QIAxcel全自动毛细管核酸分析系统培训手册DNA版.docx

QIAxcel全自动毛细管核酸分析系统培训手册DNA版.docx

《QIAxcel全自动毛细管核酸分析系统培训手册DNA版.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《QIAxcel全自动毛细管核酸分析系统培训手册DNA版.docx（21页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。

QIAxcel全自动毛细管核酸分析系统培训手册DNA版

QIAxcel全自动毛细管核酸分析系统培训手册

DNA版

基因有限公司生命科学组

一、QIAxcel全自动毛细管核酸分析系统简介

二、QIAxcel全自动毛细管核酸分析系统安装和维护

三、氮气瓶的安装及使用

四、GelCartridege凝胶卡夹的安装及校正

五、培训所需试剂、仪器及耗材

六、DNA样品演示实验

七、BioCalculatorTM软件基本功能及数据分析

八、常见问题解答

一．QIAxcel全自动毛细管核酸分析系统介绍

QIAGEN是全球核酸、蛋白质分离纯化试剂和新技术的权威供应商，总部设在德国。

其主打产品是QIAxcel，用于高通量DNA/RNA分离分析,这个产品广泛用于遗传分析，疾病检测以及食品鉴定等方面。

相比其它同类产品而言，其特点是高效，省时，安全，适用于标准化。

（一）产品介绍：

技术参数：

1． 自动加样全自动化96孔加样；

2． 高通量12通道上样，96孔板连续检测；

3． 无需制胶更换式凝胶试剂盒；

4． 快速分析1－1.3小时/96个样品；

5． 高灵敏度PCR产物检测最低DNA浓度为0.1ng/ul；

6． 高分辨率500bp以下达2－5个bp；

7． 数据显示电泳图谱和峰图

8． 体积小便于搬运；

9． 污染小无敞开式EB污染。

10．重量23kg

（二）BioCalculatorTM软件

1．操作简单，多种分离方法可供选择

2．多种内嵌式方法模板适用各种用途

3．数据分析界面友好：

既可用于定性分析也可用于定量分析，一次完成多组数据分析

4．数字化实验数据采集：

●实验数据以电泳峰图和胶图两种形式显示

●可适时电泳峰图和胶图

●电子化实验数据方便储存和传递

二．QIAxcel全自动毛细管核酸分析系统安装和维护

（一）安装条件

1．位置要求：

稳定水平的操作平台放置设备，远离震荡设备。

2．温度要求：

25℃

3．湿度要求：

40％－95％

4．电源：

100-230V~,50-60Hz,360W（VA）

5．电脑要求：

●Processor处理器：

PentiumIV1.8或更高

●硬盘：

40GB

●内存：

512MBRAM

●显示器：

800x600

●操作系统：

Microsoft®Windows®XP

6．氮气要求：

纯度为99.999%的高纯氮气

7．

（二）维护

用湿布清洁仪器的外表面。

不能灭菌，不需要用化学物质清洁仪器外表面，否则可能会引起表面损坏。

如果矿物油偶尔滴在样品支架或溢出到样品支架时，用热水和肥皂水清洗（和新的卡夹第一次使用时清洗的过程相同）。

凝胶卡夹的储存温度推荐为10℃－30℃，相对湿度为40％－95％。

三．氮气瓶的安装及使用

关于氮气瓶的安装，将由工程师完成或请在工程师指导下完成此工作

1．先将减压阀安装到氮气瓶上

2．

请选择如下图所示规格的转接头，将氮气瓶和仪器连接起来。

安装完成后要确保不能漏气。

3．仪器打开前，先打开氮气瓶总阀，并将减压阀压力调到40psi左右，再开始实验。

4．实验完成后，将减压阀和氮气瓶总阀关闭

四．GelCartridege凝胶卡夹的安装及校正

（一）凝胶卡夹的安装

1．使用前将卡夹中的所有试剂室温平衡，并将卡夹置于盛有DNAWashingSolution的catridegestand中平衡20min.

2．用温和的去污剂清洗盛溶液的盘子，然后用去离子水彻底冲洗干净

3．加8ml的DNAWashingSolution到盛溶液的盘子的WP和WI槽

4．加16ml的SeparationBufferSolution到盛溶液的盘子的BUF槽

5．然后加2ml的矿物油到WP和WI槽，加4ml的矿物油到BUF槽，防治洗液和分离液挥发（图1）

图1

6．加15ul的AlignmentMarker到0.2ml的连管中，每孔加一滴矿物油，然后插入到盛溶液的盘子的MARKER1的位置（图2）

7．加15ul的IntensityCalibrationMarker到彩色的0.2ml的连管中，然后插入到盛溶液的盘子的MARKER2的位置（图2）

图2

8．点击上的按钮，仔细将盛满溶液的盘子放到仪器的对应支架上

9．去掉凝胶卡夹后面的封胶带，打开仪器上的卡夹门，将凝胶卡夹正面朝前插入仪器卡夹内，凝胶卡夹上的加密钥匙插入仪器相应的适配器中，关上卡夹门，凝胶卡夹的ID号将会在仪器的控制面板上显示（图3）。

图3

（二）凝胶卡夹的浓度校正

1．双击

快捷图标，进入软件操作，在下选中（图4）

图4

2．点击按钮（图5A）

图5

3．打开文件，点击（图6）

图6

4．点击绿色的按钮，运行程序，程序结束后，在仪器的控制面板，下选择（图7）

图7

5．校正过程结束后，（Cal）会出现凝胶卡夹的ID的后面（图8C）。

图8

6．去掉仪器控制面板下列表中的和方法，保留方法，并且重新命名样品的名字，双击控制面板上绿色的按钮

7．程序运行完成后，确认所有通道只有一个峰。

8．在下选择Parameters（图9）

图9

9．不要选中和（图10）

图10

10．在结果图表中检查na（normalizedarea）值，所有的通道na值应该在4.500E-003和5.500-003之间，如果超出这个范围，那么必须进行重新校正（图11）

图11

五．培训所需试剂、仪器及耗材

（一）试剂

1．DNAGelCartridge（GC-5000-4）

2．去离子水

（二）仪器及耗材

1．台式离心机

2．移液器

3．0.2mlPCR反应管，Tip头，手套等

以上物品请用户提前准备妥当，我公司培训人员将使用以上物品进行仪器使用的培训工作。

如不具备请及时与培训技术人员联系。

六．DNA样品演示实验

（一）样品准备

PCR样品

提示：

有些PCR的反应kit盐的含量过高，适当稀释能得到更好的结果

（二）实验操作步骤

1．双击

快捷图标，进入软件操作，在下选中

2．点击按钮，将加有样品的PCR管放在仪器96孔板载物台上，最少上样体积10ul

3．选择合适的分离方法，如：

OM500（图12A）

4．输入样品类型、位置和分离重复次数（图12B）

5．点击按钮，输入和样品孔对应的样品名称（图12F）

6．确认所用到的通道均已选中（图12G）

7．检查仪器的状态，Pres1：

OK；Pres2：

OK；SD：

Closed；CD：

Closed。

8．点击，运行程序（图12J）

图12

七．BioculatorTM软件基本功能及数据分析

（一）软件的基本功能

图13InstumentControl

显示序列列表，列出了仪器所有的功能

显示当前凝胶卡夹可以使用的方法

分离样品的类型

分离样品的位置

仪器的吸样时间，可以在0-60s之间选择

样品分离的重复次数

如果选中，仪器将自动从A行加样品，依次到Ｂ、C、D、E、F、G和H行

输入和样品孔对应的每个样品的名字

锁住仪器内的凝胶卡夹

去除仪器内的凝胶卡夹

定位凝胶卡夹到盛溶液的盘子的WP槽

移动盛溶液的盘子和支架，方便更好溶液和放置样品

　上传分离实验中使用的Referencemarker

（二）软件数据分析

1．实验运行结束后，打开，点击（图14）

图14

2．检查和已经打“√”，作为默认设置。

然后点击（图15）

图15

3．打开，点击

4．以Alignmentmarker条带为基础，出现重排结果（图16）。

图16

5．确定DNA样品的大小和浓度

（1）双击Marker通道上面的彩色条带，放大实验结果，确认所有的峰均在对照阈值之上

（2）打开，点击，然后点击，显示Qiaxcel内置的ReferenceMarkers列表。

选中目的Marker，显示目的Marker的条带（图17）

图17

（3）输入第一条和最后一条Alignmentmarker的大小，如第一条为15pb，最后一条为5000bp（图18，图19）。

图18

图19

（4）点击按钮，将结果图表中的“Reltime”“NA”的数据复制到referencemarker图表中对应的位置（图20）。

图20

（5）点击，结合marker名字和实验方法重新命名referencemarker，点击按钮（图21）

图21

（6）打开，点击，条带的大小和浓度出现在实验结果的图表上（图22）。

图22

八．常见问题解答

Q：

仪器不能打开？

A：

1．检查电源是否连接好

2．保险丝断了，更换保险丝

Q：

仪器不能运行？

A：

1．检查样品门和卡夹门是否关闭

2．没有检测到凝胶卡夹的加密钥匙

3．氮气瓶压力太低

4．USB软件key丢失或破裂，重连USB软件key或更换key

Q：

某些通道的峰迁移慢？

A：

通道中有气泡，用Purge方法去除气泡或更换分离buffer。

Q：

不同通道之间Calibrationmarker的信号有差异？

A：

检查新的凝胶卡夹是否进行校正

Q：

Alignmentmarker信号太弱？

A：

Alignmentmarker降解，更换marker

Q：

运行时不产生信号？

A：

1．样品的体积太少，最少10ul

2．毛细管堵塞，用Purge的方法疏通毛细管，如果不行，更换凝胶卡夹

Q：

电泳条带太宽？

A：

1．DNA样品浓度太高，TEbuffer稀释样品，或减少上样的时间，或选用高浓度分离方法（OH500）

2．通道破裂产生高背景，更好凝胶卡夹

Q：

DNA信号太低？

A：

1．DNA样品浓度太低，增加上样的时间，或选用低浓度分离方法（OL500）

2．样品盐浓度太高，去盐或稀释样品