水稻肌醇加氧酶基因的表达分析及植物表达载体的构建解读.docx

水稻肌醇加氧酶基因的表达分析及植物表达载体的构建解读.docx

《水稻肌醇加氧酶基因的表达分析及植物表达载体的构建解读.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《水稻肌醇加氧酶基因的表达分析及植物表达载体的构建解读.docx（26页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。

水稻肌醇加氧酶基因的表达分析及植物表达载体的构建解读

《中国农业大学学报》2007年第12卷第4期摘要

第1234567891011121314151617181920篇

水稻肌醇加氧酶基因的表达分析及植物表达载体的构建

王海光张洪亮段俊枝李自超

（中国农业大学农业部作物基因组学与遗传改良重点开放实验室/作物杂种优势研究与

利用教育部重点实验室/北京市作物遗传改良重点实验室，北京100094）

摘要为研究水稻肌醇加氧酶基因在植物水分胁迫分子应答中的作用，采用RT-PCR技术克隆了水稻肌醇加氧酶基因的cDNA编码区,命名为OsMIOX。

该基因由927个碱基组成,编码308个氨基酸,与拟南芥肌醇加氧酶的氨基酸序列相比，同源性为78%。

将克隆的OsMIOX基因连接pCAMBIA1301载体,成功构建了35s启动子驱动的植物超表达载体。

实时定量PCR分析结果表明，水分胁迫下OsMIOX基因在旱稻IRAT109中上调表达，在旱稻（IRAT109和毫格劳）中的表达量显著高于水稻（越富和日本晴）。

这说明水稻和旱稻的水分胁迫分子反应机制的确存在差异，而这种差异很可能就是水、旱稻抗旱性不同的原因之一。

关键词基因表达；基因克隆；OsMIOX基因；水稻；水分胁迫；植物表达载体

Expressionanalysisofricemyoinositoloxygenaselikegeneand

developmentofitsplantexpressionvector

WangHaiguang，ZhangHongliang，DuanJunzhi，LiZichao

（KeyLabofCropGenomicsandGeneticImprovementofMinistryofAgriculture/KeyLabofCropHeterosisandUtilizitionofMinistryofEducation/BeijingKeyLabofCropGeneticImprovement,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100094,China）

AbstractTounderstandtheroleofmyo-inositoloxygenasegeneinplantunderwaterstressusingRT-PCR,thecDNAofopenreadfragmentofputativemyo-inositoloxygenasegene（MIOX）inricewassuccessfullyamplifiedto927bpinlengthandencoded308aminoacids,namedOsMIOX.SequenceanalysisindicatedthatOsMIOXsharedhighhomogeneitywiththeArabidopsisthalianaMIOXgene.TheclonedcDNAofOsMIOXgenewasintroducedintopCAMBIA1301vector,givingaplantexpressionvectorcontainingOsMIOXgenelinkedwith35spromoter.ResultsofrealtimePCRanalysisshowedthattheOsMIOXgenewasupregulatedbyPEGstressinuplandricecultivarIRAT109,andtheexpressionlevelwashigherinuplandrice（IRAT109,Haogelao）thaninlowlandrice（Yuefu,Nipponbare）underPEGstress.Thisshowedthatthemolecularmechanismunderwaterstresswasdifferentbetweenlowlandriceanduplandrice,perhapsduetodifferencesindroughtstress.ThepossibleroleofOsMIOXgeneunderdroughtstresswasdiscussed

.

Keywordsgeneexpression;genecloning;myo-inositoloxygenasegene;rice;waterstress;plantexpressionvector

第1234567891011121314151617181920篇

马尾松树皮提取物体外抑制人大肠癌细胞生长机理初探

崔映宇1王宏斌1谢衡2伍春莲1彭青青1郑光耀2王金发1

（1.生物防治国家重点实验室/教育部基因工程重点实验室/中山大学生命科学院，广州510275；

2.广州嵩珍营养源研究所，广州510645）

摘要为探讨马尾松树皮提取物（PMBE）体外抑制大肠癌LoVo细胞生长的作用特点和机理，通过MTT、显微镜术、凝胶电泳和流式细胞术，研究PMBE抑制LoVo细胞生长的特点，运用免疫组化和RTPCR探究相关分子机理。

结果表明：

PMBE时间剂量依赖地抑制LoVo细胞的体外生长；PMBE处理后，流式细胞检测发现LoVo细胞周期阻滞于G1或S期，同时可检测到亚二倍体峰的出现；荧光镜检和透射电镜观察可看到LoVo细胞的核皱缩、边集甚或碎裂，以及有凋亡小体形成，其基因组经过凝胶电泳呈现典型的梯形Ladder；RT-PCR和免疫组化结果显示PMBE处理可上调LoVo细胞中p53和p21基因的转录效率，并下调Bcl2的蛋白表达量。

说明PMBE通过上调p53和p21的表达量阻滞细胞周期、下调Bcl2的表达量诱导细胞凋亡的双重机制，抑制LoVo细胞的体外生长，可供进一步探索相关信号传导通路参考。

关键词马尾松树皮提取物；人大肠癌LoVo细胞；基因表达；细胞周期阻滞；凋亡

PrimaryexplorationofmechanismofPinusmassonianabarkextract

inhibitinggrowthofhumancolorectalcarcinomacellsinvitro

CuiYingyu1,WangHongbinXieHeng2,WuChunlian1,PengQingqing1,

ZhengGuangyao2,WangJinfa1

（1.StateKeyLaboratoryforBiocontrol/KeyLaboratoryofGeneEngineeringofMinistryofEducation/CollegeofLifeSciences,SunYatsenUniversity,Guangzhou510275,China;

2.InstituteofSongzhenNutritionalResource,Guangzhou510645,China）

AbstractToexplorethecharacterandmechanismofPinusmassonianabarkextract（PMBE）inhibitingthegrowthofhumancolorectalcarcinomaLoVocellsinvitro.MTT,microscopy,gelelectrophoresisandflowcytometrywereusedtoidentifythecharactersofPMBEinhibitingLoVocellgrowthandinducingapoptosis.ImmunohistochemistryanalysisandRTPCRwereusedtoexploretherelatedmolecularmechanism.PMBEinhibitsthegrowthofLoVocellsinatimeanddosedependentmanner.PMBEtreatmentresultedincellcyclearrestatG1/Sphase,SubG1curve,genomicDNAladderpattern,andmorphologicalchanges,includingnuclearcondensation,boundaryaggregationorsplit，andapoptoticbodyformation.Inaddition,PMBEupregulatestheexpressionofp53andp21anddownregulatestheexpressionofBcl2.PMBEinhibitsthegrowthofLoVocellsinvitroviadoublemechanismsofcellcyclearrestthroughupregulationofp53andp21expressionandapoptosisinductionthroughdownregulationofBcl2expression,whichlaidfoundationforfurtherresearchoftherelatedsignaltransductionpathways.

KeywordsPinusmassonianabarkextract（PMBE）;humancolorectalcarcinomaLoVocell;geneexpression;cellcyclearrest;apoptosis

第1234567891011121314151617181920篇

黄芪中一种新的PR-10蛋白的纯化和性质

齐笑玮1闫巧娟2江正强1邓伟1

（1.中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京100083；2.中国农业大学工学院，北京100083）

摘要为了进一步研究蒙古黄芪（AstragalusmongholicusBunge）中的蛋白质及其功能，通过金属离子螯合层析、离子交换层析和凝胶过滤得到一种新蛋白（AmPR10），并对其

部分性质进行了研究。

AmPR10在SDSPAGE上的分子质量为17.2ku，凝胶过滤层析测得分子质量为32.6ku，说明其为同源二聚体。

糖蛋白染色显示为糖蛋白，总糖含量为13.7%，离子交换色谱法分析其中含有73%阿拉伯糖、15%葡萄糖、微量的果糖和一种未知糖；N端序列分析结果显示其与病程相关蛋白家族PR10中黄羽扇豆L1PR101C同源性高达80%。

同时，AmPR10具有核糖核酸酶活性，纯AmPR10的核糖核酸酶比活性为74.11U/mg，这点与一些PR10蛋白类似。

关键词蒙古黄芪；病程相关蛋白PR10；纯化；核糖核酸酶活性

Purificationandcharacterizationofanovelpathogenesisrelated

class10proteinfromAstragalusmongholicus

QiXiaowei1，YanQiaojuan2，JiangZhengqiang1，DengWei1

（1.CollegeofFoodScienceandNutritionalEngineering,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100083,China；

2.CollegeofEngineering,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100083,China）

AbstractAnovelpathogenesisrelatedclass10protein（AmPR10）fromAstragalusmongholicuswaspurifiedandcharacterized.Thepurifiedproteinappearedasasinglebandwithamolecularmassof172kuonSDS-PAGEandwaselutedfromaSuperdex75columnwithanapparentmolecularweightof32.6ku.AmPR10wasaglycoproteinwithaneutralcarbohydratecontentof13.7%.Thecarbohydratewasmainlycomposedof73.0%arabinoseand15.0%glucose.NterminalaminoacidsequenceofAmPR10wassignificantlyhomologytopathogenesisrelatedproteinsfromthePR10family.Thesequencehad80%identitywithL1PR10.1C,aPR10proteinfromLupinusluteus.AmPR10hadribonucleaseactivityof74.11U/mgprotein,assomeotherPR10proteins.

KeywordsAstragalusmongholicusBunge；pathogenesisrelatedclass10proteins；purification；ribonucleaseactivity

第1234567891011121314151617181920篇

糖基化反应改善鲢鱼鱼肉肌原纤维蛋白功能特性

芦晶1沈慧星2张爱荣1罗永康1

（1.中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京100083；

2.中国农业大学理学院，北京100083）

摘要糖基化反应可以改善蛋白质的某些功能特性。

为了提高鲢鱼肉蛋白质的功能特性，扩大其综合利用率，采用三因素二次正交旋转组合设计，研究了用鲢鱼肌原纤维蛋白（Mf）通过美拉德反应制备肌原纤维乳糖蛋白时，糖基化反应条件（温度、反应时间、乳糖与Mf质量比）对肌原纤维乳糖蛋白的溶解性、乳化性、热稳定性的影响，分别建立了肌原纤维乳糖蛋白的溶解性、乳化性、热稳定性与糖基化反应条件的定量关系。

结果表明：

肌原纤维乳糖蛋白溶解性的最优反应条件是温度50℃，反应时间18.5h，乳糖与Mf质量比1.5；肌原纤维乳糖蛋白乳化活性的最优反应条件是温度50℃，反应时间18.5h,乳糖与Mf质量比2.15；肌原纤维乳糖蛋白热稳定性的最优反应条件是温度55℃，反应时间13h，乳糖与Mf质量比1.5。

乳糖与Mf通过糖基化反应可以有效改善鲢鱼肉肌原纤维蛋白的功能特性。

关键词鲢鱼肌原纤维蛋白；乳糖；糖蛋白；溶解性；乳化活性；热稳定性

Improvedfunctionalpropertiesofsilvercarp（Hypophthalmichthys

molitrix）myofibrillarproteinsbyglycosylationreaction

LuJing1，ShenHuixing2,ZhangAirong1，LuoYongkang1

（1.CollegeofFoodScienceandNutritionalEngineering,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100083，China;

2.CollegeofScience,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100083,China）

AbstractFunctionalpropertiesofproteinscanbeimprovedbymailardreaction.InordertoimproveMyofiibrillar'sfunctionalpropertiesandmaximizetheefficiencyofitsuse,MyoffibrillarwasconjugatedtolactosebythemeansofMailardreaction.Theconditionsforpreparingmyofibrillarlactosewithbetterfunctionalproperties,usingglycosylationreactionwereoptimizedbyRSMasfollows:

forsolubility,temperature50℃,reactiontime18.5h,weighoflactosetoMf1.5;foremulsifyingactivities,temperature50℃,reactiontime18.5h,weighoflactosetoMf,2.15;forheatstability,temperature55℃,reactiontime13h,weighoflactosetoMf1.5.TheseresultssuggestthatfunctionalpropertiesofglycatedproteinswereeffectivelyimprovedbyMaillardreaction.

Keywordsmyofibrillarprotein;lactose;glycoprotein;solubility;emulsifyingactivity;heatstability

第1234567891011121314151617181920篇

一种快速而有效的‘舞美’苹果种子繁殖体系的建立

杨海玲曹敏格孙扬吾阿不都热扎克张文朱元娣

（中国农业大学农学与生物技术学院，北京100094）

摘要为提高胚败育率高的苹果品种‘舞美’种子成苗率、缩短种子休眠时期、加速种子有性繁殖进程的种子繁殖体系，以‘舞美’自然授粉的果实和种子为试材，研究了胚龄（接种时期）、播前处理及培养基配比对‘舞美’杂种种子萌发率和成苗率的影响。

结果表明：

随果实成熟，种皮颜色由红色、红白色、红褐色至褐色转变；离体培养不同胚龄的种子，盛花后76d，种皮红色，种子可萌发但生长畸形；96d后，种皮红褐至褐色，有56.7%的萌发率和23.3%的直接成苗率，且添加1mg/LGA3的H2培养基比未添加GA3的H1培养基（1/2MS+10g/L蔗糖+9g/L琼脂）可显著提高成苗率。

盛花后130d的饱满种子在H2培养基上离体培养萌发快,萌发率和直接成苗率分别达100％和97.6％，且显著高于未经层积处理和4℃层积处理20和30d后直接播种在蛭石中的种子。

因此，自盛花96d后的杂种胚在H2培养基上培养，至胚苗移栽成活需4～5个月时间，种子直接成苗率在40％以上。

关键词苹果；种子繁殖；胚败育；胚培养；层积处理

Establishmentofarapidandefficientsystemforpropagating

theapplecultivar‘Maypole’byseed

YangHailing,CaoMin'ge,SunYangwu,AbuduRezhake,ZhangWen,ZhuYuandi

（CollegeofAgronomyandBiotechnology,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100094,China）

AbstractInordertoincreasetherateofgerminationofapplecultivarswithhigherembryonicmalfunction,reduceseeddormancyandenhancesexualpropagation,fruitsandseedsofthecultivar‘Maypole’werestudied.Weexploredtheinfluenceofseeddevelopmentstages,presowingtreatmentsanddifferentculturemedia,ongerminationandgrowthofnewseedlingsinvitro,fromtheembryo.Theresultshowedthatthecolorofseedcapsulechangedfromred,redwhite,redbrowntobrownasfruitsmatured.Seedsatdifferentdevelopingstageswereinoculatedintwodifferentculturemedia.Developingseedswithredcapsulecolorwerefairlycapableofgermination,76daysafterfullbloombutgrewabnormallyfromtheembryoculture;seedswithredbrowncapsulecolorgerminatedfairlywell96daysafterfullbloom,intodirectseedlings.TheratioofdirectgenerationofseedlingsinvitrofromembryowasincreasedmarkedlyontheculturemediumH2with1mg/LGA3thanH1（containing1/2MS+