分子生物学期末考试题目及答案.docx

分子生物学期末考试题目及答案.docx

《分子生物学期末考试题目及答案.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《分子生物学期末考试题目及答案.docx（12页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。

分子生物学期末考试题目及答案

分子生物学【2】温习提纲

一．名词说明

（1）Ori：

原核生物基因质粒的复制肇端位点,是四个高度保守的19bp构成的正向反复序列,只有ori能被宿主细胞复制蛋白质辨认的质粒才能在该种细胞中复制.

ARS：

自立复制序列,是真核生物DNA复制的起点,包括数个复制肇端必须的保守区.不同的ARS序列的配合特点是一个被称为A区的11bp的保守序列.

（2）Promoter：

启动子,与基因表达启动有关的顺式感化元件,是构造基因的重要成分,它是位于转录肇端位点5’端上游区大约100~200bp以内的具有自力功效的DNA序列,能活化RNA聚合酶,使之与模板ＤＮＡ精确地相结归并具有转录肇端的特异性.

（3）r-independenttermination不依附r因子的终止,指在不依附r因子的终止反响中,没有任何其他因子的参与,焦点酶也能在某些位点终止转录.（强终止子）

（4）SDsequence：

ＳＤ序列（核糖体小亚基辨认位点）,消失于原核生物肇端暗码ＡＵＧ上游７～１２个核苷酸处的一种４～７个核苷酸的保守片断,它与１６ＳｒＲＮＡ３’端反向互补,所以可以将mRNA的AUG肇端暗码子置于核糖体的恰当地位以便肇端翻译感化.

Kozaksequence：

消失于真核生物mRNA的一段序列,核糖体可以或许辨认mRNA上的这段序列,并把它作为翻译肇端位点.

（5）Operator：

操纵基因,与一个或者一组构造基因相临近,并且可以或许与一些特异的隔绝蛋白互相感化,从而掌握临近的构造基因表达的基因.

Operon：

操纵子,是指原核生物中由一个或多个相干基因以及转录翻译调控元件构成的基因表达单元.包括操纵基因.构造基因.启动基因.

（6）Enhancer：

加强子,能强化转录肇端的序列的为加强子或强化子

Silencer：

沉默子,可下降基因启动子转录活性的一段DNA顺式元件.与加强子感化相反.

（7）cis-actingelement：

顺式感化元件,消失于基因旁侧序列中能影响基因表达的序列,包括启动子.加强子.调控序列和可引诱元件,本身不编码任何蛋白质,仅仅供给一个感化位点,与反式感化因子互相感化参与基因表达调控.

trans-actingfactor：

反式感化因子,是指直接或间接地辨认或联合在各类顺式感化元件焦点序列上参与调控靶基因转录效力的蛋白质.具有三个功效构造域,即DNA联合域.转录联合域.联合其他联合蛋白的构造域.

（8）Openreadingframe（ORF）：

凋谢式浏览框架,是指一组中断的含有三联暗码子的可以或许被翻译成为多肽链的DNA序列.它由肇端暗码子开端,到终止暗码子停滞.

（9）Gene：

基因,产生一条多肽链或功效RNA所需的全体核苷酸序列.（能转录且具有生物学功效的DNA/RNA的序列.）

（10）DNAdenaturation：

DNA变性,DNA双链的氢键断裂,最后完整变成单链的进程.

Hyperchromaticeffect：

增色效应,在变性进程中,260nm紫外线接收值先迟缓上升,当达到某一温度时骤然上升,称为增色效应.

复性（Renaturation）：

热变性的DNA迟缓冷却,单链恢复成双链.

DNAMeltingtemperature（Tm）：

ＤＮＡ消融温度,变性进程紫外线接收值增长的中点称为融解温度.心理前提下为85~95℃.

（11）RNAsplicing：

ＲＮＡ的剪接,SnRNA形成剪接体,剪接旌旗灯号为GU（供体）AG（受体）从mRNA前体分子中切除内含子,而使外显子拼接形成成熟ｍＲＮＡ的进程.

intron：

内含子,消失于原始转录产物或基因组DNA中,但不包括在成熟mRNA.rRNA或tRNA中的那部分核苷酸序列.

exon：

外显子,基因组DNA中出如今成熟RNA分子上的序列.

（12）RNAi：

RNA干预,是应用双链小RNA的高效.特异性降解细胞内同源mRAN,从而阻断体内靶基因表达,使细胞消失靶基因缺掉表型的办法.

（13）polymerasechainreaction（PCR）：

聚合酶链式反响,是体外酶促合成特异DNA片断的一种办法,由高温变性（92~97℃）.低温退火（45~55℃复性）及适温延长（72℃.Taq酶）等几步反响构成一个周期,轮回进行,使目标DNA得以敏捷扩增.

（14）Southernblot：

DNA印迹杂交,指应器具有必定同源性的两条核酸单链在必定的前提下,可按碱基互补的原则形成双链,此杂交进程是高度特异的.因为核酸分子的高度特异性及检测办法的敏锐性,分解凝胶电泳和核酸内切限制酶剖析的成果,便可绘制出DNA分子的限制图谱,此即DNA印迹杂交.

Northernblot：

RNA印迹杂交,起首经由过程电泳的办法将不同的RNA分子根据其分子量大小加以区分,然后经由过程与特定基因互补配对的探针杂交来检测目标片断.

Westernblot：

蛋白质印迹.经由过程特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色.经由过程剖析着色的地位和着色深度获得特定蛋白质在所剖析的细胞或组织中的表达情形的信息.

二．简答和问答题

1．RNA的种类和功效

答：

mRNA.tRNA.rRNA.反义RNA.snRNA,ｇＲＮＡ等等.

①mRNA,信使RNA,功效就是把DNA上的遗传信息精确无误地转录下来,决议蛋白质的氨基酸次序,完成遗传信息传递进程.

②tRNA,转运ＲＮＡ,根据mRNA的遗传暗码依次精确地将它携带的氨基酸贯穿连接起来形成多肽链.

③rRNA,核糖体ＲＮＡ,一般与核糖体蛋白质联合在一路,形成核糖体.

④反义RNA,与mRNA互补的RNA分子,从而克制mRNA的翻译,参与基因表达的调控.

⑤snRNA,小核RNA,是真核生物转录后加工进程中RNA剪接体的重要成分.

上述各类RNA分子均为转录的产物,mRNA最后翻译为蛋白质,而rRNA.tRNA及snRNA等并不携带翻译为蛋白质的信息,其终产物就是RNA.

⑥gRNA,引诱RNA,真核生物中参与RNA编辑的具有与mRNA互补序列的RNA.

2．DNA半保留和半不中断复制

答：

①DNA半保留复制是：

DNA在进行复制的时刻链间氢键断裂,双链解旋离开,每条链作为模板在其上合成互补链,经由一系列酶的感化生成两个新的DNA分子.子代DNA分子个中的一条链来自亲代DNA,另一条链是新合成的,这种方法称半保留复制.

②半不中断复制是因为DNA双螺旋的两股单链是反向平行,一条链的走向为5'→3',另一条链为3'→5',DNA的两条链都能作为模板以边解链边复制方法,同时合成两条新的互补链.但是,所有已知DNA聚合酶的合成偏向都是5’→3’,所以在复制是,一条链的合成偏向和复制叉进步偏向雷同,可以中断复制,称为前导链;另一条链的合成偏向与复制叉进步偏向相反,不能顺着解链偏向中断复制,必须待模板链解开至足够长度,然后从5‘→3’生成引物并复制子链.延长进程中,形成冈崎片断,要等待下一段有足够长度的模板,再次生成引物而延长,然后衔接起来,这条链称滞后链.是以就把前导链中断复制,侍从链不中断复制的复制方法称为半不中断复制.

3．端粒酶的工作道理

答：

原核生物的染色体是环状的,其5'最末尾岗崎片断的RNA引物被降解后可借助另半圈DNA链向前延长来弥补.但真核生物线性DNA在复制后,不能弥补5'末尾的空白,从而会使5'末尾序列是以而缩短.真核生物经由过程形成端粒构造来解决此问题,复制使端粒5'末尾缩短,而端粒酶可外加反复单位到5'末尾上,成果便是保持端粒必定的长度.

端粒酶是一种含有RNA链的逆转录酶,它以所含的RNA引物为模板来合成DNA端粒构造.端粒酶可联合到端粒的3'末尾上,RNA引物的5'末尾辨认DNA的3'末尾碱基并互相配对,以RNA链为模板使DNA链延长,合成一个反复单位（TTTAGGG）后,酶再向前移动一个单位.合成停滞后,端粒的3'单链末尾折回作为引物,合成其互补链.

4．原核DNA复制进程中遗传信息的保真机制

答：

①DNA聚合酶IIIε亚基具有3'到5'核酸外切酶的活性,在聚合进程中其有校订感化.（DNA聚合酶III的庞杂亚基构造（由10种亚基构成）使其具有更高的忠诚性.协同性和中断性,如无校订功效,复制出错率仅为7×10-6,具有校订功效后下降至5×10-9.）

②DNA聚合酶I在DNA复制中起着,辨认甲基化母链,切除.修复错误复制的核苷对的感化.

③DNA聚合酶II也在复制中起修复复制错误的才能.

综上所述,所以DNA的复制有着高度的保真性.

5*．原核和真核复制,mRNA转录,蛋白翻译,基因表达调控的异同

答：

⑴复制：

原核生物与真核生物DNA复制配合的特色：

①分为肇端.延长.终止三个进程;

②必须有供给3’羟基末尾的引物;

③亲代DNA分子为模板,四种脱氧三磷酸核苷（dNTP）为底物,多种酶及蛋白质：

DNA拓扑异构酶.DNA解链酶.单链联合蛋白.引物酶.DNA聚合酶.RNA酶以及DNA衔接酶等;

④一般都为半保留复制.半不中断复制.

原核生物与真核生物DNA复制不同的特色：

①真核生物为线性DNA,具有多个复制肇端位点,形成多个复制叉,DNA聚合酶的移动速度较原核生物慢.原核生物一般为环形DNA,具有单一复制肇端位点.

②真核生物DNA复制只产生在细胞周期的S期,一次复制开端后在完成前不再进行复制,原核生物多反复制同时进行.

③真核生物有多个复制子ＡＲＳ大小不一且并不同步.原核生物只有一个复制子Ｏｒｉ.

④真核生物有五种DNA聚合酶,须要Mg+.重要复制酶为DNA聚合酶δ（ε）,引物由DNA聚合酶α合成.原核生物只有三种,重要复制酶为DNA聚合酶III.

⑤真核生物末尾靠端粒酶（部分细胞）补齐,而原核生物以多联体的情势补齐.

⑥真核生物冈崎片断间的RNA引物由核酸外切酶MF1去除,而原核生物引物由DNA聚合酶I去除.

⑵ｍＲＮＡ转录：

原核生物与真核生物ｍＲＮＡ转录配合的特色：

①都分为分为肇端.延长.终止三个进程;

②都有启动子.终止子或终止旌旗灯号.调控序列;

③所需原料都有ＲＮＡ聚合酶.ＮＴＰ等.

原核生物与真核生物mRNA转录不同的特色：

1真核生物转录肇端,延长,终止都须要因子的关心

2原核的启动子为-10box和-35box,真核为TATAbox.

3真核生物要进行5′加帽（转录早期进行30nt）.3′加尾（前体mRNA加polyA）.切除内含子.编辑和润饰.

4原核生物mRNA,tRNA,rRNA都由统一种RNA聚合酶转录而真核是三种不同的酶.

5原核生物转录终止是依附终止子（发夹构造）,真核生物是依附转录旌旗灯号（AAU.AAG）

⑶蛋白质翻译：

原核生物与真核生物蛋白质翻译的配合特色：

1都分三步进行,即翻译的肇端.肽链的延长.肽链的终止及释放

2遗传暗码雷同

原核生物与真核生物蛋白质翻译不同的特色：

1翻译肇端核糖体辨认序列原核是ＳＤ序列且有多个,真核是先经由过程5‘’Cap序列上的帽联合蛋白,找到mRNA,再经由过程Kozak序列找到翻译肇端AUG进入P位.

2原核是转录与翻译相耦联,故翻译也在细胞核内,而真核翻译在细胞核外.

3原核翻译肇端tRNA为fMet-tRNAfMet,真核为Met-tRNAMet.

4真核翻译有庞杂的后加工体系,如糖基化.磷酸化-去磷酸化等,原核无.

⑷基因表达调控：

原核生物与真核生物基因表达调控雷同的特色：

表达为多层次

原核生物与真核生物基因表达调控不同的特色：

1原核是以操纵子进行转录的调控,真核是受单基因掌握.

2原核生物调控在2个程度（转录程度的调控.翻译程度的调控）,真核在五个程度（DNA程度的调控.转录程度的调控.转录后程度的调控.翻译程度的调控.翻译后程度的调控）进行基因表达调控.

3真核生物中有选择性剪接,原核没有.

4原核的基因表达重要受情形等调控,真核是受激素等调控.

6．PCR与细胞内DNA复制的异同

雷同点：

原料都是四种脱氧核苷酸.模板.都须要引物.都是单链DNA,都遵守碱基互补配对原则.

不同点：

PCR技巧                                    DNA生物复制

情形  体外复制,加热,90摄氏度阁下     体内,平和的情形

酶   主如果DNA聚合酶 .                  DNA解旋酶,DNA聚合酶,引物酶DNA衔接酶等各类酶

引物  须要人工合成的引物                 本身合成引物成分

步骤 变性--退火--延长                   解旋-肇端-延长-停滞

大小一般只复制引物及以内的片断全部基因组

起点由引物决议原核Ori.真核ARS

7．Southernblot,Northernblot,Westernblot三种分子生物学技巧差异

答：

名称

检测对象

探针

检测道理

处理进程

用处

Southern

blot

DNA

标记单链核

酸

核酸复性中

碱基配对专

一性

琼脂糖电泳

后转膜

基因检测

（拷贝数）

Northern

blot

RNA

标记单链核

酸

核酸复性中

碱基配对专

一性

变性琼脂糖

电泳后转膜

基因表达的

检测（表达

量）

Western

blot

蛋白

抗体

抗原－抗体

特异性联合

SDS-PAGE

后转膜

基因表达产

物――蛋白

的检测

8．复制,转录,翻译,调控中的各类保守序列及其功效

⑴复制

Ori:

原核生物复制起点

ARS:

真核生物复制起点

⑵转录

启动子：

决议转录偏向及模板链.转录效力

操纵子（原核）：

将转录与翻译相耦联

终止子：

终止转录

⑶翻译

SD序列：

原核生物翻译肇端,SD序列的次序及地位对翻译都有影响.

Kozak序列：

真核生物翻译肇端

⑷调控

转录程度调控：

加强子：

感化于启动子,进步转录活性

沉默子：

感化于启动子,下降转录活性

9．乳糖操纵子和色氨酸操纵子（包括的衰减子）的工作道理

答：

⑴乳糖操纵子

乳糖操纵子是个弱启动子,包括３个构造基因：

Ｚ.Ｙ和Ａ,以及启动子.掌握子和隔绝子等.

乳糖操纵子负控引诱模式：

无引诱物时,LacⅠ基因转录产生隔绝物单体,联合形成同源四体,Lac同源四体与操纵区（O区）DNA相联合,隔绝基因转录.基因不表达.当有引诱物时,引诱物使LacⅠ变成不能与O区相联合的非活化情势,RNA聚合酶就可以与Lac启动子区相联合,肇端转录基因.mRNA被转录成三个蛋白质,即贝塔-半乳糖苷酶.贝塔-半乳糖苷透过酶.贝塔-半乳糖苷乙酰基转移酶.（（图解）乳糖操纵子是个弱启动子,在葡萄糖和乳糖都消失的情形下,大肠杆菌应用葡萄糖,是因为葡萄糖可下降cAMP浓度,阻碍其与CAP联合,而cAMP-CAP是激活Lac的重要构成部分,Lac启动子表达受阻,就没有贝塔-半乳糖苷酶活性.不能应用乳糖.所以说lac操纵子强的引诱感化既须要乳糖又需缺少葡萄糖）

⑵色氨酸操纵子

色氨酸操纵子调控感化重要有三种方法:

隔绝感化.弱化感化以及终产物Trp对合成酶的反馈克制造用.

①隔绝感化:

trp操纵子转录肇端的调控是经由过程隔绝蛋白实现的.在有高浓度Trp消失时,隔绝蛋白-色氨酸复合物形成一个同源二聚体,并且与色氨酸操纵子慎密联合,是以可以阻拦转录.当Trp程度低时,隔绝蛋白以一种非活性情势消失,不能联合DNA.在如许的前提下,trp操纵子被RNA聚合酶转录,同时Trp生物合成门路被激活.

②弱化感化:

trp操纵子转录终止的调控.在trpoperon,前导区的衰减子有4段特别的序列,可形成不依附ρ因子的转录终止旌旗灯号（衰减子的工作机理：

碱基序列（即衰减子）包括4个分别以1.2.3和4表示的片断,能以两种不同的方法进行碱基配对,1-2和3-4配对,或2-3配对,3-4配对区正好位于终止暗码子的辨认区.前导序列有相邻的两个色氨酸暗码子,当造就基中Trp浓度很低时,负载有Trp的tR2NATrp也就少,如许翻译经由过程两个相邻色氨酸暗码子的速度就会很慢,当4区被转录完成时,核糖体滞留1区,这时的前导区构造是2-3配对,不形成3-4配对的终止构造,所以转录可中断进行.反之,核糖体可顺遂经由过程两个相邻的色氨酸暗码子,在4区被转录之前,核糖体就到达2区,如许使2-3不能配对,3-4区可以配对形成终止子构造,转录停滞.）

③终产物Trp对合成酶的反馈克制造用因为基因表达必然消费必定的能源和前体物,相对于隔绝和弱化感化,反馈克制造用更为经济和高效.

三．剖析题

1．SDS-PAGE和双向电泳的道理

①SDS-PAGE是应用SDS（带负电）和还原剂损坏蛋白的高等构造,同时SDS与蛋白定量联合,清除蛋白之间的电荷差异,使得蛋白的迁徙率重要依附分子量（分子小跑得快）.加上不中断电泳,即上层为浓缩胶,可将样品紧缩到统一路跑线,基层为分别胶;可获得更高的分辩率.再用考马斯亮蓝进行染色.即可进行蛋白分子量的测定.蛋白浓度的测定.蛋白的判定.

②双向电泳是蛋白质组学中对蛋白质组进行研讨的重要分别办法,同时能分别成百上千种蛋白质.蛋白质在第一贯根据电荷的不同（等电聚焦）,第二向根据分子量的不同进行分别（SDS-PAGE）.分别后对蛋白质进行染色,根据现实剖析情形,分别进行考马斯亮兰染色.银染或荧光染色.

2．顺式感化元件工作的道理

答：

顺式感化元件,包括启动子.加强子.调控序列和可引诱元件.

要与反式感化因子感化,才能促进基因表达,而反式感化因子在DNA水平和转录程度上感化,且具有组织特异性.

3．DNA序列与蛋白功效（表型）非线形关系

答：

①基因具有壮大的容错机制

②暗码子的简并性,即使DNA错配产生在编码区也不会影响蛋白的表达.

3真核生物消失不表达蛋白的内含子

4基因距离区.非编码区等变异,不引起蛋白的变化.

5变异产生在蛋白质的非功效区,不影响蛋白质的功效.

4．PCR的道理,包括它的特异性

答：

以dNTP为反响原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制道理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链反复轮回变性--退火--延长三进程,就可获得更多的“半保留复制链”.关于特异性是①引物设计的特异性,使引物能和模版上的特定片断配对,在最优前提下特异扩增.②退火温度的不适合,也会消失非特异条带（假阳性）.

5．Westernblot的道理,包括二抗工作的道理

答：

应用抗原抗体特异性联合,再用二抗作为探针去检测蛋白.即先用SDS-PAGE得到蛋白1,经由过程转膜,再用蛋白1的Ab1（一抗）与之联合,再用带着HRP的Ab2（二抗）去辨认一抗.再显色检测成果.

6．DNA变性中的增色效应与OD值测DNA含量的关系因为DNA变性引起的紫外光260nm接收的增长称增色效应,DNA变性后,双螺旋构造解体,两条链离开,其碱基就可以或许更充分的接收260nm处的紫外光.是以可将DNA变性后,测定DNA的在260nm时的OD值的高下来得到DNA含量,DNA含量越高,OD值越大.7．衰减子工作的必要前提衰减感化产生的必要前提是：

①翻译产生前导多肽;②转录和翻译偶联.如许,但RNA聚合酶转录前导序列的同时核糖体就紧接着联合到新生的mRNA上翻译前导肽.mRNA的前导序列包括两个类似的反向反复序列.序列2与序列1和3互补,如许序列1和2.2和3.3和4都能经由过程碱基配对形成径环构造.由序列3和4配对形成的径环构造与操纵子的终止子根本雷同.和终止子一样,在其径的一侧具有7个中断的U形成的尾巴.当形成这种衰减子构造时,它就可以或许像终止子一样使转录终止.

反式感化因子构造域的模式

DNA联合域：

⑴锌指构造

⑵螺旋-转角-螺旋（NTH）

⑶亮氨酸拉链

⑷螺旋-环-螺旋（NLH）

⑸碱性α螺旋

转录活化构造域：

⑴酸性α-螺旋构造域

⑵富含谷氨酰胺构造域

⑶富含脯氨酸构造域