病原生物学和免疫学 肠道杆菌.docx

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病原生物学和免疫学肠道杆菌

南昌大学抚州医学分院教案

教师姓名

王敏

课程名称

病原生物学和免疫学

学时

2学时

授课题目

肠道杆菌霍乱弧菌

授课时间

2011年5月，第11周

主要内容：

1、霍乱弧菌的致病性：

致病物质、致病机理、所致疾病的临床表现

2、霍乱弧菌的微生物检查方法

3.沙门氏菌的致病性（致病物质、致病机理及所致疾病的临床表现），微生物学检查法（取材、检查步骤、肥达氏反应的定义、结果判断及注意点）

4.沙门氏菌的生化反应特性、抗原构造、免疫性，防治原则

目的与要求：

一、掌握

1、霍乱弧菌的致病性：

致病物质、致病机理、所致疾病的临床表现；霍乱弧菌的微生物检查方法

2、沙门氏菌的致病性（致病物质、致病机理及所致疾病的临床表现），微生物学检查法（取材、检查步骤、肥达氏反应的定义、结果判断及注意点）

二、熟悉

霍乱弧菌的生物学性状：

形态、染色、动力、培养、抵抗力

三、了解

1、霍乱弧菌的免疫性、防治原则

2、沙门氏菌的抗原构造、免疫性，防治原则

重点与难点：

霍乱弧菌的致病性：

致病物质、致病机理、所致疾病的临床表现

媒体与教具：

多媒体、课件结合板书

（首页）

南昌大学抚州医学分院教案

教学内容与方法

时间分配

一、复习上堂课的内容：

采用提问的方式。

二、沙门菌属

1.生物学特性

2.致病性与免疫性

3.微生物学检查

4.防治原则

三、霍乱弧菌

1.概述

2.生物学特性：

重点内容，结合课件的图片讲解。

3.致病性与免疫性：

重点内容

1致病物质

2所致疾病

3免疫性

4.微生物学检查

5.防治原则：

详细讲解

四、小结：

本堂课的重难点内容。

4’

3’

11’

12’

5’

4’

6’

7’

6’

4’

5’

8’

5’

（续页）

南昌大学抚州医学分院教案

课堂设问：

霍乱弧菌的致病性：

致病物质、所致产疾病的特点；肉毒梭菌致病机理、所致疾病？

课后复习思考题及作业题：

肥达试验的正常值及临床意义

教学实施情况及分析（此项内容在课程结束后填写）：

教学效果良好，按计划完成本次教学任务。

（尾页）

南昌大学抚州医学分院讲稿

第三节沙门菌属

　　沙门菌属（Salmonella）是一群寄生在人类和动物肠道中，生化反应和抗原结构相关的革兰阴性杆菌。

根据生化反应，DNA同源性等，沙门菌属分为肠道沙门菌（S.enterica）和邦戈沙门菌（S.bongori）两个种。

肠道沙门菌又分为6个亚种，即肠道亚种（Subsp.enterica）、萨拉姆亚种（subsp.salamae）、亚利桑那亚种（subsp.enterica）、双亚利桑那亚种（subsp.diarigonae）、豪顿亚种（subap.houtenae）、和英迪加亚种（subsp.indica）。

　　沙门菌属细菌的血清型在2000种以上，但对人致病的只是少数，例如引起肠热症的伤寒、副伤寒的沙门菌。

其他对动物的致病，有些沙门菌偶可传染给人，引起食物中毒或败血症，如鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、鸭沙门菌、猪霍乱沙门菌等十余种。

　　一．生物学性状

　　大小0.6-1.0×2-4μm。

除鸡沙门菌和雏沙门菌（S.pullorum）等个别外，都有周身鞭毛。

一般无荚膜。

均无芽孢。

　　营养要求不高，在普通琼脂平板上形成中等大小、无色半透明的S型菌落。

　　不发酵乳糖或蔗糖。

对葡萄糖、麦芽糖和甘露糖发酵，除伤寒沙门菌不产气外，其它沙门菌均产酸产气。

生化反应对沙门菌属的种和亚种鉴定有重要意义。

　　沙门菌属细胞的抗原主要有0和H两种抗原，少数菌中尚有一种表面抗原，功能上与大肠杆菌的K抗原类同。

因一般认为它与毒力（virulence）有关，故称Vi抗原。

　　沙门菌0抗原至少有58种，以阿拉伯数字顺序排列，现已排至67（其中有9种被删除）。

每个沙门菌的血清型含一种或多种O抗原。

凡含有相同抗原组分的归为一个组，则可将沙门菌属分成A-Z、O51-O63、O65-O67　　42个组。

引起人类疾病的沙门菌大多数在A-E组。

　　据Popoff等报道，1995年时沙门菌属血清型已有2399个，其中绝大部分分布在肠道沙门菌各亚种：

计肠道亚种1416。

萨拉姆亚种477、亚利桑那亚种94、双亚利桑那亚种371、豪顿亚种66和英迪加亚种10个血清型。

至于邦戈沙门菌，仅19个血清型。

　　沙门菌O抗原分第I相和第II相两种。

第I相特异性高，又称特异相，以a、b、c……表示。

第II相特异性低，可为多种沙门菌共有，故亦称非特异相，以1、2、3……表示。

一个菌株同时有第I相和第II相H抗原的称双相菌，仅有一种相者为单相菌。

每一组沙门菌根据H抗原不同，可进一步将组内沙门菌分成不用菌型。

　　沙门菌的表面抗原主要是Vi抗原，新分离的伤寒沙门菌和希氏沙门菌（原称丙型副伤寒沙门菌，S.paratyphiC）有Vi抗原。

Vi抗原由聚-N-乙酸-D-半乳糖胺糖醛酸组成，不稳定，经60℃加热、石炭酸处理或传代培养后易消失。

Vi抗原存在于菌表面，可阻止O抗原与其相应抗体的凝集反应。

　　二、致病性与免疫性

　　致病物质沙门菌有较强的内毒素，并有一定的侵袭力。

个别菌尚能产生肠毒素。

　　1．侵袭力沙门菌有毒株能侵袭小肠粘膜。

菌经一类称为M（microfold,微皱摺）细胞的特殊上皮细胞进入机体。

其步骤是菌先粘附至M细胞表面；引发细胞肌动蛋白重排、内在化，菌存在于吞噬泡；吞噬泡转送未经降解的菌并释放至上皮下区，菌为固有层中的巨噬细胞吞噬。

沙门菌的粘附和穿入宿主细胞，由染色体上的侵袭素基因inv介导。

　　伤寒沙门菌和希氏沙门菌在宿主体内可以形成Vi抗原。

该抗原具有微荚膜功能，能抗御吞噬细胞的吞噬和杀伤，并阻挡抗体、补体等破坏菌体作用。

　　2．内毒素沙门菌死亡后释放出的内毒素，可引起宿主体温升高、白细胞数下降，大剂量时导致中毒症状和休克。

这些与内毒素的激活补体替代途径产生C3a、C5a等，以及诱发免疫细胞分泌TNT-α、IL-1、IFN-γ等细胞因子有关。

　　3．肠毒素个别沙门菌如鼠伤寒沙门菌可产生肠毒素，其性质类似ETEC产生的肠毒素。

　　所致疾病只对人类致病的仅有引起伤寒和副伤寒的沙门菌。

有不少沙门菌是人畜共患病的病原菌。

动物宿主范围很广。

家畜有猪、牛、马、羊、猫、狗等，家禽有鸡、鸭等；野生动物如狮、熊、鼠类，以及冷血动物、软体动物、环形动物、节肢动物等均可带菌。

人类因食用患病或带菌动物的肉、乳、蛋或被病鼠尿污染的食物等而罹患。

　　人类沙门菌感染有4种类型：

　　1．肠热症包括伤寒沙门菌引起的伤寒，以及甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌（原称乙型副伤寒沙门菌，S.paratyphiB）、希氏沙门菌引起的副伤寒。

伤寒和副伤寒的致病机制和临床症状基本相似，只是副伤寒的病情较轻，病程较短。

沙门菌是胞内寄生菌。

被巨噬细胞吞噬后，由耐酸应答基因（acidtoleranceresponsegene,atr）介导使菌能在吞噬体的酸性环境中生存和繁殖，同时菌产生过氧化氢酶和超氧化物歧化酶等保护菌勿受胞内杀菌机制的杀伤。

部分菌通过淋巴液到达肠系膜淋巴结大量繁殖后，经胸导管进入血流引起第一次菌血症。

病人出现发热、不适、全身疼痛等前驱症状。

菌随血流进入肝、脾、肾、胆囊等器官并在其中繁殖后，再次入血造成第二次菌血症。

该时症状明显，持续高热，出现相对缓脉，肝脾肿大，全身中毒症状显著，皮肤出现玫瑰疹，外周血白细胞明显下降。

胆囊中菌通过胆汁进入肠道，一部分随粪便排出体外，另一部分再次侵入肠壁淋巴组织，使已致敏的组织发生超敏反应，导致局部坏死和溃疡，严重的有出血或肠穿孔并发症。

肾脏中的病菌可随尿排出。

以上病变在疾病的第2-3周出现。

若无并发症，自第2-3周后病情开始好转。

　　2．胃肠炎（食物中毒）是最常见的沙门菌感染，约占70%。

由摄入大量（＞108）鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌等污染引起。

潜伏期6-24小时。

起病急，主要症状为发热、恶心、呕吐、腹痛、水样泻，偶有粘液或脓性腹泻。

严重者伴迅速脱水，可导致休克、肾功能衰竭而死亡，此大多发生在婴儿、老人和身体衰弱者。

一般沙门菌胃肠炎多在2-3天自愈。

　　3．败血症多见于儿童和免疫力低下的成人。

病菌以猪霍乱沙门菌、希氏沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌等常见。

症状严重，有高热、寒战、厌食和贫血等。

败血症因病菌侵入血循环引起，因而菌可随血流导致脑膜炎、骨髓炎、胆囊炎、心内膜炎等发生。

　　4．无症状带菌者约有1%-5%伤寒或副伤寒患者，在症状消失后1年仍可在其粪便中检出有相应沙门菌。

这些菌留在胆囊中，成为人类伤寒和副伤寒病原菌的储存场所。

其他沙门菌的带菌者很少，不到1%，故在人类的感染中不是主要的传染源。

　　免疫性肠热症沙门菌侵入宿主1之后，主要在细胞内生长繁殖，因而要彻底杀灭这类胞内寄生菌，特异性细胞免疫是主要防御机制。

在致病过程中，沙门菌亦可有存在于血流和细胞外的阶段，故特异性体液抗体也有辅助杀菌作用。

胃肠炎的恢复与肠道局部生成SIgA有关。

　　三、微生物学检查法

　　标本肠热症因病程不同采取不同标本。

第1周取外周血，第1-3周取骨髓液，第2周起取粪便和尿液。

胃肠炎取粪便、呕吐物和可疑食物。

败血症取血液。

　　分离培养和鉴定血液和骨髓液需要增菌，然后再划种于血琼脂平板；粪便和经离心的尿沉淀物等直接接种于肠道鉴别培养基或SS（Salmonella-Shigella）选择培养基。

37℃孵育24小时后，挑取无色半透明的乳糖不发酵菌落接种至双糖或三糖铁培养基。

若疑为沙门菌，再继续作系列生化反应，并用沙门菌多价抗血清作玻片凝集试验予以确定。

　　近有学者采用SPA协同凝集试验、对流免疫电泳、胶乳凝集试验和ELISA法等，来快速早期诊断粪便、血清或尿液中的沙门菌等可溶性抗原。

　　分子生物学技术也可用于沙门菌感染中。

基因探针可检出标本中的伤寒沙门菌量需1000个；而PCR法对10个伤寒沙门菌就可检出。

　　在流行病学调查和传染源追踪中，Vi噬菌体分型只是一种常用方法。

标准Vi噬菌体有33个型，其特异性比血清学分型更为专一。

　　血清学诊断肠热症由伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌、肖氏沙门菌、希氏沙门菌所引起，病程长。

因目前使用抗生素普遍，肠热症的症状常不典型，临床标本阳性分离率低，故血清学试验仍有其协助诊断意义。

用于肠热症的血清学试验有肥达（Widal）试验、间接血凝法、ELISA法等，其中肥达试验仍较普及。

　　肥达试验是用已知伤寒沙门菌菌体（O）抗原和鞭毛（H）抗原，以及引起副伤寒的甲型副伤寒、肖氏沙门菌希氏沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清作试管或微孔板凝集试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。

　　肥达试验结果的解释必须结合临床表现、病程、病史，以及地区流行病学情况。

　　1．正常值人们因沙门菌隐性感染或预防接种，血清中可含有一定量的有关抗体，且其效价随地区而有差异。

一般是伤寒沙门菌O凝集效价≥1：

80，H凝集效价≥1：

160，引起副伤寒的沙门菌H凝集效价≥1：

80时才有诊断价值。

　　2．动态观察有时单次效价增高不能定论，可在病程中逐周复查。

若效价逐次递增或恢复期效价比初次≥4倍者始有意义。

　　3．O与H抗体的诊断意义患伤寒或副伤寒后，O与H在体内的消长情况不同。

IgM类O抗体出现较早，持续约半年，消退后不易受非伤寒沙门菌等病原体的非特异刺激而重现。

IgG类H抗体则出现较晚，持续时间长达数年，消失后易受非特异性病原刺激而能短暂地重新出现。

因此，O、H凝集效价均超过正常值，则肠热症的可能性大；如两者均低，患病可能性小；若O不高H高，有可能是预防接种或非特异性回忆反应；如O高H不高，则可能是感染早期或与伤寒沙门菌O抗原有交叉反应的其他沙门菌（如肠炎沙门菌）感染。

　　4．其他有少数病例，在整个病程中，肥达试验始终在正常范围内。

其原因可能由于早期使用抗生素治疗，或患者免疫功能低下等所致。

　　伤寒带菌者的检出分离出病原菌是最可靠的方法。

标本采取可疑者粪便、肛拭、胆汁或尿液，但检出率不高。

一般可先用血清学方法检测可疑者Vi抗体效价，若≥1：

10时，再反复取粪便等标本进行分离培养，以确定是否为伤寒带菌者。

　　四、防治原则

　　伤寒、副伤寒的免疫预防，过去一直沿用皮下接种死疫苗。

虽有一定的保护作用，但效低、副反应大，不够理想。

　　减毒口服活疫苗是研究方向。

目前以伤寒沙门菌Ty21a活疫苗较好。

伤寒菌Ty21a株系尿苷二磷酸半乳糖-4-差向异构酶缺失株（galE突变株）。

由于酶的缺陷，在半乳糖存在时虽能合成有免疫原性的细胞壁LPS；但同时因半乳糖中间产物的堆积，阻碍代谢过程的完成，致使细菌生长停顿渐趋死亡。

此可解说为何Ty21a菌在接种者体内能够短期生存，诱发免疫应答的原因。

经志愿者试验，口服Ty21a活疫苗后，粪便中排菌仅一天，表明该菌在人体内不能持续生长繁殖。

用有毒株攻击，攻击菌很快被排出，提示经口服免疫后的肠道已产生阻止病菌粘附的功能。

又经现场试验，Ty21a活疫苗安全、副反应小，接种者有显著免疫以防护作用，有效期至少3年。

霍乱弧菌

霍乱弧菌（V.cholerae）是引起烈性传染病霍乱的病原体，二千多年前已有记载。

自1817年以来，已发生过7次世界性霍乱大流行，前6次均由霍乱弧菌古典生物型引起，1961年开始的第7次大流行由霍乱弧菌ElTor生物型引起。

1992年一个新的流行株O139（Bengal）在沿孟加拉弯的印度和孟加拉一些城市出现，并很快传遍亚洲，这是首次由非O1群霍乱弧菌引起的流行。

　　一、生物学性状

　　形态与染色霍乱弧菌菌体大小为0.5～0.8?

1.5~3?

m。

从病人新分离出的细菌形态典型，呈弧型或逗点状。

但经人工培养后，细菌常呈杆状而不易与肠道杆菌区别。

革兰染色阴性。

特殊结构有菌毛，无芽胞，有些菌株（包括O139）有荚膜，在菌体一端有一根单鞭毛。

若取病人米泔水样粪便或培养物作悬滴观察，细菌运动非常活泼，呈穿梭样或流星状。

　　培养特性与生化反应兼性厌氧，营养要求不高。

生长繁殖的温度范围广（18~37?

），故可在外环境中生存。

耐碱不耐酸，在pH8.8~9.0的碱性蛋白胨水或碱性琼脂平板上生长良好，因其它细菌在此pH中不易生长，故初次分离霍乱弧菌常用碱性蛋白胨水增菌。

霍乱弧菌可在无盐环境中生长，而其它致病性弧菌则不能。

霍乱弧菌为过氧化氢酶阳性，氧化酶阳性，能发酵很多常见的单糖、双糖和醇糖，如葡萄糖、蔗糖和甘露醇，产酸不产气；不分解阿拉伯胶糖；能还原硝酸盐，吲哚反应阳性。

　　抗原构造与分型　　霍乱弧菌有耐热的0抗原和不耐热的H抗原。

根据0抗原不同，现已有155个血清群，其中O1群、O139群引起霍乱，其余的血清群分布于地面水中，可引起人类胃肠炎等疾病，但从未引起霍乱的流行。

H抗原无特异性，免疫扩散试验表明所有霍乱弧菌拥有相同的H抗原。

　　O1群霍乱弧菌根据其菌体抗原由3种抗原因子A、B、C组成，又可分为3个血清型：

小川型（Ogawa）、稻叶型（Inaba）、和彦岛型（Hikojima）。

　　根据表型差异，O1群霍乱弧菌的每一个血清型还可分为2个生物型，即古典生物型（classicalbiotype）和ElTor生物型（ElTorbiotype）因在埃及西奈半岛ElTor检疫站首次分离出而命名）。

古典生物型不溶解羊红细胞，不凝集鸡红细胞，对50IU的多粘菌素敏感，可被第IV群噬菌体裂解，而ElTor弧菌则完全相反。

　　O139群在抗原性方面与O1群之间无交叉，序列分析发现O139群失去了O1群的0抗原基因，出现了一个约36kb的新基因，编码与O1群不同的脂多糖抗原和荚膜多糖抗原，但与O22和O155等群可产生抗原性交叉。

在遗传性方面，如核糖型，限制性酶切电泳图谱，外膜蛋白，毒性基因等则与O1群的古典型和ElTor生物型的流行株相似。

　　抵抗力ElTor生物型和其它非01群霍乱弧菌在外环境中的生存力较古典型为强，在河水、井水及海水中可存活1~3周，有时还可越冬。

本菌不耐酸，在正常胃酸中仅能存活4分钟。

55?

C湿热15分钟，100?

C煮沸1~2分钟，0.5ppm氯15分钟能杀死霍乱弧菌。

以1：

4比例加漂白粉处理病人排泄物或呕吐物,经1小时可达到消毒目的。

　　二、致病性

　　致病物质霍乱弧菌的致病物质涉及到染色体上多个基因，它们主要包括由ToxR蛋白调控的ctxA、ctxB、tcp、zot、ace等基因，另外还有二个不受ToxR蛋白调控的毒力因子基因hlyA和hap。

　　1．霍乱肠毒素是目前已知的致泻毒素中最为强烈的毒素，是肠毒素的典型代表。

由一个A亚单位（分子量为27.2kDa）和5个相同的B亚单位（每个亚单位分子量为11.7kDa）构成的一个热不稳定性多聚体蛋白，分别由结构基因ctx（choleratoxin）A和ctxB编码。

ctxAB操纵子位于染色体上称作核心区的部位，核心区的两端为重复序列（RS1）。

霍乱弧菌古典生物型染色体上广泛散布着以2拷贝ctx为一组的CTX单元，。

ElTor生物型染色体上CTX则为多拷贝随机分布。

B亚单位可与小肠粘膜上皮细胞GM1神经节苷脂受体结合，介导A亚单位进入细胞，A亚单位在发挥毒性作用前需经蛋白酶作用裂解为A1和A2两条多肽。

A1作为腺苷二磷酸核糖基转移酶可使NAD（辅酶I）上的腺苷二磷酸核糖转移到G蛋白上，称GS，GS的活化可使细胞内cAMP水平升高，主动分泌Na+、K+、HCO3—和水，导致严重的腹泻与呕吐。

　　此外，在ctx操纵子上游还存在两个编码毒性相关的zot（zonulaoccludenstoxin，小带联结毒素）、ace（accessorycholeraenterotoxin）基因。

在实验兔中，其编码产物Zot能增加肠粘膜的通透性；Ace使结扎的回肠段中液体聚积。

志愿者口服ctxAB缺失的基因工程变异株产生的轻度腹泻可能与这二个毒性基因有关。

　　2．鞭毛、菌毛及其它毒力因子霍乱弧菌活泼的鞭毛运动有助于细菌穿过肠粘膜表面粘液层而接近肠壁上皮细胞。

细菌的普通菌毛是细菌定居于小肠所必须的因子。

只有粘附定居后方可致病。

与此相关基因有acf和tcpA。

Acf（accessorycolonizationfactor）编码粘附素；tcpA（toxincoregulatedpilusA）编码菌毛蛋白中一个分子量为20.5kDa的重要亚单位。

实验发现使tcp失活后，变异株即失去定居功能和致泻特性。

其他毒力因子还有hlyA（hemolytic-cytolyticA）基因编码的具有溶血-溶细胞的蛋白；hap（hemagglutinin/protease）基因编码的有助于细菌从死亡细胞上解离的血凝素/蛋白酶。

　　O139群除具有上述O1群的致病物质和相关基因外，还存在多糖荚膜和特殊LPS毒性决定簇，其功能是抵抗血清中杀菌物质和能粘附到小肠粘膜上，不表达LPS决定簇和荚膜的TnphoA突变株则对血清易感。

　　所致疾病引起烈性肠道传染病霍乱，为我国的甲类法定传染病。

在自然情况下，人类是霍乱弧菌的唯一易感者。

在地方性流行区，除病人外，无症状感染者也是重要传染源。

传播途径主要是通过污染的水源或食物经口摄入，人与人之间的直接传播不常见。

在正常胃酸条件下，需要进入大量的细菌（108）方能引起感染，但当胃酸低时，感染剂量可减少到103~105个细菌。

病菌到达小肠后，粘附于肠粘膜表面并迅速繁殖，不侵入肠上皮细胞和肠腺，细菌在繁殖过程中产生肠毒素而致病。

O1群霍乱弧菌感染可从无症状或轻型腹泻到严重的致死性腹泻，霍乱弧菌古典生物型所致疾病较Eltor生物型严重。

典型病例一般在吞食细菌后2~3天突然出现剧烈腹泻和呕吐，在疾病最严重时，每小时失水量可高达1升，排出如米泔水样腹泻物。

由于大量水分和电解质丧失而导致失水，代谢性酸中毒，低碱血症和低容量性休克及心力不齐和肾衰竭，如未经治疗处理，病人死亡率高达60%，但若及时给病人补充液体及电解质，死亡率可小于1%。

O139群霍乱弧菌感染比O1群严重，表现为严重脱水和高死亡率，又成人病例所占比例较高〈70%，而O1群霍乱弧菌流行高峰期，儿童病例约占60%。

　　病愈后一些患者可短期带菌，一般不超过2周，个别ElTor型病例病后可带菌长达数月或数年之久。

病菌主要存在于胆囊中。

　　三、免疫性

　　对O1群霍乱弧菌感染的研究和历次霍乱流行的观察，表明感染霍乱弧菌后，机体可获得牢固免疫力，再感染少见。

病人发病数月后，血液中和肠腔中可出现保护性的抗肠毒素抗体及抗菌抗体，抗肠毒素抗体主要针对霍乱毒素B亚单位，抗菌抗体主要针对O抗原。

肠腔中的sIgA可凝集粘膜表面的病菌，使其失去动力；可与菌毛等粘附因子结合，阻止霍乱弧菌粘附至肠粘膜上皮细胞；可与霍乱肠毒素B亚单位结合，阻断肠毒素与小肠上皮细胞受体作用。

霍乱弧菌引起的肠道局部粘膜免疫是霍乱保护性免疫的基础。

　　感染O139群的病人大多为成年人，表明以前感染O1群获得的免疫对O139群感染无交叉保护作用。

O139群感染后的免疫应答与O1群基本一致。

家兔肠道结扎实验和小鼠攻击实验证明，O139群的保护性免疫以针对脂多糖和荚膜多糖的抗菌免疫为主，抗毒素免疫为辅。

O1群的脂多糖O抗原与O139群存在显著差异，且还缺少荚膜多糖表面抗原，故其引起的免疫不能交叉保护O139群的感染。

　　四、微生物学检查法

　　霍乱是烈性传染病，对首例病人的病原学诊断应快速、准确，并及时作出疫情报告。

　　标本病人粪便，肛拭；流行病学调查还包括水样。

霍乱弧菌不耐酸和干燥。

为避免因粪便发酵产酸而使病菌灭活，标本应及时培养或放入Cary-Blair保存液中运输；肠道病原菌常用的甘油盐水缓冲保存液不适宜。

　　直接镜检革兰染色阴性弧菌，悬滴法观察细菌呈穿梭样运动有助于诊断。

　　分离培养常将标本首先接种至碱性蛋白胨水增菌，37?

C孵育6-8小时后直接镜检并作分离培养。

目前常用的选择培养基为TCBS，该培养基含有硫代硫酸盐、枸橼酸盐、胆盐及蔗糖，霍乱弧菌因分解蔗糖呈黄色菌落。

挑选可疑菌落进行生化反应及与O1群多价和单价血清作玻片凝集反应。

目前还需与O139群抗血清做凝集反应。

其它分离培养基还有碱性平板、血平板和TTGA培养基等。

　　五、防治原则

　　改善社区环境，加强水源管理；培养良好个人卫生习惯，不生食贝壳类海产品等是预防霍乱弧菌感染和流行的重要措施。

　　疫苗预防长期以来使用O1群霍乱弧菌死菌苗肌肉注射，虽可增强人群的特异性免疫力，但保护力仅为50%左右，且血清抗体持续时间较短，仅为3~6个月。

在认识到肠道局部免疫对霍乱预防起主要作用后，目前霍乱疫苗预防的重点已转至研制口服菌苗的方向上，包括B亚单位-全菌灭活口服疫苗、基因工程减毒活菌苗（用基因工程技术去除O1群霍乱弧菌野生株DNA中大部分毒力基因的活疫苗）、带有霍乱弧菌几个主要保护性抗原的基因工程疫苗等。

其中前两种疫苗已进行过大规模人群试验，对其有效保护率和保护时间正在进行评估，且在某些国家已获准使用。

0139尚无预防性疫苗，候选菌苗正在研制中，思路是制成包括预防O1群和O139群霍乱弧菌感染的二价菌苗。

　　及时补充液体和电解质，预防大量失水导致的低血容量性休克和酸中毒是治疗霍乱的关键；抗生素的使用可减少外毒素的产生，加速细菌的清除，用于霍乱的抗菌药物有四环素、强力霉素、呋喃唑酮、氯霉素和复方SMZ-TMP等。

但带有多重耐药质粒的菌株在