叶绿素含量的测定.doc

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叶绿素含量的测定

叶绿素的含量与植物光合作用及氮素营养有密切的关系，在科学施肥、育种及植物病理研究上常有测定的需要。

一、目的

掌握叶绿素a、b含量测定的基本原理和方法。

二、原理

叶绿素a、b分别在663nm和645nm波长处有最大的吸收峰，同时在该波长处叶绿素a.、b的比吸收系数K为已知，我们即可以根据Lambert－Beer定律，列出浓度C与吸光度A之间的关系式：

A663=82.04Ca+9.27Cb……………………

（1）

A645=16.75Ca+45.6Cb……………………

（2）

（1）、

（2）式中的A663、A645为叶绿素溶液在波长663nm和645nm时测得的吸光度。

Ca、、Cb为叶绿素a、b的浓度，单位为mg·L－1。

82.04、9.27为叶绿素a、b在波长663nm下的比吸收系数。

16.75、45.6为叶绿素a、b在波长645nm下的比吸收系数。

解

（1）、

（2）式联立方程，得：

Ca=12.70A663–2.69A645……………………（3）

Cb=22.9A645–4.68A663……………………（4）

CT=Ca+Cb=20.21A645+8.02A663……………………（5）

Ca、Cb为叶绿素a、b的浓度,CT为总叶绿素浓度，单位：

（mg·L－1），.利用上面（3）、（4）、（5）式可以分别计算出叶绿素a、b及总叶绿素浓度。

三、材料、仪器设备及试剂

1.材料：

菠菜叶、芥菜叶或其他植物叶片

2.仪器设备：

电子分析天平；分光光度计；恒温水浴锅；25ml刻度试管；剪刀；试管；试管架；玻棒等。

3.试剂：

80﹪乙醇。

四、实验步骤

1.叶绿素的提取

从植株上选取有代表性的叶片数张（除去粗大叶脉）剪碎后混匀，快速称取0.2g（可视样品叶绿素含量高低而增减用量），置于25ml刻度试管中，加80﹪乙醇10ml左右，加塞放入60～80℃水浴中保温提取叶绿素（或常温下放在暗处浸提12～24h），至叶片全部褪绿为止，冷却后，用80﹪乙醇定容至刻度，此液即为叶绿素提取液。

2.测定

取光径为1cm的比色杯，加入叶绿素提取液距比色杯口1cm处，以80﹪乙醇作为对照，分别于663nm及645nm波长下测定吸光度（A）值。

五、结果计算

将测定得到的吸光度A663、A645值分别代入上面（3）、（4）、（5）式计算出Ca、Cb及CT（即叶绿素a、b及叶绿素总量浓度）。

再按下式计算出叶绿素a、b及叶绿素总含量。

Ca×提取液总量（ml）

叶绿素a含量（mg·g－1Fw）=————————————

样品鲜重（g）×1000

Cb×提取液总量（ml）

叶绿素b含量（mg·g－1Fw）=————————————

样品鲜重（g）×1000

CT×提取液总量（ml）

叶绿素总含量（mg·g－1Fw）=————————————

样品鲜重（g）×1000

最后计算出叶绿素a/叶绿素b的比值，并加以分析。

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