PCR上岗证考试题及答案全.docx

PCR上岗证考试题及答案全.docx

《PCR上岗证考试题及答案全.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《PCR上岗证考试题及答案全.docx（21页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。

PCR上岗证考试题及答案全

PCR上岗证考试题及答案（全）

一、选择题（共20题，每题2分）

1在核酸提取时,常需使用氯化钠、醋酸钠等盐溶液,其目的是:

（A）

A中和核酸的负离子,使其易于沉淀

B调节PH值

C保证核酸的完整性D无特定目的

2临床上使用核酸扩增方法诊断沙眼衣原体感染,在标本收集上最为关键的是

（B）

A标本的采取方式B标本的保存方式C标本的运送方式D标本采取的时间

3→之所以要将基因扩增检验实验室的产物分析区设置为负压状态,目的是:

（B）

A防止生物传染危险物的逸出

B防止扩增产物从该区进入上游区域

C防止该区灰尘的逸出

D无特殊目的

4核酸探针的标志性特征是:

（D

A一小段已知序列的单链核酸B一小段未知序列的单链核

有同位素或非同位素标记物

5核酸提取纯化中,Rnase最主要的潜在污染源是:

（D）

A实验室环境

B实验用品如吸头、离心管等C实验人员的手D以上A和B

6PCR方法检测病原微生物所扩增的区段,一般为:

（B）

A整个病原体基因组

B病原体基因组内的保守区域

C病原体基因组内的任一区域

D以上都不是

7无创产前基因诊断为胎儿做出基因检测,需从孕妇外周血中分离获取及少量

的:

（B）

A孕妇有核红细胞

B胎儿有核红细胞

C白细胞

D以上均可

8.临床PCR测定的重复性不好的原因如下,但除外:

（B

A试剂盒核酸提取方法对扩增抑制物去除不干净B标准品浓度不准

C核酸扩增仪空间温度不均

D加样重复性差

9有关于动力学定量PCR方法中对扩增效率的测定,下述哪一条是错误的:

（B

A必须在扩增的指数期内测定

B可在扩增的任何阶段进行

C与扩增产物的测定有关

D尽可能多选几个测定点

10.临床基因扩增检验的室内质量控制与通常的临床定性免疫测定IQC的最大不

同在于:

（D）

A弱阳性质控血清的设置B强阳性质控血清的设置

C阴性质控血清的设置D以上均是

11、PCR技术扩增DNA,需要的条件是（A）

①目的基因②引物③四种脱氧核苷酸④DNA聚合酶等⑤mRNA⑥核糖体

A、①②③④B、②③④⑤C、①③④⑤D、①②③⑥

12、镁离子在DNA或RNA体外扩增反应的浓度一般为（D）

A、0.3-1mmol/LB、0.5-1mmol/LC、0.3-2mmol/LD、0.5-2mmol/L

13、多重PCR需要的引物对为（D）

A、一对引物B、半对引物C、两对引物D、多对引物

14、PCR是在引物、模板和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应，其特异性决定因素为（B）

A、模板B、引物C、dNTPD、镁离子

15、在PCR反应中，下列哪项可以引起非靶序列的扩增的扩增（C）

A、TaqDNA聚合酶加量过多B、引物加量过多

C、A、B都可D、缓冲液中镁离子含量过高

16、PCR技术的发明人是（A）

A、MullisB、史蒂文.沙夫C、兰德尔.才木

17、PCR产物短期存放可在（A）保存。

A、4℃B、常温C、-80℃D、高温

18、PCR产物长期储存最好置于（D）。

A、4℃B、常温C、16℃D、-20℃

19、PCR的基本反应过程包括（A）

A、变性、退火、延伸B、变性、延伸C、变性、退火

20、在实际工作中，基因扩增实验室污染类型包括（　D　　）

A、扩增产物的污染B、天然基因组DNA的污染C、试剂污染和标本间交叉污染

D、A、B、C都可能

21、PCR技术于哪一年发明（A）

A、1983B、1971C、1987D、1993

22、TaqDNA聚合酶酶促反应最快最适温度为（C）

A、37℃B、50-55℃C、70-75℃D、80-85℃

23、以下哪种物质在PCR反应中不需要（D）

A、TaqDNA聚合酶B、dNTPsC、镁离子D、RNA酶

24、PCR检测中，经过n个循环的扩增，拷贝数将增加（C）

A、nB、2nC、2nD、n2

25、PCR基因扩增仪最关键的部分是（A）

A、温度控制系统B、荧光检测系统C、软件系统D、热盖

26、以下哪项不是临床PCR实验室设计的一般原则（A）

A、各区合并B、注意风向C、因地制宜D、方便工作

27、PCR实验室一般包括（D）

A、试剂准备区B、标本制备区C、扩增区和产物分析区D、A、B、C都含

28、PCR技术不仅为遗传病的诊断带来了便利，而且改进了检测细菌和病毒的方法。

若要检测一个人是否感染了艾滋病病毒，你认为可以用PCR扩增血液中的（D）。

A、白细胞DNAB、病毒蛋白质C、血浆抗体D、病毒核酸

29、如果反应体系中加入模板DNA分子100个，则经过30个循环后，DNA分子的数量将达到（D）个。

A、100×30B、100×30×2C、100×302D、100×230

30、PCR扩增产物的分析方法主要有（D）

A、凝胶电泳分析法B、点杂交法C、荧光探针定量PCR法D、A、B、C都是

二、判断题（共20题，每题2分）

1、PCR引物设计的目的是在扩增特异性和扩增效率间间取得平衡。

（√）

2、在PCR反应中，dATP在DNA扩增中可以提供能量，同时作为DNA合成的原料。

（√）

3、DNA扩增过程未加解旋酶，可以通过先适当加温的方法破坏氢键，使模板DNA解旋。

（√）

4、PCR反应中，复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成。

（√）

5、PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高。

（√）

6、PCR技术可用于基因诊断，判断亲缘关系等。

（√）

7、PCR技术需在体内进行。

（×）

8、PCR反应体系中的缓冲液相当于细胞中的体液。

（√）

9、核酸的复制是由5＇——→3＇方向进行的。

（√）

10、配对的碱基总是A与T和G与C。

（√）

11、HBsAg转阴性后一段时间才出现可检测的HBsAb，此段间隔期称之为“窗口期”。

（√）

12、市面上多数试剂用淬灭基团Q基团和报告基团R基团来标记荧光定量PCR的探针。

（√）

13、PCR反应体系中Mg2+的作用是促进TaqDNA聚合酶活性。

（√）

14、若标本中含有蛋白变性剂（如甲醛），PH、离子强度、Mg2+等有

较大改变都会影响Taq酶活性。

（√）

15、每个子代DNA分子中均保留一条亲代DNA链和一条新合成的DNA链，这种复制方式称之为半保留复制。

（√）

16、发生溶血的标本对PCR结果没影响。

（×）

17、“平台效应”是描述PCR后期循环产物对数累积趋于饱和。

（√）

18、逆转录聚合酶链式反应（reversetranscription-PCR，RT-PCR）就是在应用PCR方法检测RNA病毒时，以RNA为模板，在逆转录酶的作用下形成cDNA链，然后以cDNA为模板进行正常的PCR循环扩增。

（√）

19、在定量PCR中，72℃这一步对荧光探针的结合有影响，故去除，实际上55℃仍可充分延伸，完成扩增复制。

（√）

20、PCR可应用于遗传病、肿瘤及病原体检测三大方面（√）

三、简答（共两题，每题10分）

1、PCR技术

答：

PCR技术是用一对寡聚核苷酸作为引物（要点1：

2分），通过高温变性、低温退火、中温延伸（要点2：

5分）这一周期的多次循环，使特异的DNA片段数量指数倍数增加（要点3：

3分）。

2、简述定量PCR检测操作的全过程。

答：

标本的采集，保存（2分）——→样品前处理（2分）——→待样品充分裂解后点样上机反应（2分）——→反应结束后观察结果（2分）——→发报告（2分）

历年考试高频题目

一.填空（每空0.5分，共15分）

1.为加强医疗机构临床基因扩增实验室规范化管理，卫生部于2010年发布《医疗机构临床基因扩增实验室管理办法》，北京市卫生局为做好实验室备案工作，于2012年发布了《北京市医疗机构临床基因扩增检验实验室技术审核暂行规定》。

（2019）

2.北京市卫生局及各区县卫生局负责所辖行政区域内地方医疗机构临床基因扩增检验实验室的备案和监督管理工作。

其中备案的技术审核工作流程主要包括：

申报、资料审核、现场验收、整改、通知实验室资料审核结果。

医疗机构的医学检验科应当设有临床细胞分子遗传学专业诊疗科目。

备案的临床基因扩增检验实验室参加医疗机构的年度校验。

（2019）

3.临床基因扩增检测的分析中质量保证关键内容包括：

室内质控和室间质评。

其中前者监测和控制的是实验室测定的重复性，而后者则通过对不同的实验室测定结果的比对而评价实验室测定的准确度。

（2019）

4.DNA双螺旋结构的特点是：

螺旋中的两条链为反向平行，其中一条链的方向为5’-3’，另一条链的方向为3’-5’。

（2019）

5.核酸包括两种类型：

脱氧核糖核酸和核糖核酸，二者的主要区别为：

前者由ATCG四种碱基组成，而后者由AUCG四种碱基组成。

（2019）

6.根据遗传中心法则，遗传信息的流动方向为DNA⇔RNA⇒蛋白质。

（2019）

7.普通临床基因扩增检验实验室一般包括下面四个分区：

试剂储存和准备区、

标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。

（2019）

8.提纯的核酸样品可根据OD260波长的光吸收值算出其含量，通过计算260/280的比值计算出其纯度。

（2019）

9.临床基因扩增实验室检测用的试剂应当经国家药监局批准。

（2019）

10.cfDNA的和中文名称是细胞游离DNA，ctDNA的中文名称是循环肿瘤DNA。

（2019）

11.在PCR前，为保护操作者和样本，手工处理样本应该在样本制备区的生物安全柜中进行，并使用带滤芯的移液吸头进行样本操作。

（2020）

12.医疗废物垃圾袋结扎采用“鹅口颈”套扎结扎形式。

（2020）

13.锐器盒容积达到总体积的3/4时需要更换。

（2020）

14.核酸检测中，全血样本采集一般使用EDTA或枸橼酸盐抗凝，不使用肝素抗凝。

（2020）

15.荧光定量PCR使用的Taqman探针两端标记有报告荧光R5’基团和荧光粹灭Q3’基团。

（2020）

16.新冠病毒核酸检测应该在生物安全Ⅱ级实验室开展，同时采用生物安全Ⅲ级实验室的个人防护。

（2020）

17.PCR的基本反应过程包括变性、退火、延伸。

（2020）

18.DNA/RNA的紫外吸收在260nm附近有最大吸收值。

（2020）

19.核酸的基本结构单位是：

核苷酸，其组成包括碱基、核糖或脱氧核糖和磷酸。

（2020）

二．是非题（在你认为正确的句子后面打√，错误的后面打×，每题1分，共15分）

1.DNA双链中，碱基A-T之间以三个氢键相连，G-C以两个氢键相连。

（×）（2019）

2.与细胞学初筛相比较，HPV核酸检测初筛具有更高的敏感性。

（√）（2019）

3.使用有防“污染”作用的尿苷糖基酶（UNG）的PCR试剂盒，该酶可以降解含有UTP的扩增产物。

（√）（2019）

4.DNA变性是指在物理或化学因素的作用下，导致两条DNA链之间的氢键断裂，而核酸分子中的所有共价键同时也受影响。

（×）（2019）

5.自制室内质控品时，应对质控品的均匀性和稳定性进行评价。

（√）（2019）

6.定量PCR与定性PCR测定原理的最主要的区别点在于前者的测定点在PCR的指数扩增期，而后者多为扩增平台期。

（×）（2019）

7.处理PCR标本时，在没有生物安全柜的情况下，可用超净台操作。

（×）（2019）

8.临床检验中的系统误差通常表现为质控物测定结果的SD增大。

（×）（2019）

9.扩增管没有盖好会造成PCR反应液热蒸发，直接影响结果，但不会成为一个污染源。

（×）（2019）

10.核酸是极性化合物，溶于水，不溶于乙醇等有机溶剂。

（√）（2019）

11.核酸的解链温度（Tm）与G+C含量有关，G+C含量愈大，Tm愈低。

（×）（2019）

12.无法参加室间质量评价计划时，可以用室内质控替代。

（×）（2019）

13.一般进行HCV-RNA检测时宜采用EDTA抗凝血，不宜采用肝素抗凝。

（√）（2019）

14.以次氯酸为主要成分的清洁剂在配制后可以长期使用。

（×）（2019）

15.质量管理体系的要素包括质量方针、质量目标和质量指标。

（√）（2019）

16.核酸的复制是由3’-5’方向进行。

5---3（×）（2020）

17.核酸的解链温度（Tm）与G+C含量有关，G+C含量愈大，Tm愈高。

（√）（2020）

18.标本差错率和实验室布局的合理性均为实验室质量体系监控指标。

（√）（2020）

19.实验室质量体系文件无统一格式，无标准文件，应切合实际，怎么做怎么写。

（×）（2020）有标准文件

20.进行新冠病毒核酸检测时，采集鼻咽拭子标本可使用棉签。

（×）（2020）植绒拭子

21.在常规应用前，可由制造商对实验室未加修改而使用的已确认的检验程序进行独立验证。

（×）（2020）

22.DNA在中性或弱碱性溶液中易水解，但在酸性溶液中较稳定，RNA在碱性溶液中稳定。

（×）（2020）

答案：

在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定，DNA在碱中变性，但不水解，RNA水解。

23.DNA变性的本质是双链间氢键的断裂。

（√）（2020）

24.DNA微溶于水，可溶于有机溶剂。

（×）（2020）溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂

三．单选题（请将所选答案填写在题后的括号中，每题1分，共25分）

1.PCR技术的发明人是：

（C）（2019）

A.WatsonJ.D.;B.CrickF.H.C.;

C.KaryMullis;D.RosalindFranklin.

2.二级生物安全柜能对以下哪些进行防护：

（D）（2019）

A.人员B.实验品

C.环境D.以上都是

3.在生物界尚无充足证据的信息流动过程的是（A）（2019）

A．蛋白质→RNAB．RNA→DNA

C．DNA→DNAD．DNA→RNA

4.核酸提取纯化中，RNase潜在污染源是：

（D）（2019）

A.实验室环境；B.实验用品如吸头、离心管等；

C.实验人员的手；D.以上都是

5.生物安全水平的级别共分为几个等级（D）（2019）

A．1个B．2个C．3个D．4个

6.有关于荧光定量PCR方法，下述哪一条是错误的？

（A）（2019）

A.在扩增的指数期定量；B.采用内标和外标方法均可；

C.可采用Taqman探针；D.在扩增的终点测定定量

7.在选择开展临床检验项目时，应首先考虑：

（B）（2019）

A.临床有效性和分析有效性；B.检测精密度和检测准确度；

C.临床有效性和检测精密度；D.分析有效性和检测准确度

8以下哪项有利于DNA的保存：

（A）（2019）

A.加入EDTA螯合钙离子，去除核酸酶的活性；B.加入少量DNase；

C.溶于pH3.0溶液；D.加入少量RNase

9.实验室的清洁工作应在以下情况下进行：

（A）（2019）

A.每次实验后B.文件规定清洁时间

C.实验室发生污染时D.以上都是

10.荧光定量PCR检测过程中，基线漂移的可能原因有：

（D）（2019）

A.蒸发；B.探针水解C.相邻荧光通道干扰D.以上都是

11.将基因扩增检验实验室的产物分析区设置为负压状态，目的是：

（B）（2019）

A.防止有生物传染危险的样本逸出；B.防止扩增产物从该区逸出；

C.防止该区灰尘的逸出；D.为了生物安全的目的

12.常用RNase抑制剂是（B）（2019）

A.乙醇；B.DEPC；

C.异丙醇;D.精胺

13.真核生物染色体DNA主要以下列哪种形式存在（D）（2019）

A.环状单链分子B.线性单链分子

C.环状双链分子D.线性双链分子

14.TaqMan探针采用的是（A）（2019）

A．荧光标记的探针B．生物素标记的探针

C．同位素标记的探针D．SYBRGreen荧光染料

15.最大量程为200ul的微量移液器，显示读数为020，实际的吸液容量值为：

（C）（2019）

A．0.2ulB．2ulC．20ulD．200ul

16.有关核小体的错误叙述是：

（D）（2019）

A．核小体是染色体的基本单位B．DNA和组蛋白共同构成核小体

C．DNA和组蛋白H1构成核小体连接区D．RNA和组蛋白共同构成核小体

17.基因突变的实质是：

（A）（2019）

A．染色体上的DNA序列变化了B．染色体上的DNA变成了RNA

C．染色体上的DNA变成了蛋白质D．染色体上的DNA高级结构发生了局部改变

18.如果一个PCR反应体系中加入模板200个，经过30个循环后扩增产物的数量将达到

（C）（2019）

A.200×30×2B.200×30C.200×230D.200×302

19.Sanger测序体系与PCR反应体系的主要区别是前者含有：

（B）（2019）

A.模板B.ddNTP

C.DNA聚合酶D.引物

Sanger测序体系与PCR相同点：

都是基于碱基互补配对原则，在DNA聚合酶作用下的聚合反应。

不同点：

1反应过成不同：

PCR是引物对扩增，测序则是单引物扩增。

2反应成分不同：

PCR是需要4种脱氧碱基，测序则有ddNTP

20.分子杂交试验不能用于：

（C）（2019）

A.单链DNA分子之间的杂交B.单链DNA与RNA分子之间的杂交

C.抗原与抗体分子之间的结合D.双链DNA与RNA分子之间的杂交

21.在Sanger基因测序技术中所使用的酶是:

（A）（2019）

A.DNA聚合酶B.RNA聚合酶

C.DNA连接酶D.DNA拓扑酶

22.双链DNA中的碱基对有：

（D）（2019）

A．A-UB．G-TC．C-AD．T-A

23.下列四个DNA片段中含有回文结构的是（D）（2019）

A.GAAGAAB.TGGAAA

C.GAAAAGD.GAATTC

24.核酸分子中储存遗传信息的关键部分是：

（D）（2019）

A.mRNAB.tRNA

C.rRNAD.DNA

25.核酸检测探针的标志性特征是：

（A）（2019）

A．一小段已知序列的单链核酸；B.一小段未知序列的单链核酸；

C.一小段已知序列的双链核酸；D.有同位素或非同位素标记物。

作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件：

①应是单链，若为双链，必须先行变性处理。

②应带有容易被检测的标记。

它可以包括整个基因，也可以仅仅是基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。

26.核酸分离纯化的目的是：

（D）（2020）

A.除去PCR抑制物B.增加靶核酸浓度，使之达到PCR测定范围

C.增加样本均一性，保证测定精密度和重复性D.以上都是

27.mRNA约占总RNA的百分数为：

（A）（2020）

A.5％B.10％

C.15％D.20％

28.分子检测对标本采集容器的要求是：

（E）（2020）

A.密闭B.一次性C.无DNase和RNaseD.无菌E.以上均是

29.关于基因扩增检测实验室分区，以下说法不正确的是：

（D）（2020）

A.外周血游离DNA标本制备可与细胞/组织标本制备区共用；B.须注意实验室空气流向；C.实验室应有充分的通风换气；D.缓冲间不是必需的；E.传递窗不是必需的

30.“无基因”或“无核酸”概念是指：

（E）（2020）

A.在基因扩增检测操作时，要注意防止因为扩增产物污染所致检测假阳性；

B.在基因扩增检测操作时，要注意防止因为标本间交叉污染所致检测假阳性；

C.每次检测后实验室内的充分通风及清洁；

D.实验室各区物品的专用；

E.以上均是

31.商品试剂的性能验证的合格判断标准是：

（D）（2020）

A.卫生行业标准；B.国际标准；

C.满足临床疾病的诊疗要求；D.试剂盒说明书上所宣称的检测性能

E.以上均是

32.L-J指控图的失控规则制定的依据是：

（B）（2020）

A.各实验室根据自身的情况具体确定；B.统计学的“小概率事件”原理；

C.超过均值±3SD；D.超过均值±2SD；

E.阴性质控品检测为阳性

33.下列哪一种病毒遗传物质为RNA（D）（2020）

A.乙肝病毒B.人乳头瘤病毒C.巨细胞病毒D.新型冠状病毒COVID-19

34.以下在PCR反应中，对扩增产物的特异性起决定性作用的是：

（B）（2020）

A.模板B.引物C.dNTPD.镁离子

35.有关于荧光定量PCR方法，下述哪一条是错误的？

（A）（2020）

A.在指数扩增初期定量；B.在扩增的终点定量；

C.可采用Taqman探针；D.采用内标和外标方法均可

36.在选择开展临床检验项目时，应首先考虑：

（B）（2020）

A.临床预期用途；B.检测精密度和检测准确度；

C.检测精密度；D.检测准确度

37.一个PCR反应体系中起始模板量为500，经过30个循环后扩增产物的数量将达到

（C）（2020）

A.500×30×2B.5002×30C.500×230D.500×302

38.对COVID-19疑似患者采样，需要（C）级生物安全个人防护装备（2020）

A.ⅠB.ⅡC.ⅢD.Ⅳ

39.手卫生分为（D）步（2020）

A.4B.5C.6D.7

40.除（A）外均可有效灭活新型冠状病毒（2020）

A.氯已定B.56℃30分钟C.75%乙醇D.含氯消毒剂

41.在基因扩增检测中，全血或骨髓标本不能用肝素抗凝，原因是（D）（2020）

A.肝素是TaqDNA聚合酶活性的强抑制剂B.肝素对Mg++有络合作用

C.经典的核酸提取方法很难去除肝素D.以上A和C

42.下列哪种情况需对PCR检测项目进行方法学验证实验：

（D）（2020）

A.开展新项目前B.更换试剂品牌C.更换仪器D.以上全是

43.在临床基因扩增检验中，弱阳性室内质控品发生失控，常见的原因有下述各项，除（B）外（2020）

A.核酸提取中的丢失、有机溶剂的去除不彻底、标本中扩增抑制物的残留等

B.扩增仪孔间温度的不一致性C.扩增产物的污染D.Taq酶和/或反转录酶的失活

44.PCR扩增检测采用内标，可以识别扩增检测的（C）（2020）

A.假阴性B.假阳性C.假阴性、假阳性都可以预防D.假阴性、假阳性都不能预防

45.在一个DNA分子中，如G所占摩尔比为17.2%，则A所占摩尔比为（B）（2020）

A.82.8%B.32.8%C.17.2%D.65.6%

四.简答题（每题5分，共25分）

1.简述什么情况下应进行性能验证？

（5分）（2019）

答：

（1）在常规应用前，应由实验室对未加修改而使用的已确认的检验程序进行独立验证。

（2）任何严重影响检测系统分析性能的情况发生后，如仪器搬迁、设施、环境严重失控等。

（3）常规使用期间，定期做。

（4）启用新的检测系统：

更换试剂、仪器、校准品溯源性改变

2.临床PCR实验室质量管理体系文件应包含哪些内容？

（5分）（2019）

答：

（1《质量手册》：

质量方针和质量目标的声明。

（2）准则要求的程序和记录。

（3）实验室规定的文件和记录：

为确保有效策划、运行并控制其过程。

（4）适用的法规、标准及其它规范文件。

3.请简述完整的员工培训计划应包含哪些内容。

（5分）（2019）

答：

（1）培训所涉及的范围：

仪器设备的使用、维护和校准。

试剂方法原理。

质量管理体系。

相关法律法规，相关领域的新技术、新理念和新进展。

实验操作技能等。

（2）如何培训：