细胞培养技术复习题.docx
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细胞培养技术复习题
细胞培养技术复习题
名词解释：
1．二倍体细胞株：
具有二倍体染色体数的细胞株。
2．世代：
指细胞经过一次分裂后完成后至下次分裂的过程。
3．细胞富集：
当细胞分离纯化并不完全彻底，培养物中能达到以某种细胞为主的程度。
4．组织工程：
组织工程是应用生命科学和工程学的原则及方法，在正确认识哺乳动物的正 常及病理两种状态下的组织结构与功能关系的基础上，研究、开发用于修复、维护、促进人体各种组织或器官损伤后的功能和形态的生物替代物的一门新兴学科。
5．Densityinhibition:
密度抑制，于细胞密度过大，培养液营养耗尽、代谢产物过多和 生存空间消失所引起细胞增殖的抑制现象。
6．消化液：
在原代细胞培养和细胞传代时，都要用消化液，最常用的是胰蛋白酶和二乙烯 四乙酸二钠，其次是一些特殊的组织细胞培养用的各型胶原酶。
在原代细胞培养中，使用消化液从组织块中分离出单个的细胞；在进行细胞传代时，消化液使细胞脱离生长表面并离散成单个细胞。
7．清洁液：
是一种不含磨蚀性物质，能迅速清除物品上污垢,分解脏污，令物品透明 亮如的清洁用品。
8．去分化：
指已分化成熟的细胞和组织倒退分化，返回原始幼稚的状态。
但去分化并不意 味着完全返回胚胎时期的原始细胞状态，可重新表现出分化特点。
9．接触抑制：
指细胞相互接触后失去运动的现象。
10．细胞融合：
细胞融合是指两个或更多个相同或不同细胞通过膜融合形成单个细胞的 过程。
可在自发或人工诱导下发生。
11．转化细胞系：
通过某个转化过程形成的，常于染色体断裂变成异倍体，失 去正常细胞特点，而获得无限增殖能力。
转化细胞系具有长期培养，倍增时间短，对培养条件和生长因子等要求较低的特点，适于大规模工业化生产。
12．Stemcell:
干细胞，是指一类具有自我更新能力和分化潜能的细胞。
13．杂交瘤技术：
又称单克隆抗体制备技术。
是指建立杂交瘤细胞系的技术，通常指B 淋巴细胞杂交瘤技术，即将骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，以建立可以分泌单一性抗体的杂交瘤细胞系的技术。
问答：
1．简述体外培养细胞的主要生物学特点。
答：
体外培养细胞的生物学特点：
去分化：
体外培养,分化特征逐渐减弱，使细胞结构与功能上的“可塑性”增大贴壁铺展：
粘附于固相表面是锚定依赖性细胞生命活动的基本要求。
细胞被接种到培养器皿内以后首先要发生粘附，是细胞培养以后能否成功的第一步.提供什么样的生长表面是细胞能否成功粘附的主要因素。
铺展是进行生命活动的一种基本的生长特点或生长行为铺展状况制约细胞的分裂增殖活动过程，细胞先圆形变为圆饼形（放射状铺展细胞）逐渐铺开伸展成为扁平的极性细胞。
极性细胞就是各种有机体细胞是在体外的特征性细胞形态接触抑制和密度依赖性生长抑制：
细胞生长有密度抑制，血清可降低密度抑制，转化细胞可降低密度抑制2．简述成体干细胞的定义与特点。
答：
成体干细胞是指存在于一种已经分化组织中的未分化细胞，这种细胞能够自我更新并且能够特化形成组成该类型组织的细胞。
成体干细胞存在于机体的各种组织器官中。
成年个体组织中的成体干细胞在正常情况下大多处于休眠状态，在病理状态或在外因诱导下可以表现出不同程度的再生和更新能力。
包括造血干细胞、骨髓间质干细胞及神经干细胞。
成体干细胞有以下几个特点：
成体干细胞体积小，细胞器稀少，RNA含量较低，在增殖过程中处于相对静止状态， 在组织结构中位置相对固定。
成体干细胞数量很少，其基本功能是参与组织更新，创伤修复及维持机体内环境稳 定。
成体干细胞常处于一个有干细胞细胞基质、对干细胞的增殖和分化起调控作用的各 种信号分子的特定微环境或称生物位中，取决于所在的微环境和自身的功能状态。
成干细胞没有确定的来源。
3．试比较天然和合成培养基的各自优缺点。
答：
1、天然培养基：
最初的体外细胞培养，均采用天然培养基。
其主要取自动物体液或从 动物组织中分离提取。
天然培养基的种类很多，包括生物性体液、组织浸液、水解乳蛋白等。
优点：
营养丰富，培养效果良好； 缺点：
成分复杂，来源受限，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析，易发生支原体污染。
2、合成培养基：
研究者模拟、借鉴细胞在体内生存生长所需物质的种类和数量，设计出类似体内环境而适宜细胞在体外生存的各种培养基。
优点：
标准化生产，组成成分及含量明确便于精密地测定培养的细胞与培养液内物质变化的情况。
便于控制和调整实验设计并使培养条件标准化。
合成培养液中没有不透明物质，使得培养的细胞形态清晰透明，便于观察记 录。
缺点：
缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。
4．简述细胞培养污染的种类及污染的预防措施。
答：
细胞污染可分为以下三类：
物理性、化学性和生物性，物理污染：
主要指温度、放射线、振动和辐射等。
化学污染：
主要指血清、培养液及试剂、水、培养用器皿和孵箱等。
生物污染：
主要指细菌、霉菌和酵母、支原体、病毒、细胞系交叉污染。
预防的方法：
1。
从物品、用品消毒灭菌着手2。
从操作者做起：
操作者责任心要强，要细心稳重，操作技术要熟练。
进无菌室前要用肥皂洗手或用5%新洁尔灭浸泡5分钟，按规定穿隔离衣。
操作者动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，要常更换吸管，切勿一根吸管做到底。
一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。
实验完毕及时收拾，保持是钥匙清洁整齐，最后用消毒水浸泡的纱布擦台面。
3。
早期留有充足的冻存储备，可以复苏早期冻存细胞使用。
5．试比较治疗性克隆与体细胞重新编程。
答：
项目 治疗性克隆 体细胞重新编程 干细胞名称 ES细胞 iPS细胞细胞来源 供者卵母细胞和患者体细胞 患者体细胞 技术路径 将体细胞核移植到去核卵母细胞 利用体外基因转染技术，将转录导入 中，形成克隆囊胚后，分离并建 到体细胞核，筛选并建立iPS细胞系 立ES细胞系 优势 ES细胞技术有较丰富的经验积累，取材容易，操作方案相对简单，技 无外源性基因污染 术体系较稳定 主要问题 卵母细胞去核技术待改进；克隆胚 细胞核重编程的具体过程和导入的 胎形成效率过低；建立hES细胞系 转录因子的作用机制不明；制备iPS的效率低，且不稳定；hES细胞不细胞的效率低；iPS细胞体外诱导 分化状态和多潜能性的条件待优化；定向分化的研究经验较少；逆转录诱导hES细胞体外定向分化成熟的 病毒和慢病毒载体导致肿瘤发生的方案尚不完善；移植治疗存在成瘤性潜在风险；转染基因可能给机体带风险 来不利影响 伦理问题 存在激烈的伦理学争议 不存在伦理学争议细胞替代治疗理论上是最有希望的途径 具有潜在的应用前景 其他可能用途制备疾病的新模型以研究发病机制、药物筛选和鉴定药物治疗反应等6．对新建细胞系或株的细胞确认试验可采用哪些方法？
列举一种或以上方法并说明其原 理。
答：
新建细胞系或株、细胞库和生产终末细胞应进行鉴别试验，以确认为本细胞，无其他细胞的交叉污染。
细胞鉴别试验的方法有多种，包括细胞形态、生物化学法、免疫学检测、细胞遗传学检测、遗传标志检测等。
7．简述杂交瘤技术产生的三个技术关键。
答：
.B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的特性：
B淋巴细胞：
接受抗原刺激后，能分泌针对该抗原的特异性抗体，在体液免疫中具有重要功能。
B淋巴细胞本身是一种终末分化细胞，通常不再进行细胞分裂，存活一段时间后便会死亡——短命细胞 骨髓瘤细胞：
恶性增殖的转化细胞，只要营养条件适合可永远分裂和存活——长命细胞。
经筛选与驯化，现已建立多种骨髓瘤细胞株——没有抗体分泌物。
.细胞融合技术：
两个不同基因型的细胞可形成一个杂种细胞。
基本过程包括细胞融合形成异核体、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的细胞称为杂种细胞或杂交细胞。
常用方法有生物方法：
如仙台病毒化学方法：
如聚乙二醇物理方法：
如电融合。
.杂交瘤细胞的筛选：
人工诱导细胞融合是一个随机的过程，可能产生多种类型的细胞，筛选的目的是获得优良的杂种细胞。
应根据其细胞特性来选择适当的筛选方法。
B淋巴细胞：
HGPRT+，TK+ 存活但短命骨髓瘤细胞：
HGPRTˉ或TKˉ 死亡杂交瘤细胞：
HGPRT+，TK+ 存活 此可见，HAT选择培养基及补救合成途径酶缺乏的突变细胞株的建立，是细胞融合后选择出杂交细胞株的关键因素。
8．简述体外培养癌细胞的三个显著基本特征。
答：
肿瘤细胞与体内正常细胞相比，不论在体内或在体外，在形态、生长增殖、遗传性状等方面都有显著的不同。
体外培养肿瘤细胞的三个显著基本特征：
永生性、不受控增殖性、致瘤性。
永生性也称不死性。
在体外培养中表现为细胞可无限传代而不凋亡。
体外培养中的肿瘤细胞系都表现有这种性状。
永生性和恶性是两种性状，受不同基因调控。
从一些具有永生性而无恶性的细胞系，如NIH3T3、Rat-1、10T1/2等细胞可以证明。
生长增殖：
失去接触抑制，细胞能相互重叠向三维空间发展，形成堆积物。
失去锚着依赖性，可在琼脂、甲基纤维素等支撑物上生长。
低血清要求，不依赖生长因子，因其可自分泌产生促增殖因子。
癌细胞或培养中发生恶性转化后的单个细胞培养时，形成集落的能力比正常细胞强。
致瘤性。
细胞接种同种动物或裸鼠后的致瘤性是客观反映细胞恶性程度的指标
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