丰华免疫室作业指导书.docx
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丰华免疫室作业指导书
免疫室作业指导书
文件编号：
YDFH-A
第A版
编制：
审核：
批准：
生效日期：
2019年7月22日
尧都丰华医院检验科
序号
主题内容
代号
页号
1
血清乙型肝炎病毒表面抗原检测
YDFH-A-01
6
2
血清乙型肝炎病毒表面抗体检测
YDFH-A-02
9
3
血清乙型肝炎病毒e抗原检测
YDFH-A-03
12
4
血清乙型肝炎病毒e抗体检测
YDFH-A-04
15
5
血清乙型肝炎病毒核心抗体检测
YDFH-A-05
18
6
甲型肝炎病毒--IgM检测
YDFH-A-06
21
7
血清丙型肝炎病毒抗体检测
YDFH-A-07
24
8
人类免疫缺陷病毒抗体检测
YDFH-A-08
27
9
梅毒甲苯胺红不加热血清试验
YDFH-A-09
30
10
梅毒螺旋体特异性抗体检测
YDFH-A-10
32
11
类风湿因子（RF）测定
YDFH-A-11
35
12
抗链球菌溶血素O（ASO）测定
YDFH-A-12
37
13
C反应蛋白（CRP）测定
YDFH-A-13
39
14
C反应蛋白（CRP）定量测定
YDFH-A-14
41
15
D二聚体检测（胶乳凝集法）
YDFH-A-15
44
16
甲胎蛋白（AFP）定量测定
YDFH-A-16
47
17
癌胚抗原（CEA）定量测定
YDFH-A-17
51
18
F-PSA定量测定
YDFH-A-18
55
19
T-PSA定量测定
YDFH-A-19
59
20
人绒毛膜促性腺激素定量测定
YDFH-A-20
63
21
血（尿）b2-MG微球蛋白定量测定
YDFH-A-21
67
22
肌红蛋白定量测定
YDFH-A-22
71
23
肌钙蛋白-I定量测定
YDFH-A-23
75
24
CK-MB定量测定
YDFH-A-24
79
25
微量加样器的质控
YDFH-A-25
83
26
酶标分析仪操作维护规程
YDFH-A-26
86
27
全自动酶标洗板机操作维护规程
YDFH-A-27
88
28
特种蛋白测定仪操作维护规程
YDFH-A-28
89
29
免疫学室内质量控制操作程序
YDFH-A-29
94
30
免疫学检验室间质量评价（EQA）
YDFH-A-30
99
31
YDFH-A-31
32
YDFH-A-32
33
YDFH-A-33
34
YDFH-A-34
35
YDFH-A-35
36
YDFH-A-36
37
YDFH-A-37
38
YDFH-A-38
39
YDFH-A-39
40
YDFH-A-40
41
YDFH-A-41
42
YDFH-A-42
43
YDFH-A-43
44
YDFH-A-44
45
YDFH-A-45
46
YDFH-A-46
47
YDFH-A-47
48
YDFH-A-48
49
YDFH-A-49
50
YDFH-A-50
51
YDFH-A-51
52
YDFH-A-52
修订页
序号
文件编号
页码
需更改的内容
更改内容
批准人
批准日期
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
血清乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）
1.原理
在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗体，配以酶标记抗体（HBsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗（HBsAg）。
2.标本采集
2.1采集前病人准备：
受检者应空腹
2.2标本种类：
血清或血浆
2.3标本要求：
采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3.标本储存：
2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。
4.标本运输：
密封，室温运输。
5.标本拒收标准：
污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6.试剂
6.1试剂名称：
乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒
6.2试剂生产厂家：
英科新创（厦门）科技有限公司。
6.3包装规格：
96Test/Kit
6.4试剂盒组成：
HBsAg微孔板，HBsAg酶标记抗体，HBsAg阳性对照血清，HBsAg阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5试剂储存条件及有效期：
2-8℃避光保存，有效期9个月。
7.仪器设备
7.1仪器名称：
自动酶标仪
7.2仪器厂家：
Rayto
7.3仪器型号：
RT-2100
8.操作步骤
8.1平衡：
将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2配液：
浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：
19稀释后使用。
8.3编号：
将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4加样：
分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50l于相应孔中。
8.5加酶：
分别在每孔中加入酶标记抗体50l，轻拍混匀。
8.6温育：
置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。
8.7洗涤：
用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.8显色：
每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。
8.9终止：
每孔加终止液50l，混匀。
8.10测定：
用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。
9.结果判断与分析
9.1临界值（C.O.）的计算：
临界值=阴性对照孔OD值N×2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。
9.2结果判定：
样品OD值S/C.O>=1者为HBsAg阳性
样品OD值S/C.O<1者为HBsAg阴性
10.质量控制
每次试验用含2ng/mlHBsAg的质控血清同步检测，以S/CO值绘制质控图，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。
11.参考范围：
阴性
12.临床意义：
在血清中HBsAg的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝或为无症状携带者。
13.操作性能：
灵敏度为ng/ml，特异性高。
14.方法局限性
14.1.对于病毒复制较强的病人，病毒量较大，出现HOOK现象，造成假阴性，须将病人血清进行稀释后再重新试验。
14.2.如出现跳孔现象可能造成假阳性。
14.3.样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。
15.注意事项
15.1.每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
15.2.洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3.加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。
如果滴加，滴加前应弃去1—2滴。
滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。
注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4.所有样品都应按传染源处理。
15.5.封口膜使用说明
15.5.1.微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。
在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
15.5.2.微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6.不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
16.当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：
应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
17.参考文献：
全国临床检验操作规程（第四版）。
18.其它：
必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
血清乙型肝炎病毒表面抗体检测（ELISA）
1.原理
在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗原，配以酶标记抗原（HBsAg-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗体（HBsAb）。
2.标本采集
2.1采集前病人准备：
受检者应空腹
2.2标本种类：
血清或血浆
2.3标本要求：
采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3.标本储存：
2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。
4.标本运输：
密封，室温运输。
5.标本拒收标准：
污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6.试剂
6.1试剂名称：
乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒
6.2试剂生产厂家：
英科新创（厦门）科技有限公司。
6.3包装规格：
96Test/Kit
6.4试剂盒组成：
HBsAb微孔板，HBsAb酶标记抗原，HBsAb阳性对照血清，HBsAb阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5试剂储存条件及有效期：
2-8℃避光保存，有效期9个月。
7.仪器设备
7.1仪器名称：
自动酶标仪
7.2仪器厂家：
Rayto
7.3仪器型号：
RT-2100
8.操作步骤
8.1平衡：
将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2配液：
浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：
19稀释后使用。
8.3编号：
将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4加样：
分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50l于相应孔中。
8.5加酶：
分别在每孔中加入酶标记抗体50l，轻拍混匀。
8.6温育：
置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。
8.7洗涤：
用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.8显色：
每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。
8.9终止：
每孔加终止液50l，混匀。
8.10测定：
用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。
9.结果判断与分析
9.1临界值（C.O.）的计算：
临界值=阴性对照孔OD值N×2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。
9.2结果判定：
样品OD值S/C.O>=1者为HBsAb阳性
样品OD值S/C.O<1者为HbsAb阴性
10.质量控制
每次试验用含30mIu/mlHBsAb的质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。
11.参考范围
阴性或阳性
12.临床意义
HBsAb阳性表明存在HBV的保护性抗体。
13.操作性能：
灵敏度高，特异性好。
14.方法局限性：
样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定正相关。
15.注意事项
15.1每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
15.2洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。
如果滴加，滴加前应弃去1—2滴。
滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。
注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4所有样品都应按传染源处理。
15.5封口膜使用说明
15.5.1微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。
在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
15.5.2微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
16.当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：
应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
17.参考文献：
全国临床检验操作规程（第四版）。
18.其它：
必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
血清乙型肝炎病毒e抗原检测（ELISA）
1.原理
在微孔条上预包被被纯化乙肝e抗体（HBeAb），配以酶标记抗原（HBeAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝e抗原（HBeAg）。
2.标本采集
2.1采集前病人准备：
受检者应空腹
2.2标本种类：
血清或血浆
2.3标本要求：
采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3.标本储存：
2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。
4.标本运输：
密封，室温运输。
5.标本拒收标准：
污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6.试剂
6.1试剂名称：
乙型肝炎病毒e抗原诊断试剂盒
6.2试剂生产厂家：
英科新创（厦门）科技有限公司。
6.3包装规格：
96Test/Kit
6.4试剂盒组成：
HBeAg微孔板，HBeAg酶标记抗原，HBeAg阳性对照血清，HBeAg阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5试剂储存条件及有效期：
2-8℃避光保存，有效期9个月。
7.仪器设备
7.1仪器名称：
自动酶标仪
7.2仪器厂家：
Rayto
7.3仪器型号：
RT-2100C
8.操作步骤
8.1平衡：
将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2配液：
浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：
19稀释后使用。
8.3编号：
将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4加样：
分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50l于相应孔中。
8.5加酶：
分别在每孔中加入酶标记抗体50l，轻拍混匀。
8.6温育：
置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。
8.7洗涤：
用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.8显色：
每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。
8.9终止：
每孔加终止液50l，混匀。
8.10测定：
用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记
录结果）。
9.结果判断与分析
9.1临界值（C.O.）的计算：
临界值=阴性对照孔OD值N×2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。
9.2结果判定：
样品OD值S/C.O>=1者为HBeAg阳性
样品OD值S/C.O<1者为HBeAg阴性
10.质量控制：
每次试验用含量为2NCU/ml的HBeAg质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。
11.参考范围：
阴性或阳性
12.临床意义：
HBeAg阳性可作为体内HBV处在复制状态及血清具有传染性的一个标志；持续阳性则揭示转为慢性。
13.操作性能：
灵敏度高，特异性好。
14.方法局限性：
样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。
15.注意事项
15.1每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
15.2洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。
如果滴加，滴加前应弃去1—2滴。
滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。
注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4所有样品都应按传染源处理。
15.5封口膜使用说明
15.5.1微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存
以避免受潮。
在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
15.5.2微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
16.当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：
应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
17.参考文献：
全国临床检验操作规程（第四版）。
18.其它：
必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
血清乙型肝炎病毒e抗体检测（ELISA）
1.原理
在微孔条上预包被被纯化乙肝e抗体（HBeAb），配以酶标记抗原（HBeAb-HRP）、中和抗原（HBeAg）及TMB等其它试剂，采用竞争法原理检测人血清（或血浆）中乙肝e抗体（HBeAb）。
2.标本采集
2.1采集前病人准备：
受检者应空腹。
2.2标本种类：
血清或血浆。
2.3标本要求：
采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3.标本储存：
2-8℃保存不应超过24小时，-20℃不应超过3个月，
-70℃长期保存，应避免反复冻融。
4.标本运输：
密封，室温运输。
5.标本拒收标准：
污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6.试剂
6.1试剂名称：
乙型肝炎病毒e抗体诊断试剂盒
6.2试剂生产厂家：
英科新创（厦门）科技有限公司。
6.3包装规格：
96Test/Kit
6.4试剂盒组成：
HBeAb微孔板，HBeAb酶标记抗原，中和抗原，HBeAb阳性对照血清，HBeAb阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。
6.5试剂储存条件及有效期：
2-8℃避光保存，有效期9个月。
7.仪器设备
7.1仪器名称：
自动酶标仪
7.2仪器厂家：
Rayto
7.3仪器型号：
RT-2100C
8.操作步骤
8.1平衡：
将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2配液：
浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：
19稀释后使用。
8.3编号：
将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4加样：
分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50l于相应孔中。
8.5加酶：
分别在每孔中加入酶标记抗体50l，轻拍混匀。
8.6中和：
分别在每孔中加入中和抗原（HBeAg）50l，轻拍混匀。
8.7温育：
置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。
8.8洗涤：
用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
8.9显色：
每孔加入底物A、B各50l，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。
8.10终止：
每孔加终止液50l，混匀。
8.11测定：
用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。
9.结果判断与分析
9.1临界值（C.O.）的计算：
待测样品为原倍血清时，临界值＝阴性对照孔OD值N×0.2，待测样品为非原倍血清时，临界值＝阴性对照孔OD值N×0.5，（非原倍血清是指稀释血清、质控血清等）。
9.2结果判定：
样品OD值S/C.O<=1者为HBeAb阳性
样品OD值S/C.O>1者为HBeAb阴性
10.质量控制：
每次试验用含量为2NCU/ml的HBeAb质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控,则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。
11.参考范围：
阴性
12.临床意义：
HBeAb阳性可作为体内HBV处在复制状态及血清具有传染性的一个标志。
阳性表示机体已产生免疫力，病毒活力降低，传染性减弱，预后好。
13.操作性能：
灵敏度高，特异性好。
14.方法局限性：
样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定相关。
15.注意事项
15.1每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。
15.2洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。
15.3加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。
如果滴加，滴加前应弃去1-2滴。
滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。
注意勿将试剂滴在孔壁上。
15.4所有样品都应按传染源处理。
15.5封口膜使用说明
15.5.1微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。
在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。
15.5.2微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。
15.6不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。
16.当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：
应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。
17.参考文献：
全国临床检验操作规程（第四版）。
18.其它：
必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。
血清乙型肝炎病毒核心抗体检测（ELISA）
1.原理
在微孔条上预包被被纯化乙肝核心抗原（HBcAg），配以酶标记抗体（HbcAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用竞争抑制法原理检测人血清（或血浆）中乙肝核心抗体（HBcAb）。
2.标本采集
2.1采集前病人准备：
受检者应空腹。
2.2标本种类：
血清或血浆。
2.3标本要求：
采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3.标本
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