TRIZOL LS 试剂使用中文说明书.docx
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TRIZOLLS试剂使用中文说明书
TRIZOLLS试剂使用中文说明书
TRIzol?
?
LS?
试试（ambion）;中文试明试,
试试格室试存号温
10296?
010?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
100ml10296?
028200ml
试品描述
TRIzol?
LS试试适用于液试品～如人、试植物、酵母、试菌或者病毒源的液试品体来体～提取高试量的试RNA;DNA和蛋白试也可以,全试程只需1小试。
TRIzol?
LS试试里含有、硫试酸和其成分～由于在试试品试程中能有效地抑制酚异胍它匀很RNase活性～所以TRIzol?
LS试试能试持RNA完整性。
TRIzol?
LS试试允试同试试理大量的试品。
TRIzol?
LS试试能一试品里有序分提取从个离RNA、DNA和蛋白试。
TRIzol?
LS试试均试化试品后～加入试～能看试分试试象～上试是透明的含仿RNA的水相～中试试～下试是试色的有机相;含有DNA和蛋白试,。
水相RNA用丙醇能淀分～中试试或异沉离
者下试中的DNA用乙醇淀分～丙醇淀能使蛋白试沉离异沉从酚?
醇相的上液中清沉来沉淀出。
淀出的RNA、DNA和蛋白试洗试试～重试后用于下游。
脱
分的离RNA可以用于RT-PCR,NorthernBlotanalysis,DotBlothybridization,poly（A）+
selection,invitrotranslation,RNaseprotectionassay,andmolecularcloning
分的离DNA可以用于PCR,andRestrictionEnzymedigestion,andSouthernBlots.
分的蛋白试可以用于离WesternBlots,recoveryofsomeenzymaticactivity,andsome
immunoprecipitation.
注意,TRIzol?
LS试试适用于液试品;如～血液和病毒制品,。
体TRIzol?
LS试试与TRIzol试试试在试成分的含量上不同～它TRIzol?
LS试试的试度更高～因此相试于同试个品试～TRIzol?
LS试试需要量更少。
不要未稀试的将TRIzolLS试试用于固试品体。
试理固试品试～体TRIzol?
LS试试有没TRIzol试试效果好～收率要低些。
警告
TRIzol?
LS试试含有的成分具有毒、腐试性和刺激性～如果试理不有危害健康。
慎会试在通试里操作～穿好试试服、戴好手套和安全眼试。
避免直接接橱并触TRIzol?
LS试试～试致皮试、眼睛或者呼吸道等暴露部位的化灼试。
如果万一接了皮试或者会学触
眼睛～试立用大量水洗即冲15min～必要试去院试理。
如果吸入了～立刻到医气体
通试地方呼吸新试空～必要试去院试理。
气医
内容和试存
TRIzol?
LS试试有100ml和200ml两温运试试格的～室试和试存。
妥善保管～1年性试内都试定。
很
使用目的
试用于究～不能用于人或试物的试或治试。
研断
需要材料
分离RNA、DNA和蛋白试试需要下列材料～但是我试未提供
分离RNA试～需要,试～丙醇～仿异75%乙醇;DEPC水试理试,～无RNase水或者0.5%SDS～能到达12,000*g的高速心机～聚丙试微量心管～水浴槽;离离55?
60?
。
分离DNA试～需要,试～仿100%乙醇～75%乙醇～0.1M试酸试;檬10%乙醇,～8mM?
NaOH～能到达12,000*g的高速心机～聚丙试微量心管。
离离
分蛋白试试～需要,试～丙醇～离仿异100%乙醇～0.3M试酸;胍95%乙醇,～1%SDS～能到达12,000*g的高速心机～聚丙试微量心管。
离离
试品准试
试品均试化
1.确温定试品试型～在室下如下表操作。
TRIzol?
LS试试试品的试比试与体3:
1～一定要按指定的量加入TRIzol?
LS试试～否试提取RNA会有DNA试染。
6注意,试品少量;当<10试胞或者<10mg试试,或者试品试体<0.25mL～试方便提取RNA～需用无RNase水试整试品试到体0.25ml。
试品试型试生物液试～操作步试,体1.每0.25ml试品加入0.75mlTRIzol?
LS试试～2.移液器上下吹次～使试品均。
注意,试染物试含量高的生物液;如～全血,试试匀几匀体
先用无RNase水按1:
1稀试。
试品试型试试试试～操作步试,1.每50-100mg试试试品或者0.25ml试试试液加入0.75mlTRIzolLS试试～2.高速试拌器混试品。
注意,采集试品后要立试理和冷试试试试品～不能试理未稀试的固试品。
匀即体2试品试型试试试试壁试胞试～操作步试,1.吸出培试皿中的培试液～2.每10cm表面试的培试皿加入0.3-0.4mlTRIzolLS试试,直接加到培试皿里试胞上～3.移液器上下吹次～在培试皿里直接裂解试匀几
胞。
注意,不要在培试皿中加水混～粘附在皿上的留培试液足试了。
匀残
试品试型试试浮试胞试～操作步试,1.离心去除培试液试得试胞～2.每0.25ml试品;自试植物或者酵母来67试胞5-10*10～或者试菌试胞1*10,加入0.75mlTRIzolLS试试～注意,加入TRIzolLS试试之前切忌洗试试胞～避免增加mRNA降解机率～3.移液器上下吹次～裂解试胞～试于酵母或者匀几
试菌试胞～可能试需要高速试拌器充分裂解。
来
2.;可试,试品里脂肪、蛋白、多糖或者胞外物试;如～肌肉、脂肪试试或者试当茎
植物等材料,～需要再加分步试～移除试品里试溶物试。
注意,如果试需要回个离你
收试品里DNA～就不能做此步。
具步试,体1.混试品;如前面步试匀1所述,后～4?
下～12,000*g离心试品10min～注意,心后淀物试包含离沉ECM、多糖和高分子量的DNA～RNA在上清清液里～若试品富含脂肪～在上液上面试有脂肪试～2.移除覆盖的脂肪试～3.将澄清清离的上液移到新的心管中。
3.试行相分离～或者试存已混的试品。
此试品能在室匀温几个放置小试～或者在?
60到?
70?
至少一个月。
相分离
1.室温静匀匀置已混试品;试混试品步试,5min。
2.每0.75mlTRIzol?
LS试试加入0.2ml试。
盖试心管的盖子。
仿离
3.使试地手试心管离15s。
4.室温静置2?
15min。
5.4?
下～12,000*g离心试品15min。
注意,混合物被分试3试～上试是澄的水相～中试试～下试是试色的清酚?
试相～仿
只有RNA被排除在水相里。
上试水相试试体占TRIzol?
LS试试最初体试的~70%。
6.试斜离心管试45?
～小心地用移液器吸走水相～避免吸到中试试或者有机试。
7.将离水相移到新的心管～然后试行RNA分步试离。
8.如果需要分离DNA和蛋白试～试保持中试试和酚?
试相有机试。
试试仿DNA分步离
试和蛋白试分步试离。
有机相可在4?
保存试夜。
RNA分步试离
当制试和试理RNA试～需要采取适当措施避免RNase试染。
RNA沉淀
61.;可试,淀当沉从少量试品;<10试胞或者<10mg试试,提取的RNA～需要
添加5?
10μg不含RNase的糖原作试水相的试。
注意,糖体原是RNA的试助
沉淀试～试度?
4mg/ml试不抑制会会第一试合成～也不抑制PCR。
2.每0.75mlTRIzol?
LS试试加入0.5ml100%异丙醇到水相。
3.室温静置10min。
4.4?
下～12,000*g离心10min。
注意,心前～离RNA通常看不试～心后～在心管离离状沉底部和试面可试试
淀物。
5.试行RNA洗试和重试
RNA洗试和重试
1.移走离清心管里上液～只留RNA沉淀。
2.每0.75mlTRIzol?
LS试试加入1ml?
75%乙醇洗试RNA沉匀淀。
试旋～混试品。
3.4?
下～7500*g离心5min～上液。
弃清
4.真气空或者空干燥RNA沉淀5?
10min～不要用空心真离干燥机干燥RNA
沉淀。
注意,不要试RNA沉淀干燥太试底～否试RNA沉会淀溶解度降低～使
A<1.6。
260/280
5.用无RNase水或者0.5%SDS;20?
50μL,重试RNA沉淀～移液器上下试试
吹溶液次几。
注意,如果要用于后的试随将反试中～就不要RNA溶解在0.5%SDS里。
6.在水浴槽55?
60?
孵育10?
15min。
7.试试下游操作或者试存在?
70?
。
DNA分步试离
从相分离步试中保存的中试试和酚?
试试提取仿DNA。
DNA沉淀
1.移走覆盖在中试试上的留水相试～试是残涉及到DNA提取试量的试试一步。
2.每0.75mlTRIzol?
LS试试加入0.3ml?
100%乙醇。
3.盖试心管～上下试离几匀倒次～混试品。
4.室温静置2?
3min。
5.4?
～2000*g离心5min～淀沉DNA。
6.移走酚?
试试～如果需要提取蛋白试～试保留在新的心管中。
试上液可在仿离清?
70?
下保存数月。
7.试DNA沉淀试行DNA洗试和重试。
DNA洗试和重试
1.每0.75mlTRIzol?
LS试试加入1ml试酸试檬/乙醇溶液;10%乙醇溶有0.1M试酸檬
试～PH8.5,。
2.室温静置30min～不定试试试地上下倒置混。
匀
注意,DNA能在试酸试檬/乙醇溶液里保存2h。
3.4?
～2000*g离心5min～上液。
弃清
4.再次洗试;重试步试1?
3,。
注意,当DNA沉淀试多;>200μg,试～重试洗试次。
两
5.每0.75mlTRIzol?
LS试试加入1.5?
2ml75%乙醇。
注意,DNA试品在75%乙醇4?
能保存数月。
6.室温静置10?
20min～不定试试试地上下倒置混。
匀
7.4?
～2000*g离心5min～上液。
弃清
8.真气空或者空干燥DNA沉淀5?
10min～不要用空心真离干燥机干燥RNA沉
淀。
79.以0.2–0.3μg/μL试度用8mMNaOH重试DNA～每50-70mg试试或者1*10试胞加
入8mMNaOH0.3-0.6mL。
注意,我试高度建试用和溶液重试温碱DNA～因试分的离DNA在水或者Tris试冲液中重试效果不好。
10.4?
～12,000*g离心10min～移走不溶物试。
11.将含DNA的上液试移到新的心管中～若需要～用清离HEPES试试PH～试行下游操作。
DNA能在4?
保存试夜～要想试期保存～试需用HEPES试试PH7?
8～添加1mM?
EDTA～保存在4?
或者?
20?
。
DNA和RNA试量试定
用RNA和DNA在260nm和280nm试的吸收试试定试度。
试期试量
下表列出了各试源材料提取来RNA;A>1.8,和DNA;A试1.6?
260/280260/2801.8,的试准试量
蛋白分步试离
从DNA沉淀步试后留下的来酚?
试试分蛋白试～仿离蛋白试淀沉或者蛋白透析。
蛋白试淀沉
1.每1mlTRIzol?
LS试试加入1.5ml异酚丙醇到?
试试。
仿
2.室温静置10min。
3.4?
～12,000*g离心10min～保留淀的蛋白～上液。
沉弃清
4.试蛋白淀试行沉蛋白洗试。
蛋白洗试
1.准试洗试液～,即0.3M试酸溶于胍95%乙醇。
2.每1mlTRIzol?
LS试试加入2ml洗试液～洗试蛋白淀。
沉
3.室温静置20min。
注意,蛋白试品可在0.3M试酸胍?
95%乙醇～4?
下保存一个月或者?
20?
至少保存一年。
4.4?
～7500*g离心5min～洗试液。
弃
5.重试步试2?
4～次。
两
6.洗试3次后～加入2ml100%乙醇～试旋。
7.室温静置20min。
8.4?
～7500*g离心5min～乙醇洗试液。
弃
9.空气沉干燥蛋白淀5?
10min～不要干燥太试底。
10.试行蛋白重试步试。
蛋白重试
1.加1%SDS200μL,用移液管上下吹打直到蛋白重试。
注意,试了试底溶液蛋白淀～可能需要蛋白淀在水浴槽沉将沉50?
孵育。
2.4?
～10,000*g离心10min～试不溶物试淀。
沉
3.将清离含有蛋白的上液试移到新的心管～试行下游操作或者保存在?
20?
。
蛋白透析
1.将酚?
试试溶液仿放试透析膜中。
注意,酚?
试试溶液能溶解仿某些透析膜;如～试试素试,。
操作前需要试试下。
2.在4?
下～用0.1%SDS溶液透析试品～需要更试3次0.1%SDS溶液～透析
16h后第一次更试～试4h后;透即析20h,第二次更试～试2h后;透即析
22h,第三次更试。
注意,需要0.1%SDS溶液再次溶液蛋白试品～低试度的SDS是不试的～若
需要～可以先蛋白淀溶解后再稀试将沉SDS。
3.4?
～10,000*g离心透析液10min～蛋白在上液中。
清
4.将清离上液试移到新的心管中～试行下游操作或者保存在?
20?
。
5.;可试,加入100μL?
1%SDS和100μL?
8M尿素～溶解蛋白淀。
沉蛋白试量试定
Bradford法试试蛋白试度;SDS试度必试小于0.1%,。
试试解与决
试试原因解决
RNA试量低～DNA,试品均化或者裂解不充,减将少原始材料的量。
试试切的
分更碎些～保能完全确沉浸在试量低或者蛋白试试量
TRIzol?
LS试试～到达最佳裂解,最试RNA、DNA或者蛋低
效果。
白试重新溶解不完全
反试用移液器吸移试品在并50?
50?
加试试品～增大溶解。
RNA降解～DNA,试品收集后有没及试试理,试品收集后必试及试试理或者冷试。
或者冷试。
RNA试品保存在?
60到?
降解或者蛋白降解
RNA、DNA或者蛋白70?
～DNA试品和蛋白试品保
分后有保存在离没确正存在?
20?
。
的度下。
温
RNA试染或DNA试,吸取水相试也吸到了中试,在相分后不要试试水相溶液离将
相或者有机相吸干试。
染
水相移除不试底,在淀沉DNA之前必试吸干试残
0.1M试酸试檬?
10%乙醇留的水相溶液。
溶液洗试DNA沉淀不充,确保0.1M试酸试檬?
10%乙醇溶
分液洗试DNA沉淀。
RNA的A试偏,试品均试化试～TRIzol?
LS,根据试品试型加入恰当量的260/280
低试试试用量不试体TRIzol?
LS试试。
有机相移除不干试,相分后不要离试试水相溶液吸将
干试。
DNA的A试偏DNA试品里有留酚残再用0.1M试酸试檬?
10%乙醇溶液260/280
低洗试DNA沉淀1次。
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