15岛津LC高效液相色谱仪使用维修保养操作规程.docx

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15岛津LC高效液相色谱仪使用维修保养操作规程

15-岛津LC-2030高效液相色谱仪使用、维修、保养操作规程

1目的：

建立岛津LC-2030高效液相色谱仪使用、维修、保养操作规程，确保仪器的正确操作。

2范围：

本规程适用于岛津LC-2030高效液相色谱仪使用、维修、保养。

3责任：

化验室负责人，化验员。

4内容：

4.1概述

本系统由四元低压梯度系统输送泵、自动进样器、UV检测器、柱温箱、LabSolutions色谱数据工作站和电脑等组成。

4.2原理

储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱固定相内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。

4.3技术参数

流量设定范围

0.0001～10mL/min

流速精度

±1%或±2µL/min

最大操作压力

44MPa

进样数

216个样品

外形尺寸mm

410×500×605mm

波长重现性

±0.1nm

温控精度

±0.1℃

波长范围

190～700nm

噪声

±2.5×10-6AU

漂移

100×10-6AU/h

4.4设备安装位置

设备名称

放置房间

LC-2030型高效液相色谱仪

精密仪器室

4.5操作方法

4.5.1准备

4.5.1.1准备所需的流动相，用合适的0.45µm滤膜过滤，超声脱气20～30min。

4.5.1.2根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）。

4.5.1.3配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45µm滤膜过滤。

4.5.1.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

4.5.2开机

接通电源，依次开启高效液相色谱仪开关，电脑主机、显示器，待高效液相色谱仪自检结束后，打开色谱工作站。

4.5.3等度洗脱

4.5.3.1排气

打开Purge，点击程序中的“自动排气”，系统自动进行排气，若使用多通道，根据实际需要选择通道进行排气；如果不出液，用针头接上“p”的管路，进行抽气，至到有液体从“Purge”这个管路排出。

4.5.3.2参数设定

4.5.3.2.1波长设定：

在[数据采集]窗口的[时间程序视图]中[检测器A]，选择波长

（1）输入所需波长。

4.5.3.2.2流速设定：

在[数据采集]窗口的[时间程序视图]中[泵]，选择泵总流量，输入所需流速。

4.5.3.2.3流动相比例设定：

在[数据采集]窗口的[时间程序]中[泵]，选择所用泵，输入泵项下所需的浓度比例。

4.5.3.3设置好后，点击“下载”系统自动按照设置好的方法，进行走基线。

4.5.3.4基线平稳后，方可进样。

可以进行单次分析或批处理分析。

4.5.3.4.1单次分析:

单击[数据采集]窗口助手栏上的“单次开始”图标；设置“样品名”“方法文件”“数据文件”“样品瓶”“样品架”“进样体积”等信息；点击确定，系统即自动进行单次分析。

4.5.3.4.2批处理分析:

单击[数据采集]窗口助手栏上的“批处理”图标；从[文件]菜单中选择[新建批处理文件]；设置“样品名”“方法文件”“数据文件”“样品瓶”“样品架”“进样体积”等信息；点击保存，保存批处理文件；点击[批处理]助手栏中的“批处理开始”，系统即执行批处理程序。

4.5.4梯度洗脱

4.5.4.1排气:

打开Purge，点击程序中的“自动排气”，系统自动进行排气，若使用多通道或梯度，根据实际需要选择通道进行排气；如果不出液，用针头接上“p”的管路，进行抽气，至到有液体从“Purge”这个管路排出。

4.5.4.2参数设定

4.5.4.2.1波长设定：

在[数据采集]窗口的[时间程序视图]中[检测器A]，选择波长

（1）输入所需波长。

4.5.4.2.2流速设定：

在[数据采集]窗口的[时间程序视图]中[泵]，选择泵总流量，输入所需流速。

4.5.4.3梯度洗脱设置程序:

在[数据采集]窗口的[时间程序视图]，选择[时间程序]图标中的[LC时间程序]；设置程序洗脱的时间及流动相比例；设置完后应以controllerstop（控制仪器停止）为结尾；点击“时间程序”查看设置时间程序是否正确；点击“泵”选择泵，调节压力限制（最大压力设为20.0MPa）；

4.5.4.4设置好后，点击“下载”系统自动按照设置好的方法，进行走基线。

4.5.4.5基线平稳后，方可进样。

可以进行单次分析或批处理分析。

4.5.4.5.1单次分析:

单击[LC实时分析]窗口助手栏上的“单次开始”图标；设置“样品名”“方法文件”“数据文件”“样品瓶”“样品架”“进样体积”等信息；点击确定，系统即自动进行单次分析。

4.5.4.5.2批处理分析:

单击[数据采集]窗口助手栏上的“批处理”图标；从[文件]菜单中选择[新建批处理文件]；设置“样品名”“方法文件”“数据文件”“样品瓶”“样品架”“进样体积”等信息；点击保存，保存批处理文件；点击[批处理]助手栏中的“批处理开始”，系统即执行批处理程序。

4.5.5泵的清洗

检测完毕后，如流动相无盐、酸及缓冲液，可直接用甲醇或乙腈冲洗30分钟即可，如流动相含有盐、酸及缓冲液，先用甲醇:

水=10:

90冲流30分钟，再用甲醇冲洗30分钟即可。

4.5.6样品测试完毕后，绘制标准曲线。

方法如下：

4.5.6.1点击“LabSolutions”中的再解析图标，LC再解析开始；

4.5.6.2单击[再解析]助手栏中的[LC数据分析]图标，出现[LC数据分析]窗口；

4.5.6.3选择[文件]菜单中的[打开数据文件]，然后选择与测量的数据文件，数据文件打开；

4.5.6.4单击助手栏中的[向导]图标，出现[化合物向导]；

4.5.6.5请确保设置了正确的积分参数，然后单击[下一步]；

4.5.6.6记录要识别的峰的保留时间，然后单击[下一步]；

4.5.6.7指定定量计算方法和校准曲线类型，然后单击[下一步]；

4.5.6.8设置识别的方法，然后单击[下一步]；

4.5.6.9提供化合物表的详细设置，然后单击[完成]；

4.5.6.10单击[LC数据]助手栏中的[应用到方法]图标；

4.5.6.11命名方法文件并单击[保存]；

4.5.6.12单击[确定]而不进行任何更改；

4.5.6.13单击[再解析]助手栏中的[校准]图标；

4.5.6.14打开用于生成校准曲线的方法文件；

4.5.6.15拖入需要作校准曲线的数据，即得出校准曲线。

4.5.7使用校准曲线计算数据浓度

4.5.7.1选择[文件]菜单中的[打开数据文件]，然后指定数据文件名；

4.5.7.2选择[文件]菜单中的[加载方法参数]，然后指定方法文件名，出现[方法参数]屏幕；

4.5.7.3使用方法文件中的校准曲线计算数据的浓度。

4.5.8出具报告

4.5.8.1根据需要设置相应的报告格式；

4.5.8.2把测定的数据拖入设置好的报告模块中，即得报告。

4.5.9关机

全部分析完毕后，先关检测器和柱温箱电源，再用适宜的溶剂清洗色谱系统。

依次关闭系统控制器、泵和微机电源，拔下各插头，做好使用记录。

4.6泵的使用和维护注意事项

4.6.1为了延长泵的使用寿命和维持其输液的稳定性，必须按照下列注意事项进行操作：

4.6.1.1防止任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒，而常用的方法是滤过，可采用微孔滤膜（0.2µm或0.45µm）等滤器。

泵的入口都应连接砂滤棒（或片）。

输液泵的滤器应经常清洗或更换。

4.6.1.2流动相不应含有任何腐性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在柱内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。

如果将含缓冲液的流动相留在泵内，由于蒸发或泄漏，甚至是由于溶液的静置，就可能析出盐的微细晶体，这些晶体将和上述固体微粒一样损坏密封环和柱塞等。

因此，必须泵入加入少量甲醇或乙腈和纯水将泵充分清洗后，再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂（对于反相键合硅胶固定相，可以是甲醇或甲醇水）。

4.6.1.3泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液。

4.6.1.4输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。

4.6.1.5流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性如果有大量气泡，泵就无法正常工作。

4.6.2如果输液泵产生故障，须查明原因，采取相应措施排除故障。

4.6.2.1没有流动相流出，又无压力指示。

原因可能是泵内有大量气体，这时可打开泄压阀，使泵在较大流量下运转，将气泡排尽，也可用一个50ml针筒在泵出口处帮助抽出气体。

另一个可能原因是密封环磨损，需更换。

4.6.2.2压力和流量不稳。

原因可能是气泡，须要排除；或者是单向阀内有异物，可卸下单向阀，进入丙酮内超声清洗。

有时可能是砂滤棒内有气泡，或被盐的微细晶粒或滋生的微生物部分堵塞，这时，可卸下砂滤棒浸入流动相内超声除气泡，或将纱滤棒浸入稀酸内迅速除去微生物，或将盐溶解，再立即清洗。

4.6.2.3压力过高的原因是管路被堵塞，需要清除和清洗。

压力降低的原因则可能是管路有泄漏。

检查堵塞或泄漏时应逐段进行。

4.6.3关于试剂

4.6.3.1试剂类别：

有机溶剂、无机化合物、水

4.6.3.2试剂的要求：

4.6.3.2.1有机溶剂的级别优级纯以上专用试剂。

4.6.3.2.2无机化合物要求分析纯以上。

4.6.3.2.3水要求是去离子纯净水。

4.6.4流动相

4.6.4.1无气泡，通过超声脱气，通氦气等方法进行脱气。

4.6.4.2纯净无杂质，常用方法为用0.45µm微孔过滤膜进行过滤。

4.6.5色谱柱的注意事项

4.6.5.1压力：

注意每根柱的耐压（最大使用压力）。

4.6.5.2pH的范围：

不同柱子的pH值范围有所不同。

4.6.5.3清洗：

柱子需要必要的清洗，请用户参考柱子的说明书。

4.6.5.4保存：

长时间不使用柱子时需要用合适的试剂进行保存，请参考柱子的说明书。

4.6.6关于吸滤过滤器堵塞

4.6.6.1现象：

塞吸现象、管路中不断产生气泡

4.6.6.2处理方式：

将吸滤头1从溶剂管中拔出，放在正己烷或稀硝酸（一般〈10%〉中超声清洗。

4.6.7在线过滤器堵塞

4.6.7.1现象：

不连接柱子及管路、混合器（松开泵进混合器或柱子的管路接头），设定泵流速为1ml/min，泵压力大于0.3MPa，说明在线过滤器堵塞。

4.6.7.2处理方式：

一般建议用户更换新的过滤器，也可以将在线过滤器拆下，用稀硝酸（浓度小于10%），进行超声清洗。

4.6.8压力波动的原因及处理方法

4.6.8.1产生波动的原因：

有气泡；密封圈有磨损，产生微量的泄液；进口单向阀中有异物（较常见）；在线过滤器，管路，柱子进口处有盐析出或杂物；

4.6.8.2处理方法：

流动相进行脱气，排除流路中的气泡；更换密封圈；清洗进出口单向阀，将单向阀置于烧杯中，用异丙醇进行超声清洗；检查并清洗过滤器及流路。

4.6.9引起柱压升高的原因

4.6.9.1色谱柱长时间使用后用户发现柱压比以往要高出许多，造成此情况可能由以下几个因素引起。

在线过滤器堵；高压混合器堵；进样器堵；流路中部分细管堵；流通池堵；柱子内部吸附样品产生堵。

4.6.9.2确认方法：

进行分段检测，确认的确是柱子压力高还是以上5点原因中某个引起的。

4.6.10进样峰分叉的原因

4.6.10.1流路及柱子等没有做任何改变的情况下，分析样品时，被检测峰产生分叉，则说明保护柱或分析柱柱效下降，需再生保护柱或分析柱。

4.6.10.2柱的出口到检测池的管路偏长或管路内径宽所致（常用内径0.3mm以下）,导致样品扩散,造成峰分叉。

4.6.11什么情况下需更换D2Lamp（氘灯）

4.6.11.1显示D2LampERROR时，一般情况下认为氘灯不良需更换。

4.6.11.2氘灯超过使用时间（理论为2000小时），需要更换氘灯。

4.6.12造成检测池能量低的原因

4.6.12.1氘灯使用时间过长（大于2000小时），灯老化所致。

4.6.12.2光路系统受到污染或老化。

说明：

检测池能量高低以参比池为准。

4.6.13检测池中有气泡如何排除

一般情况下，很小的气泡会停留在检测池中，所以需要在池管路出口1处加一个背压管，池中气泡不易在池中产生。

（加背压：

出口处加上一段阻尼管增加压力）

4.6.14如何清洗流通池

一般情况下，请用户不要将池拆散，而是用仪器附带的工具进行清洗。

常用流程：

水-甲醇-异丙醇-甲醇，或再用稀硝酸冲洗池流路。

4.6.15基线漂移，噪音增大的原因。

4.6.15.1所用试剂不纯

4.6.15.2整个流路系统不干净

4.6.15.3流动池污染

4.6.15.4氘灯使用时间过长

4.6.15.5电压不稳，或者有环境干扰

4.6.15.6柱子污染等因素

4.6.16梯度洗脱时可能产生的干扰峰

在进行梯度洗脱时，由于溶剂的变化，导致吸光度背景值的该改变。

所以会产生基线上下波动，这是正常现象。

由于不断的洗脱，特别是水及无机盐混合的流路，流过柱子后部分杂质被柱子吸附，随着体系洗脱液极性的变化，以及在不同的检测波长下，某些成分被检测，导致在没有进样情况下，基线上出现峰，即被认为是干扰峰。

4.6.17色谱柱的再生

色谱柱使用一段时间后可能会导致柱效下降，此时需要对柱子进行再生，提高柱效。

4.6.17.1甲醇冲洗半小时

4.6.17.2三氯甲烷冲洗十分钟

4.6.17.3异丙醇冲洗十分钟

4.6.17.4三氯甲烷冲洗十分钟

4.6.17.5甲醇冲洗半小时

说明：

柱使用时间的长短与被分离的样品有很大的关联，所以碰到像生物样品、血制品、发酵产品等中均含有不同程度的蛋白质及大分子量的组分，柱子很容易损坏，柱效易下降。

这种情况下用以上方式进行再生几乎没有明显的改变。