StepOnePlus型PCR仪操作规程和PCR仪简易设置指南.docx

StepOnePlus型PCR仪操作规程和PCR仪简易设置指南.docx

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StepOnePlus型PCR仪操作规程和PCR仪简易设置指南

StepOnePlus型PCR仪操作规程

1.StepOnePlus上机可由两种方式来进行：

由StepOneSoftwareQuickStart进行上机或由StepOnePlus机器面板直接触控上机。

2.由StepOneSoftwareQuickStart进行上机：

开启StepOneSoftwarev2.0进入主画面后点选QuickStart窗口进行快速上机设定。

进入ExperimentProperties后输入：

ExperimentName及档案储存位置；选择ExperimentType选择使用荧光系统；选择RampSpeed选择实验样品种类；点选RunMethod确定PCR反响条件是否需要修改后，按下STARTRUN。

如欲使用StepOnePlus机器上VeriFlexBlock的功能，请由左方Setup功能列上点PlateStepup窗口，在“AssignTargetsandSamples〞窗口下，勾选EnableVeriFlexBlock选项，此时Block即被分成六个区块。

接着点选RunMethod，在runprogram上点一下欲调整的温度步骤，选择“Setdifferenttemperaturesforoneormorezones〞并设定每个区块的温度，请注意两相邻区块温度差异不可以超过5度，第一和第六区块最多可差异25度。

按下StartRunNow进行data收集，反响结束后，那么会回到“MainMenu〞画面，触控CollectResult将data存出。

2.由StepOnePlus机器面板直接触控上机：

开启电源后，进入主画面，由触控式屏幕来进行StepOnePlus的设定。

按下TaqMancDNA〔Standard〕进入PCRThermalCycleProgram，可利用下面工具列再重新编辑反响条件，如果条件相同那么直接按下Save。

如欲使用StepOnePlus机型上VeriFlexBlock的功能，请点选Options下的VeriFlexstep并设定每个区块温度，请注意两相邻区块温度差异不可以超过5度以上，第一和第六区块最多可差异25度。

触控需要更改之处那么会跳出触控式键盘，重新给予实验名称、选择档案储存的Folder、并更改实际反响样品体积，按下Save&Exit；然后在BrowseLastAccessedExperiments下选择刚设定好的实验，按下StartRun。

此时跳出警告标示，提醒之前的档案是否存出，如果已经将前一个档案存出的话，那么可直接触控Overwrite进行Data收集；如未储存的话那么触控Collect将Data存出。

确定反响体积及实验名称无误后，触控StartRunNow，那么会进入PCRProgram实时显示画面。

反响结束后，那么会回到“MainMenu〞画面，触控CollectResults将data存出后，再回到StepOneSoftware进行实验盘建立及分析。

清洁与维护保养：

1.外壳要用柔软的布配合温和的清洁液清洗，不要用酒精或其他洗涤用品；加热孔可以用酒精棉球擦洗，但在清洗前应注意加热板的温度需降至室温。

2.注意保持热盖和Block的清洁，特别注意不能将带有荧光染料的试剂溅洒在热盖或者Block里，否那么需用蘸有70%酒精〔纯酒精稀释在蒸馏水里〕的干净棉球擦洗，直到不影响实验结果。

考前须知：

1.为防止触电事故，仪器的输入电源线必须可靠接地。

2.操作人员不得擅自翻开仪器，元件的更换或机内调节须由持证的专业人员进行。

3.在连接交流电源前，需保证电源电压与仪器要求电压一致220V〔允许偏差±10%〕，并确保电源插座的额定负载不小于仪器要求。

StepOne定量PCR仪简易设置指南

启动电脑，翻开定量PCR仪电源开关：

双击桌面“StepOneSoftware〞图标，出现Login登录界面，点击“OK〞，翻开软件。

起始界面如下图，点击红色椭圆的三角图标，展开软件功能按钮。

点击左侧“SetUp〞功能选项中的“AdvancedSetup〞高级设置向导。

在翻开的设置界面，左侧为导航树，选择不同的功能选项，右侧显现为不同的设置功能。

默认条件下，显示为“ExperimentProperties〞实验属性。

右侧界面，带有红色*号位置需要输入或者通过鼠标进行选择。

不带*号位置为选填，可以保持空白。

在途中位置输入实验名称，该名称根据需要进行填写。

选择仪器类型、实验类型、荧光标记方法以及反响速度。

左侧导航树，选择“PlateSetup〞设置选项。

右侧“DefineTargets〞选项下“TargetName〞处设置检测基因的名称，如FluA，Reporter下拉菜单项选择择“FAM〞，Quencher下拉菜单项选择择“None〞

点击“AddNewTarget〞，并按照第7步所述进行设置。

根据需要添加所需基因，如SWH1、SWFluA1和RNP。

在“DefineSamples〞填写检测样本的名称，如果需要多个样本，通过“AddNewSample〞添加多个样本。

鼠标点击“AssignTargetsandSamples〞切换设置界面。

鼠标滑倒图中椭圆所处位置，变化为双向箭头，通过拖动鼠标，可以改变左右两侧窗口大小。

鼠标选择样品放置的位置，如B4，鼠标勾选样品名称及所要检测的基因。

根据样品孔的数量，依次进行设置。

鼠标拖动椭圆位置，向下拖动。

在“Selectthedyetouseasthepassivereference〞的下拉菜单处选择“None〞

点击“RunMethod〞设置反响条件：

在“ReactionVolumePerWell〞处输入反响体积，如20ul或者25ul。

点击温度或者时间，通过输入数值可以更改温度的大小及时间的长短。

在“NumberofCycles〞可以输入循环数。

根据试剂盒的说明书，改变反响条件。

在软件上，Stage指温度阶段，有HoldingStage和CyclingStage两种类型。

HoldingStage只有一个Step〔温度步骤〕，CyclingStage可以有几个Step〔温度步骤〕，并且屡次循环该温度参数。

点击“AddStage〞可以选择添加Stage及类型。

在CyclingStage可以添加Step〔温度步骤〕

选中某个温度步骤，如黄色区域所指的60℃位置。

点击“AddStep〞，选择Before〔之前〕或者After〔之后〕，即可添加温度步骤，根据需要更改温度或者时间。

选择采集荧光的温度步骤。

选择采集温度的步骤：

点击“DataCollection〞图标，使其处于激活状态，如72℃。

同时，点击55℃下“DataCollection〞图标采集图标，使其处于未激活状态。

点击“Save〞保存实验，再点击“STARTRUN〞开始运行实验。