液质联用操作规程.docx

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液质联用操作规程

液质联用仪操作规程

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SoPI-XeVO-TQS

FSIDC

1•适用范围

本设备配备ACQU1TYJPLC液相色谱仪、TQSMS/MS质谱仪，适用于食品、药

品中各种有机物的定性、定量分析，是一种具有高灵敏度的检测仪器，仪器由主机、计算机和数据处理软件等组成。

2•职责

2.1操作人员按照本规程操作仪器，认真填写实验使用记录。

2.2保管人员负责对仪器进行定期维护和保养。

2.3科室负责人负责监督检查规程的执行。

3•操作程序

日常操作步骤：

准备UPLC—-设置样品表一-一运行样品一-定量一-打印报告。

注：

如果一个星期内不运行样品请不要关质谱仪，使其保持真空。

建立新方法和PrOjeCt的操作步骤：

准备UPLC—建立新的PrOjeCt—用标准品调谐一编辑质谱方法一编辑UPLC方法一-设置样品表一-运行样品一-定量一-一打印报告。

3.1开机：

3.1.1彻底开机顺序（仪器已关闭）

确定MS及其它仪器电源电缆已连接，开氮气发生器、开氮气，小表＜0.lmpa0

打开计算机电源＞等待Windows正常启动＞电脑界面右下角网络图标红叉。

打开UPLC自动进样器电源，等到电脑界面右下角网络图标出现感叹号！

。

打开UPLC泵电源，等约30s或者是有响声。

打开质谱电源，等待5min，离子源透视镜里面亮。

打开MaSSlynx软件，masslynx主界面左侧inStrUmentMasstune界面菜单

栏VaCUUmpump同样界面左侧偏上diagnosticsvacuumanalyserMSIturbo

speed[%]要在5分钟内升到80。

至少抽真空4个小时〉查看真空状态主界面massconsole--~面左侧xevotqmsdetector力卩号展开msdisplay＞碰撞室真空

度＞达

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至U7・xe-5mbar。

3.1.2日常开机顺序（仪器未关闭）

开氮气发生器、开氮气，小表<0.lmpa,打开MaSSlynx软件，进入丄作站。

3.2建立项目

点击fileH的PrOjeCtWiZard，出现对话框，单击yes出现对话框，输入

PrOjeCt,IoCatiOn为C:

\MSDATA单击next，选择CreateexistingPrOjeCtastemplate,并以c:

\ma.sslynx\default,pro为模板，单击finish•点击0K0

3.3准备UPLC系统

准备液相的一般流程：

准备流动相〉准备样品〉灌注二元泵>灌注自动进

样器>建立液相方法〉平衡液相

3.3.1.准备流动相

用0.22Um的膜过滤缓冲液，所有的缓冲液和超纯水都要新配制，超纯水和缓冲液

使用不得超过二天，缓冲盐一定要是可挥发的，而且浓度不要大于10mMO

3.3.2.样品要求

所有样品都要用流动相初始梯度比例的溶剂来溶解，并用o.22Um的膜过滤。

3.3.3灌注二元泵

在MaSSlynx主界面，单击MSCOnSOle进入UPLC交互显示界面，点击左栏ACqUity

UPLCSyStem>COntrol>StartUPSyStem单击QSM,选择需要用到的流动相位置，如A和B,选择sealwash,时间设为3分钟。

单击SM,选择StrongWaSh5CyCIeS,SamPIeSyringe20

单击EqUilibratetoMethod，将流速设为0，单击Start开始灌注•时间大约为9min左右。

设定流速，平衡液相

在MaSSlynx主界面，单击InletMethod图标，打开液相方法编辑窗口，单击StatUS>ACQUITYAdditionalStatus,进入液相控制台，单击A或B或流速的位置，出现流速、比例设定对话框，设定液相流速与比例，单击对勾，开始平衡液相，如果后面要做调谐，可设定流速0.2ml/min,有机相与水相的比例为50:

50。

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3・4准备质谱

3.4.1.计算化合物单同位素质量数

MaSSlynx主界面>单击Tools>MolecularWeightCalculator,输入化合物的分子式

（大写-注意C、Br等正确的输入方法），注意选单同位素MOnOiso,IonMode:

离子化模式，+ve正离子，-Ve负离子，单击Calculate。

3.4.2用IntelliStart进行自动调谐

在MaSSlynx主界面单击MSTune图标，打开调谐窗口，

单击IOnMode>ES+或ES-,单击APIGaS图标打开氮气，单击打开高压选择MSMode图标，设定液相流速0.2ml/min,水：

乙月青的比例为50:

50。

把标准品调谐液放入质谱仪塑料瓶位置处的A（或B或C）号位（注:

浓度在200PPb

左右）单击FluidiCS选择ReSerVOir为A,FlowState为LC模式，点击PUrge图标。

PUrge结束后，将F10WState改为Combine模式，设定Function为MSISCarn

MaSS为计算出化合物的质量数，SPan为5,点击进样，开始进样，直到离子的响应比

较稳定。

保存调谐文件：

F订e>SaVeA至已建的项目下。

在MaSSlynx主界面，选择MSConsole>XevoTQMSDeteCtOr选择Intellistart,选择SamPIeTUneandDevelopMethod,ES+单击Start图标，出现Intellistart自动调谐编辑窗口，选择SWitChtoAdVaneedmode，输入Compoundname化合物名

选择

称），MOleCularMass/Formula（分子量或分子式）AddUCtA+（[M+H]+,

LoadEXiStingSamPIeTUne，在SamPIeTUneName方框后的“。

。

。

”处调用开始保存的调谐文件，在DeVelOPMRMMethod前的方框打钩，并在方框出输入MRM方法的文件名，路径为已建的项目卜。

在PrintRePOrt前方框打钩,ConeVoltage,Collision

Energy处为默认值，FlUidiCS卜的FlowPath选择Combined模式，SamPIe

ReSerVOir和SamPIeFlowRate参数与FUIdiCST*Combined模式卜的进样参数保持一

致。

单击右边的Start开始自动调谐。

调谐成功，会有绿勾出现，查看

intellistart报告

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3.4.3查看intellistart中自动生成的质谱方法：

从MaSSLynx主窗口，单击MSMethod,出现MSMethod编辑对话框，选择F订e>

OPen,选择Intellistart中保存的质谱方法的文件，双击方法，如发现自动调谐生产的质谱方法中部分参数有误，则可以在Channels窗口手动修改参数，填写

relentinonWindow中的end时间，此时间必须与液相色谱方法运行时间保持一致，选择AutoDwell,单击OK,点击File>Sa.VeAs,保存质谱方法文件。

3.5建立液相方法

3.5.1编辑液相方法

在液相方法编辑窗口，单击Inlet,输入溶剂名称，runtime及梯度洗脱程序，

梯度洗脱程疗:

中最后阶段时间必须与runtime符合，单击OK,选择F订e>SaVeAS保存方法，单击LoadMethOd，平衡液相。

3.5.2建立样品列表

在MaSSlynx主窗口，选择File>NeW建立一个空白的表SamPIeliSt0输入文件名

FileName，样品信息FileTeXt，双击MSF订e，选择质谱方法，双击InletFile,选择液相方法，在Bottle中输入样品瓶的位置，在InjeCtVolume中输入进样体积，可右键〉Add,增加样品表的行数，保存样品表:

F订e>SaVeAs。

3・6数据采集和处理

3.6.1.选中要采集的样品,单击RUn>Start选择ACqUireSamPIeDataonly”单击OK开始进样并采集。

3.6.2在采集过程中，可查看色谱图，点击ChrOmatOgram窗口，点击Real-time

UPdateicon•如果不能见整个TIC图，单击DefaUItRange图标。

如果方法中包括多个通道，可通过DiSPIay>MaSS查看

如果方法中包括多个检测器或多个Function,可通过DiSPIay>TIC查看

3.6.3处理多个Function的数据

如果质谱方法中有多个Function,如有三个Function,如想看第二个Function,MSSCan的数据。

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363.1在色谱图窗口，点击DiSPIay>TIC选中MSScan，选择Addtrace，单击OK。

363.2如想查第二个Function,DaughterSCan质谱图，在色谱图中,选择DiSPIay>TIC,选择SCanWaVeDSAddtrace,单击OKd

363.3.选择PrOCeSS>COmbineSPeCtra分别用右键输入信号和本底噪音•单击0K•得到DaUghterSCan的质谱图，单击PrOCeSS>Smooth，单击OK。

3・7数据处理-外标定量法

3.7.1在MaSSlynx主页面单击Targetlynx/Editmethod,出现定量方法编辑对话框，单击新建方法图标，新建一个定量方法。

3.7.2单击Addnewcompound（添加新的化合物）图标，添加一个新的化合物。

3.7.3单击菜单栏update,选中QUantitationIon和CompoundName（前面打勾）在MaSSlynx主页面，打开中等偏下低浓度标准品的色谱图，DiSPIay/Mass

ChrOmatOgram选出要定量的化合物的离子对，一般强度高的化合物用来做为定量离子，另一个离子对则作为确证离子，用鼠标右键在定量离子对色谱图上拉一下，贝UcompoUndname,ACqUiSitionFUnCtionNumber,QuantificationTrace,PredictedRetentionTime和RetentionTimeWindow将自动输入到定量方法中。

注意：

在色谱图上拉的时候，要遵循两个原则，拉的位置要以色谱峰的峰尖左右对称，拉的宽度要超过峰的起点和终点。

3・7・4单击工作曲线图标，在工作曲线设置页面，填入

ConcentrationUnits:

浓度单位，例女口ng/ml,ug/kg,ppb,PPm等。

ConcentrationofStandard:

LeVel-选择COnCA

PolynomialTyPe-选择Linear・（可根据自己行业的规定）

CalibrationOrigin卫择exclude排除原点）,include（包含原点）,force（强制过原点）WeithtingFUnction（权重）_l/x（根据自己行业规定）

PrOPagateCalibratiOnParameters女口果所有的化合物均用相同的工作曲线的参数，选YeS

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3.7.5打开积分参数列表，选中APeXTraCkEnabled（打勾，YES,|ntegrationWindOWEXtent输入2,选中PrOPagateIntegrationParameters打勾），女I」果色谱峰并不是很对称的色谱图，可先在色谱图上先设定参数，积分，好积分参数满意之后，PrOCeSs/integrate,/copy，在Targetlynx方法中Edit/PaSt就可将其粘贴到Targetlynx方法中。

建议用APeXTraCk积分方法，Smooth方法建议用smoothiteration1,smoothWidth2。

重复上面的过程，把其他几个化合物的信息全部加入，保存方法：

File/SaVeAs,保存到当前项目的MethDB文件夹中，正确的SamPIeliSt表格模板，除了前面进样时的选项之外，还要有SamPIetype,ConA,等选中要处理的样品，单击PrOCeSSSamPIeS出现卜图的对话框，确保选中，Integrate、SamPIe,CalibrateStandard,QuantifySamPIe选择刚才编辑的Targetlynx方法，单击OK后，出现定量结果对话框。

可根据自己的需要，用鼠标右键，ChangColumnOrder来增加或减少SUmmary中的选项。

3.8关机程序

3.8.1日常关机:

3.&1.1如果流动相中有缓冲盐必须先将缓冲盐换成水，灌注2分钟，流速设为

0.2ml/min,80%水相，冲洗至少30分钟，换成80%有机相，冲洗至少20分钟，停流速，水相，冲洗至少30分钟，换成80%有机相，冲洗至少20分钟，停流速，柱温为室温。

3.8.1.2关质谱：

主界面masstune或者电脑下面仪器图标一界面左侧偏上fluidics--flowState选择为waste＞关氮气，masstune界面或者电脑下面仪器图标工具栏第6个〉关高压masstune界面右下角＞等待去溶剂气温度降低至100度以下masstune界面或者电脑下面仪器图标左侧偏上。

ES+sourcetemperaturedesolvation＞关氮气，点击氮气发生器开启开关。

3.8.2彻底关机

3.821先完成日常关机

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3・822泄真空：

tunePage>VaCuum>Ventyes>等待涡轮分子泵转速降到10以

卜,masslynx主界面左侧inStrUmentMasstune界面左侧偏上diagno

StiCSvacuum-sourceturbospeed[%]

3.8.2.3退出软件，其他界面先退岀，主界面最后退岀

3.8.2.4关质谱电源>关所有UPLC电源，计算机电源，仪器三个电源顺序无所谓，关氮气发生器，氮气。

3.&2.5如果有ups关闭ups电源，计算机电源。

4口常维护、保养及注意事项

4.1仪器室要保持整洁、干净、无尘；配套设施布局合理。

4.2仪器室温度应相对稳定，一般应控制在20-25C,保持恒温；相对湿度最好为50-70%,室内应备有温度计和湿度计，一般采用空调和吸湿机调节温度和湿度。

4.3气压过滤机械泵油，停止样品采集、停止流动相、关闭高压、关闭所有气流，关闭离子源内的真空隔离阀。

用一字镖丝刀顺时针方向拧开机械泵上的GaS

Ballast阀四分之一圈，运行30分钟后再把GaSBallast阀旋转到原来关闭的位置。

对于ESI源，至少每星期做一次，对于APCI源，每天做一次。

4・4开高压之前一定要先开氮气，关氮气之前一定要先关高压。

4.5ESI离子化与溶剂密切相关，在使用某些溶剂和添加物需要注意以下几个方面：

三氟乙酸（TFA多用于蛋白质和多肽分析，但对ESI离子化有抑制效应；三乙胺（TEA在m/z102处有较强的[M+H]+峰，有可能会抑制某些碱性化合物在正离子ESI条件下的离子化，也有可能会增强某些碱性化合物在负离子ESI条件下

的响应；

4.6要避免使用非挥发性的盐（PhOSPhate,borate,citrate,etc.）;表面活

性剂、清洁剂和去污剂（会抑制离子化）；以及无机酸（SUIPhUriCacid,PhOSPhOriCacidetc・）等。

4.7连接UPLC泵、色谱柱、注射泵以及ESI探头时，要将仪器置于Standby状

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八态0

4.8•当改变分辨率的时候，仪器的质量数也会有轻微的偏移，所以在不同分辨率的条件下，应该做质量数校正。

4・9样品贮存在塑料离心管中，其中的添加剂很容易混入，尤其是被有机溶剂浸泡时间较长时，会产生干扰物信号。

4.10工作站计算机不要安装与仪器操作无关的软件，要经常清理计算机磁盘碎片，

定期查杀病毒，定期备份实验数据。

4.11仪器应定期检查，并有专人管理，负责维护保养及清洁。

4.12实验完毕要清洗进样针、进样阀等，用过含酸的流动相后，色谱柱、离子源都要用甲醇/水冲洗，延长仪器寿命。

4.13尢期清洗样品锥孔：

关闭隔断阀，取下样品锥孔，先用甲醇：

水：

甲酸（45:

45:

10）的溶液超声清洗10分钟，然后在分别用超纯水和甲醇各溶液超声清洗10分钟，待晾干后再安装到仪器上。

当灵敏度下降时，需要清洗SoUrCe、二级锥孔和六级杆。

4.14足期（每星期）检查机械泵的油的状态，如果发现浑浊、缺油等状况，或者已经累积运行超过3000小时，要及时更换机械泵油。

5支持性文件

WatersXeVO-TQS液质联用仪使用手册。