标准菌种管理规程.docx
《标准菌种管理规程.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《标准菌种管理规程.docx（9页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。
标准菌种管理规程
标准菌种管理规程
目的：
规范药品微生物学检定用菌的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。
职责：
QC主管负责菌种的申购、接受、保存、分发，微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
范围：
本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁等。
内容：
1术语
标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。
传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。
工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。
2.标准：
检定菌的申购
QC主管每年根据检定菌种的使用情况（包括临时检验需要），提出购买计划，交由质量管理部部长审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌种）；也可以直接向省（市）药检所购买传代用菌种，购买时，需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制代数。
检定菌的接收
菌种到达实验室后，由QC主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《检定菌接收记录》（附表1）上，内容包括：
名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，贴好标签并储存于2-8C直到需要使用时。
储存期最长不超过5年。
检定菌的保存
工作用菌种的保存
工作用菌种采用斜面低温保存法。
将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至2～8℃冰箱中保存。
此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。
保存时间根据菌种种类而不同，细菌：
1个月；酵母菌：
2个月；霉菌及芽胞：
3个月。
采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡保存法。
用无菌接种环轻轻刮取经冷冻复溶增菌后并接种至平板或琼脂斜面的菌苔，并通过接种环与试管壁之间的轻轻摩擦而使细菌充分扩散到预先装入试管中的无菌纯化水中，调整菌液浓度，使其等同于10号比浊管，向已制备好的菌悬液中加入等体积的无菌甘油（浓度20%），即为10%甘油菌悬液，轻轻振摇，使内容物充分混合，分装于无菌小试管，在-20℃冷冻条件下保存。
此甘油冷冻管为第2代（G2），保存期限为5年。
使用时，取出一支放至室温，转种增菌培养或接种至琼脂斜面复苏，挑取纯菌落传代或工作用。
此种方法主要适用于需氧细菌和酵母菌的保藏（如大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌）。
℃灭菌30分钟,置40℃恒温箱中蒸发水分，经无菌检查后备用。
℃冷冻冰箱中保存。
此法主要适用于霉菌、厌氧菌、放线菌、芽孢杆菌的保存（如枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌等）。
．检定菌的传代
检定菌菌种的传代因冻干菌（标准菌种）与传代用菌种而不完全相同。
℃，45分钟）。
℃，45分钟）。
℃下培养3天（细菌）；23～28℃下培养5天（真菌和酵母菌）。
培养后，首先观察其是否具有典型的菌落形态，然后挑取生长旺盛的单一的纯菌落，划线于平皿培养基，每种菌划4个平皿，以便收集较多的生长旺盛的典型单菌落，进行保存和鉴定。
鉴定时作革兰氏染色、镜检，观察其染色特性及形态特征。
最后再做生化实验以进一步鉴定该菌种。
若在该平板上发现有其它菌落生长，则说明操作有污染或菌种不纯，应将此被污染了的培养物灭活处理，并寻找原因。
应根据其原因采取措施重新分离挑选纯菌落。
当无标准用菌种时，可从省（市）药检所购买菌种作为传代用菌种，不需经过复溶增菌，但应划线接种确认。
将购回无异常的传代用菌种（一般为第3代），根据日常检验工作的需要量，挑取纯菌落转接斜面菌种数支，作为工作用菌种（为第4代），同时，结合菌种的代数和最长保存期限，挑取纯菌落制成浓菌悬液按“”的方法制备甘油冷冻管或液体石蜡管数支，作为传代用菌种（仍为第3代）。
当工作用菌种代数小于5时，可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种。
取在冰箱2～8℃保存的工作用菌种用普通琼脂斜面传代，并将新传代的培养物替代原有的菌种，作为工作用菌种。
也可取用“甘油冷冻管保藏法或液体石蜡覆盖保藏法”保存的菌种，进行复苏，直接作为工作用菌种。
细菌每1个月传代一次；酵母菌每2个月传代一次；霉菌及芽胞每3个月传代一次。
当超过5代，须用传代用菌种传代。
．检定菌种的编号
采用字母加数字表示：
英文缩写字母—代次—传代日期—顺序号菌种的英文缩写字母：
大肠埃希菌（）、金黄色葡萄球菌（）、枯草芽孢杆菌（）、白色念珠菌（）、黑曲霉菌（）、乙型副伤寒沙门菌（）代数用一位带有下标数字的字母表示：
传代用菌种用G表示；工作用菌种用W表示；如G3表示传代用菌种第3代；W3表示工作用菌种第3代。
传代日期用6位数字表示：
年份取最后两位数，月、日分别用两位数。
如2012年1月12日传代的第一支大肠埃希菌作为传代用菌种的编号为：
。
．检定菌种的保管
．检定菌种的领用与使用
．检定菌种（废弃）的销毁
℃、45分钟湿热灭活处理：
新一代菌种制备成功后的上一代菌种；使用完后的菌种和带有标准菌种的器具和培养物；超过有效期的菌种；凡被污染、变异、可疑等异常情况菌种；其他应废弃的菌种。
销毁处理记录》（附表7）。
3．记录归档
本标准涉及的记录由质量管理部保存，保存期5年。
4．附则：
本标准附件二份，附表六份：
附件1：
《传代用菌种保存方法、保存温度、保存期限》
附件2：
《菌种复活、划线用培养基、培养条件》
附表1：
《检定菌接收记录》
附表2：
《检定菌种传代、分离记录》
附表3：
《检定菌种保存、领用登记台账》
附表4：
《检定菌种观察记录》
附表5：
《检定菌种鉴定记录》
附表6：
《检定菌种使用登记台账》
附表7：
《废弃菌种（物品）销毁处理记录》
附件1：
传代用菌种保存方法、保存温度、保存期限
菌种名称
保存方法
保存
温度
保存
期限
大肠埃希菌〔CMCC（B）44102〕
甘油冷冻管
-20℃
5年
金黄色葡萄球菌〔CMCC（B）26003〕
甘油冷冻管
-20℃
5年
枯草芽孢杆菌〔CMCC（B）63501〕
液体石蜡管
-20℃
5年
白色念珠菌〔CMCC（F）98001〕
液体石蜡管
-20℃
5年
黑曲霉菌〔CMCC（F）98003
液体石蜡管
-20℃
5年
乙型副伤寒沙门菌〔CMCC（B）50094〕
甘油冷冻管
-20℃
5年
附件2：
菌种复活、划线用培养基、培养条件
菌种名称
复活培养基
划线用培养基
培养
温度
培养
时间
大肠埃希菌
TSB或营养肉汤
TSA或营养琼脂培养基平皿
32C
24h
金黄色葡萄球菌
枯草芽孢杆菌
乙型副伤寒沙门菌
白色念珠菌
TSB或改良马丁
SDA或玫瑰红钠培养基平皿
24C
48h
黑曲霉
7d
附表1：
《检定菌接收记录》
记录名称
检定菌种接收记录
代码
页次
1
共1页
名称及编号
数量
代数
来源
接收日期
接收人
检查情况
保存条件
附表2：
《检定菌种传代、分离、保存记录》
记录名称
检定菌种传代、分离记录
代码
页次
1
共1页
名称及编号
购进（领取）日期
年月日
来源
传代前菌种保存方法
传代用培养基
传代日期
传代用
菌种编号
总数量
传代用菌种
工作用菌种
操作人
数量
编号
有效期
保存方法
数量
编号
有效期
保存方法
分离与纯化过程
纯度检查结果
操作人：
复核人：
附表3：
《检定菌种使用登记台账》
记录名称
检定菌种保存、领用登记台账
代码
页次
1
共1页
收到日期
名称及编号
数量
接收人
移交人
领用日期
用途
数量
发放人
领用人
附表4：
《检定菌种观察记录》
记录名称
检定菌种观察记录
代码
页次
1
共1页
日期
冰箱温度（℃）
塞子是否松动
是否霉变
处理措施
观察人
附表5：
《检定菌种鉴定记录》
记录名称
检定菌种鉴定记录
代码
页次
1
共1页
菌种名称及编号
鉴定原因
开始鉴定日期
鉴定人
复核人
年月日
鉴定
项目
菌落形态
革兰染色
显微镜下形态
典型生化反应特征
鉴定结论
日期：
年月日
附表6：
《检定菌种使用登记台账》
记录名称
检定菌种使用登记台账
代码
页次
1
共1页
领用日期
名称及编号
数量
使用人
制备菌悬液浓度（CFU/ml）
用于检验的产品批号
附表7：
《废弃菌种（物品）销毁记录》
记录名称
废弃菌种（物品）销毁处理记录
代码
页次
1
共1页
日期
被处理菌种（物品）名称
销毁原因
处理方式
批准人
操作人
监督人
备注：
废弃菌种要标明编号、数量（支）
升级会员 