不连续使用时，需要连续做三天试验，结果一致，方可定为参考值；更换不同批号质控品时，需新旧质控品同时做，连续两天，旧批号质控品在控，新批号质控品质控品结果一致，可确定参考值；更换试剂时，需新旧批号试剂同时做两次质控品，两次结果一致，可确定参考值；不同仪器或不同方法学均要单独定值。

质控规则：

按《输血相容性检测的室内质控程序》执行。

【失控判定】

阳性结果与预期结果比较出现超过1+凝集强度的差异，或阴性质控出现阳性结果时，均视为失控。

失控原因分析：

按《输血相容性检测的室内质控程序》执行。

失控解决方案：

按《输血相容性检测的室内质控程序》执行。

【记录表格】

《输血相容性检测室内质控参考值登记表》………………………SXK-JL65

《输血相容性检测室内质控登记表》………………………………SXK-JL66

《输血相容性检测室内质控失控及失控处理记录表》……………SXK-JL67

【注意事项】

1.室内质控品、标准血清、标准红细胞保存在2～8℃，严禁在室温长期存放。

2.用后剩余质控品不宜与新质控品混合，以防污染，不同批号质控品不得混用。

3.红细胞质控品：

轻拿轻放，避免剧烈震荡；若发生凝集，出血菌落或严重溶血，不得使用；若出现轻微溶血可用生理盐水对其进行洗涤，重新悬浮后使用。

4.质控血清：

出现浑浊或沉淀时，应进行适当离心，去除杂物后将上清液移至洁净容器中使用。

【参考资料】

1.长春愽迅生物技术有限公司《ABO、RhD血型检测质控品（微柱凝胶法）说明书》

2.长春愽迅生物技术有限公司《ABO、RhD血型检测卡（微柱凝胶法）说明书》

3.上海血液生物医药有限责任公司《抗A抗B血型定型试剂（单克隆抗体）说明书》

4.密理博（上海）贸易有限公司《康D（IgM+IgG）血型定型试剂（单克隆抗体）说明书》

（二）不规则抗体筛检室内质控操作规程

【检验原理】

选择已知血清，标本其与在用试剂抗人球蛋白检测卡（微柱凝胶）中的阳性及阴性结果，通过每天或每批与待检标本相同的试剂和方法进行检测，以监控实验室进行不规则抗体筛检过程中应用的试剂、设备及实验流程，并评估实验结果的有效性。

【主要试剂组成】

1.质控品：

样本1O型血清

样本2IgG型抗D（+）AB血清

2.不规则抗体筛检试剂：

抗人球蛋白不规则抗体筛检卡（微柱凝胶）

Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ抗体筛检红细胞

【主要仪器】卡式专用离心机

【检验方法】微柱凝胶法，具体操作步骤如下：

1.将质控品、抗体筛检红细胞从冰箱取出后平衡至室温。

2.取1张抗人球蛋白不规则抗体筛检卡做好标记。

3.将Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ抗体筛检细胞用低离子强度盐溶液稀释至0.8%，对应加入上述检测

卡1～6管中，50ul/管。

4.分别在前3管加入样本1，后3管加入样本2，50ul/管。

5.将检测卡置37℃孵育器中15分钟。

6.即刻使用卡式专用离心机离心，取出，肉眼判定结果，并记录。

【建立参考值】

首次使用质控品或不连续使用时，需要连续做三天试验，结果一致，方可定为参考值；更换不同批号质控品时，需新旧质控品同时做，连续两天，旧批号质控品在控，新批号质控品质控品结果一致，可确定参考值；更换试剂时，需新旧批号试剂同时做两次质控品，两次结果一致，可确定参考值；不同仪器或不同方法学均要单独定值。

质控规则：

按《输血相容性检测的室内质控程序》执行。

【失控判定】

阳性结果与预期结果比较出现超过1+凝集强度的差异，或阴性质控出现阳性结果时，均视为失控。

失控原因分析：

按《输血相容性检测的室内质控程序》执行。

失控解决方案：

按《输血相容性检测的室内质控程序》执行。

【记录表格】

《输血相容性检测室内质控参考值登记表》………………………SXK-JL65

《输血相容性检测室内质控登记表》………………………………SXK-JL66

《输血相容性检测室内质控失控及失控处理记录表》……………SXK-JL67

注意事项

作者：

败转头

作品编号44122544：

GL568877444633106633215458

时间：

2020.12.13

1.室内质控品、抗筛细胞、保存在2～8℃，严禁在室温长期存放。

2.用后剩余质控品不宜与新质控品混合，以防污染，不同批号质控品不得混用。

3.质控血清：

出现浑浊或沉淀时，应进行适当离心，去除杂物后将上清液移至洁净容器中使用。

参考资料

1.长春愽迅生物技术有限公司《不规则抗体筛检质控品说明书》

2.长春愽迅生物技术有限公司《抗人球蛋白检测卡不规则抗体筛检操作说明书》

3.长春愽徳生物技术有限责任公司《不规则抗体检测试剂（人红细胞）使用说明书》

（三）交叉配血室内质控操作规程

【检验原理】

凝聚胺介质法：

红细胞表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集，其悬浮在电解质中形成Zeta电位，Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。

而凝聚胺介质法则是首先利用低离子溶液降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体结合，其后加入凝聚胺溶液（Polybrene，为高价阳离子多聚物、肝素中和剂），以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞表面带有的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的凝聚，最后加入悬浮液（Resuspending），

中和凝聚胺（Polybrene）阳离子作用，使正常的红细胞非特异性凝聚散开，试验结果为阴性，但如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，试验结果为阳性。

微柱凝胶法：

选择已知的血清和相应的细胞，标本其与在用试剂抗人球蛋白检测卡（微柱凝胶）中的阳性及阴性结果，通过每天或每批与待检标本相同的试剂和方法进行检测，以监控实验室进行交叉配血过程中应用的试剂、设备及实验流程，并评估实验结果的有效性。

【主要试剂组成】

1.质控品：

样本1AB型RhD（+）红细胞

样本2O型RhD（+）红细胞

样本3RhD（-）红细胞

样本4O血清

样本5IgG抗DAB血清

2.交叉配血检测试剂：

凝聚胺介质试剂：

低离子溶液（LIM）、凝聚胺（Polybrene）、悬浮液（Resuspending）

抗人球蛋白交叉配血检测卡（微柱凝胶）

【主要仪器】卡式专用离心机

【检验方法】

首先将质控品、凝聚胺介质从冰箱取出后平衡至室温。

操作步骤按不同检验方法（试管法、微柱凝胶法）进行。

1.凝聚胺介质法为试管法，操作步骤如下：

1.1取4支（95mm×12mm或75mm×12mm）试管做好标记.

1.2按照组合1（样本4+样本1）、组合2（样本4+样本2）、组合3（样本5+样本1）、组合4（样本5+样本3）分别加入各管，各1滴（50ul）。

1.3各管加入低离子溶液（LIM）0.65ml，混合均匀后，各管加入凝聚胺（Polybrene）溶液2滴（100ul），并混合均匀。

1.4用离心机3400rpm时间10秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。

1.5轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝聚，如无凝聚，则必须重做。

1.6最后加入悬浮液（Resuspending）2滴（100ul），轻轻摇动试管混合并同时观察结果。

如凝聚散开，表示由Polybrene引起的非特异性凝集，抗体筛检结果为阴性。

如果凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结果的特异性反应，抗体筛检结果为阳性，应进一步作抗体鉴定。

2、微柱凝胶法操作步骤如下：

2.1取1张待检抗人球蛋白交叉配血检测卡（微柱凝胶）做好标记。

2.2交叉配血实验按照组合1（样本4+样本1）、组合2（样本4+样本2）、组合3（样本5+样本1）、组合4（样本5+样本3）加样，各50ul。

2.3将检测卡置37℃孵育器中15分钟。

2.4即刻使用卡式专用离心机离心，取出，肉眼判定结果，并记录。

【结果解释】

交叉配血室内质控根据其检测作用可分为IgG组和IgM组如表2。

表2交叉配血室内质控IgG、IgM分组表

组合

质控品组合

检测结果

检测作用

组合1

样本4+样本1

+

检测IgM类抗原抗体反应

组合2

样本4+样本2

-

检测IgM类抗原抗体反应

组合3

样本5+样本1

+

检测IgG类抗原抗体反应

组合4

样本5+样本3

-

检测IgG类抗原抗体反应

【建立参考值】

首次使用质控品或不连续使用时，需要连续做三天试验，结果一致，方可定为参考值；更换不同批号质控品时，需新旧质控品同时做，连续两天，旧批号质控品在控，新批号质控品质控品结果一致，可确定参考值；更换试剂时，需新旧批号试剂同时做两次质控品，两次结果一致，可确定参考值；不同仪器或不同方法学均要单独定值。

质控规则：

按《输血相容性检测的室内质控程序》执行。

【失控判定】

阳性结果与预期结果比较出现超过1+凝集强度的差异，或阴性质控出现阳性结果时，均视为失控。

失控原因分析：

按《输血相容性检测的室内质控程序》执行。

失控解决方案：

按《输血相容性检测的室内质控程序》执行。

【记录表格】

《输血相容性检测室内质控参考值登记表》………………………SXK-JL65

《输血相容性检测室内质控登记表》………………………………SXK-JL66

《输血相容性检测室内质控失控及失控处理记录表》……………SXK-JL67

【注意事项】

1.室内质控品保存在2～8℃，严禁在室温长期存放。

2.用后剩余质控品不宜与新质控品混合，以防污染，不同批号质控品不得混用。

3.红细胞质控品：

轻拿轻放，避免剧烈震荡；若发生凝集，出血菌落或严重溶血，不得使用；若出现轻微溶血可用生理盐水对其进行洗涤，重新悬浮后使用。

4.质控血清：

出现浑浊或沉淀时，应进行适当离心，去除杂物后将上清液移至洁净容器中使用。

【参考资料】

1.长春愽迅生物技术有限公司《交叉配血质控品（微柱凝胶法）说明书》

2.珠海贝索生物技术有限公司《凝聚胺介质试剂说明书》

3.长春愽迅生物技术有限公司《抗人球蛋白检测卡交叉配血操作说明》

作者：

败转头

作品编号44122544：

GL568877444633106633215458

时间：

2020.12.13