稳定性试验总结..doc
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复方双氢青蒿素片稳定性试验总结报告
张美义、肖文中、林燕芳、詹利之
摘要:
复方双氢青蒿素片是由双氢青蒿素、磷酸派喹、甲氧苄啶三种主要成分组成。
本品经过强光照射试验、高温试验、高湿试验、室温空气放置试验等影响因素试验，以及加速试验、室温留样考察等试验，证明本品除在高温80℃下，双氢青蒿素不稳定外，其他成分在各种试验条件下均比较稳定。
关键词：
稳定性影响因素加速试验室温放置
一、试验材料与方法
1.样品来源：
复方双氢青蒿素片，批号：
由重庆通和制药有限公司提供，批号：
。
981020批、981021批、981022批共三批（影响因素试验使用981020批），按临床用药质量标准（草案）检验符合规定。
2.主要试验仪器：
高效液相色谱仪：
岛津LC-10AT
色谱柱：
YWGC1810μm250×46mm
紫外可见分光光度计：
TU-1901
电子分析天平：
SHINKOSH-210R
智能溶出度试验仪：
ZRS-6型
3.试验方法：
（1）影响因素试验样品除去外包装，样品在裸露条件下进行观察。
①强光照射试验：
将复方双氢青蒿素片置于平皿中，于室温3600Lx光下照射，并于5、10天各取样测定一次。
②高温试验：
把复方双氢青蒿素片置于密闭器皿中，分别置于40℃、60℃、80℃的恒温箱中，在3天、5天、10天各取样测定一次。
试验前供试品先准确称重，样品取出时再准确称重。
③高湿试验：
把复方双氢青蒿素片置于平皿中，放在相对湿度分别为75%及92.5%条件下的封闭干燥器中，恒温25℃，分别于5、10天取样观察和检测。
④室温空气放置试验：
供试品置于室温空气中，第5、10天各取样测定一次。
（2）加速试验：
将铝箔包装的复方双氢青蒿素片（模拟上市包装）3个批号的样品放置在40℃，相对湿度为75%的条件下三个月，每月每批样品检测一次
（3）室温留样观察试验：
将铝箔包装的复方双氢青蒿素片（模拟上市包装）3个批号的样品置于室温条件下，定期分别于0、3、6、12、18、24、36个月，按考察项目进行检测。
4.考察项目：
①外观色泽；②片芯性状；③溶出度；④含量；⑤色谱检查分（降）解产物。
5.考察项目的检测方法：
（1）、外观色泽、片芯性状用肉眼观察。
（2）、含量：
双氢青蒿素取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于双氢青蒿素0.1g）置研钵中，加适量无水乙醇充分研磨，使双氢青蒿素溶解，以无水乙醇约75ml将研钵中的供试品定量移入100ml量瓶中，超声振荡15分钟，放至室温，加无水乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置小烧杯中在60℃-70℃水浴上冷风吹干，残留物用乙醚分次提取并通过硅胶层析柱（用3g100-200目的青岛产层析硅胶，干法一次性装入内径约2.5cm的玻璃层析柱中，振摇，均匀下沉，不须预洗），用乙醚50-60ml，以吸管吸取乙醚液，分次洗脱双氢青蒿素，收集乙醚洗脱液在50℃-60℃水浴上冷风吹干，残物用无水乙醇定量移入100ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，静置2小时后，精密量取5ml置50ml比色管中，加2%氢氧化钠溶液20ml，摇匀，置59℃±1℃的水浴中，加热30分钟，取出，立即冷却至室温，作为供试品溶液；另取经五氧化二磷减压干燥至恒重的双氢青蒿素对照品约100mg，精密称定，置100ml量瓶中，加适量无水乙醇，超声振荡使溶解，并稀释至刻度，摇匀，按供试品溶液制备项下自“精密量取续滤液10ml”起，同法操作，作为对照品溶液。
以无水乙醇—2%氢氧化钠溶液（1:
4）混合液加热30分钟同法操作为空白，照分光光度法（中国药典1995年版二部附录IVA），在238nm的波长处分别测定对照品溶液和供试品溶液的吸收度，计算，即得。
磷酸哌喹精密称取上述研细的粉末适量（约相当于磷酸哌喹80mg），置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液约75ml，超声振荡20分钟，放至室温，加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，滤过。
精取续滤液2ml，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
另精密称取80℃真空干燥至恒重的磷酸哌喹对照品80mg，置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液约75ml，超声振荡20分钟，放置室温加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀。
精取2ml置100ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
用0.1mol/L盐酸溶液为空白，照分光光度法（中国药典1995年版二部附录IVA），在345nm的波长处，分别测定对照品溶液和供试品溶液的吸收度。
计算，即得。
甲氧苄啶照高效液相色谱法（中国药典1995年版二部附录VD）测定。
系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈—0.75%二乙胺（15:
85混合后用磷酸调pH至2.5）为流动相，检测波长为271nm。
柱温为室温，理论塔板数按甲氧苄啶计算应不低于3000。
对照品溶液的制备精密称取经105℃干燥至恒重的甲氧苄啶对照品约25mg，置100ml量瓶中，加95%乙醇适量超声震荡30分钟溶解，放冷至室温，用95%乙醇稀释至刻度，摇匀。
精取5ml置25ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备精密称取上述研细的粉末适量（约
相当于甲氧苄啶25mg），置100ml量瓶中，加入95%乙醇适量，超声波浴中震荡30分钟，使样品溶解，放冷至室温，用95%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精取续滤液5ml置25ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，作供试品溶液。
测定法：
精取对照品溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱仪、记录色谱图，量取峰面积，按外标法计算供试品中甲氧苄啶的含量。
（3）溶出度：
取样品，照溶出度测定法（中国药典1995年版二部附录XC第二法），以0.1mol/L盐酸溶液900ml为溶剂，转速为每分钟75转，依法操作，经30min，取溶液20ml，滤过。
精密量取续滤液2ml，置50ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
另精密称取经80℃真空干燥至恒重的磷酸哌喹对照品适量，用0.1mol/L盐酸溶液溶解并制成每1ml约含14μg/ml的溶液，作为对照品溶液照分光光度法（中国药典1995年版二部附录IVA）在345nm的波长处，分别测定吸收度，计算出每片中磷酸哌喹的溶出量。
另精密量取上述续滤液5ml，置25ml量瓶中，加0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
另分别精密称取经105℃干燥至恒重的甲氧苄啶对照品与经80℃真空干燥至恒重的磷酸哌喹对照品适量，用0.1mol/L盐酸溶液溶解并分别制成每1ml约含甲氧苄啶20μg，磷酸哌喹71μg的溶液，作为对照品溶液⑴，对照品溶液⑵。
照分光光度法（中国药典1995年版二部附录IVA）取对照品溶液⑵，以271nm为测定波长（λ2），在366nm波长附近（每间隔0.2nm）选择等吸收点波长为参比波长（λ1），要求△A=Aλ2-Aλ1=0。
再在λ2与λ1波长处分别测定供试品溶液与对照品溶液⑴的吸收度，求出各自的吸收度差值（△A），计算出每片中甲氧苄啶的溶出量
（4）、色谱检查分（降）解产物方法如下：
①精密称取本品细粉适量（约相当于双氢青蒿素50mg）加氯仿5ml搅拌使双氢青蒿素溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；另精密称取双氢青蒿素对照品适量，加氯仿溶解使成每1ml中含双氢青蒿素10mg作为对照品溶液。
照薄层色谱法（中国药典1995年版二部附录VB）试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯—醋酸乙酯（8:
2）为展开剂，展开后，晾干，喷以0.5%香草醛硫酸溶液[香草醛0.5g加入硫酸—水（4:
1）混合液100ml使溶解]加热使杂质斑点显色。
各种稳定性试验的供试品与对照品斑点作比较。
②精密称取本品适量（约相当于磷酸哌喹80mg），加80%冰醋酸5ml搅拌溶解，滤过滤液作为供试品溶液；另精密称取磷酸哌喹、甲氧苄啶对照品适量，加80%冰醋酸使成每1ml中含磷酸哌喹16mg、甲氧苄啶4.5mg溶液作为对照品溶液，照薄层色谱法（中国药典1995年版二部附录VB）试验，吸取上述溶液各5μl分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿—甲苯—二乙胺（5:
4:
2）为展开剂，展开后，晾干，置紫外灯（254nm）下检视，各种稳定性试验的供试品与对照品斑点作比较。
二、试验结果
㈠影响因素试验
强光照射试验结果
结果详见表1，显示本品在强光照射下稳定。
色谱检查分（降）解产物见照片1-1、1-2（附后），5、10天与对照品比较
未见改变。
表1强光照射试验结果
光照时间
（天）
外观色泽
片芯性状
溶出度
（标示量%）
含量
（标示量%）
色谱检查
分解产物
0
浅绿色长条形薄膜衣片
浅黄色
P:
99
99
99
97
97
96
D：
P：
T：
98.5
100.8
96.5
见色谱图
T:
94
94
94
93
96
91
5
浅绿色长条形薄膜衣片
浅黄色
P:
97
99
100
99
99
98
D：
P：
T：
99.3
99.9
96.7
与对照品比较没有差异
T:
93
94
93
93
94
92
10
浅绿色长条形薄膜衣片
浅黄色
P:
99
98
100
97
99
99
D：
P：
T：
99.7
100.1
95.6
与对照品比较没有差异
T:
95
93
94
92
93
95
注：
D为双氢青蒿素P为磷酸哌喹T为甲氧苄啶以下同
㈡高温试验结果
结果详见表2。
显示本品在40℃及60℃基本不变，80℃以上双氢青蒿素出现分解斑点，含量也随之下降。
色谱检查分（降）解产物见照片2-1、2-2（附后）。
表2高温试验结果
温度
℃
受热
时间
（天）
外观
色泽
片芯
性状
平均
片重
（g）
溶出度
（标示量%）
含量
（标示量%）
色谱检查分解产物
0
浅绿色长条形薄膜衣片
浅
黄
色
P:
99
99
99
97
97
96
D:
P:
T:
98.5
100.8
96.5
见色谱图
T:
94
94
94
93
96
91
3
浅绿色长条形薄膜衣片
浅
黄
色
实验前
0.6006
实验后
0.5988
D:
P:
T:
99.5
101.3
95.6
与对照品比较没有差异
40
5
浅绿色长条形薄膜衣片
浅
黄
色
实验前
0.5983
实验后
0.5945
D:
P:
T:
98.2
100.8
96.4
与对照品比较没有差异
10
浅绿色长条形薄膜衣片
浅
黄
色
实验前
0.6000
实验后
0.5922
P:
100
98
100
98
102
99
D:
P:
T:
99.8
100.6
95.1
与对照品比较没有差异
T:
92
97
93
93
90
93
3
浅绿色长条形薄膜衣片
浅
黄
色
实验前
0.6015
实验后
0.5954
D:
P:
T:
100.7
101.5
93.7
与对照品比较没有差异
60
5
浅绿色长条形薄膜衣片
浅
黄
色
实验前
0.6000
实验后
0.5946
D:
P:
T:
99.8
104.2
96.8
与对照品比较没有差异
10
浅绿色长条形薄膜衣片
浅
黄
色
实验前
0.6022
实验后
0.5922
P:
99
97
99
100
98
96
D:
P:
T:
97.3
100.5
95.6
与对照品比较没有差异
T:
95
93
95
94
94
91
温度
℃
受热
时间
（天）
外观
色泽
片芯
性状
平均
片重
（g）
溶出度
（标示量%）
含量
（标示量%）
色谱检查分解产物
3
浅绿色长条形薄膜衣片，绿色比0天浅
浅
黄
色
D:
P:
T:
83.0
100.9
96.5
P、T与对照品比较没有差异，D出现分解点
80
5
浅绿色长条形薄膜衣片，绿色比0天浅
黄
色
实验前
0.5999
实验后
0.5789
D:
P:
T:
81.2
99.8
95.0
P、T与对照品比较没有差异，D出现分解点
10
浅绿色长条形薄膜衣片，绿色比0天浅
黄
色
实验前
0.5983
实验后
0.5747
P:
100
94
98
98
98
94
D:
P:
T:
83.6
97.2
97.2
P、T与对照品比较没有差异，D出现分解点
T:
96
93
95
95
97
98
㈢高湿度试验结果
结果详见表3。
显示本品在RH92.5%10天质量稳定。
色谱检查分（降）解产物见照片3-1、3-2（附后）。
表3高湿度实验结果
湿度
（25℃）
放置
时间
（天）
外观
色泽
片芯
性状
平均
片重
（g）
溶出度
（标示量%）
含量
（标示量%）
色谱检查分解产物
0
浅绿色长条形薄膜衣片
浅
黄
色
P:
99
99
99
97
97
96
D:
P:
T:
98.5
100.8
96.5
与对照品比较没有差异
T:
94
94
94
93
96
91
75%
（NaCl）
10
浅绿色长条形薄膜衣片
浅
黄
色
实验前
0.5980
实验后
0.6157
P:
100
100
99
99
94
95
D:
P:
T:
101.0
101.4
94.8
与对照品比较没有差异
T:
94
95
92
94
92
90
92.5%
（KNO3）
10
浅绿色长条形薄膜衣片
浅
黄
色
实验前
0.5963
实验后
0.6277
P:
99
99
98
95
97
97
D:
P:
T:
98.6
101.6
95.5
与对照品比较没有差异
T:
92
93
91
93
90
91
㈣室温空气中放置试验结果
结果详见表4。
显示本品在室温空气中放置比较稳定。
色谱检查分（降）解产物见照片4-1、4-2（附后），5、10天与对照品比较未见改变。
表4室温空气放置试验结果
放置时间
（天）
外观色泽
片芯性状
溶出度
（标示量%）
含量
（标示量%）
色谱检查分
（降）解产物
0
浅绿色长条形薄膜衣片
浅黄色
P:
99
99
99
97
97
96
D:
P:
T:
98.5
100.8
96.5
T:
94
94
94
93
96
91
5
浅绿色长条形薄膜衣片
浅黄色
P:
98
99
99
99
100
97
D:
P:
T:
99.8
101.3
95.7
与对照品比较没有差异
T:
92
93
94
91
94
95
10
浅绿色长条形薄膜衣片
浅黄色
P:
97
100
99
98
99
99
D:
P:
T:
99.3
99.7
95.9
与对照品比较没有差异
T:
93
94
92
94
95
92
（二）、加速试验
复方双氢青蒿素片由重庆通和制药有限公司提供。
批号：
981020、981021、981022。
考察项目包括：
①外观色泽；②片芯性状；③溶出度；④含量；⑤色谱检查分（降）解产物。
【考察项目的检查方法】同影响因素试验。
【试验方法与结果】
三批样品的检测结果详见表5、表6和表7。
色谱检查分（降）解产物见照片5-1、5-2、6-1、6-2、7-1、7-2（附后）。
表5981020批号复方双氢青蒿素加速试验结果
储存时间
（月）
外观色泽
片芯性状
溶出度
（标示量%）
含量
（标示量%）
色谱检查分
（降）解产物
0
浅绿色长条形薄膜衣片
浅黄色
P:
99
99
99
97
97
96
D:
P:
T:
98.5
100.8
96.5
T:
94
94
94
93
96
91
1
浅绿色长条形薄膜衣片
浅黄色
P:
98
98
100
101
100
97
D:
P:
T:
100.4
99.1
95.8
与对照品比较没有差异
T:
92
93
94
94
94
93
2
浅绿色长条形薄膜衣片
浅黄色
P:
97
96
103
96
98
99
D:
P:
T:
100.7
101.1
96.9
与对照品比较没有差异
T:
92
93
98
95
94
93
3
浅绿色长条形薄膜衣片
浅黄色
P:
99
100
100
101
97
99
D:
P:
T:
99.8
99.4
95.6
与对照品比较没有差异
T:
94
96
95
96
92
95
表6981021批号复方双氢青蒿素加速试验结果
储存时间
（月）
外观色泽
片芯性状
溶出度
（标示量%）
含量
（标示量%）
色谱检查
分解产物
0
浅绿色长条形薄膜衣片
浅黄色
P:
101
99
98
102
100
97
D:
P:
T:
98.8
100.1
95.9
T:
93
94
95
95
92
90
1
浅绿色长条形薄膜衣片
浅黄色
P:
100
101
99
98
99
98
D:
P:
T:
99.7
101.4
96.3
与对照品比较没有差异
T:
94
92
91
95
93
94
2
浅绿色长条形薄膜衣片
浅黄色
P:
99
99
96
97
101
99
D:
P:
T:
100.0
99.5
95.4
与对照品比较没有差异
T:
94
92
95
95
93
95
3
浅绿色长条形薄膜衣片
浅黄色
P:
101
98
100
99
96
98
D:
P:
T:
99.6
100.9
96.7
与对照品比较没有差异
T:
93
95
92
96
96
95
表7981022批号复方双氢青蒿素加速试验结果
储存时间
（月）
外观色泽
片芯性状
溶出度
（标示量%）
含量
（标示量%）
色谱检查
分解产物
0
浅绿色长条形薄膜衣片
浅黄色
P:
99
98
101
99
100
100
D:
P:
T:
99.3
100.2
96.0
T:
93
91
92
94
96
93
1
浅绿色长条形薄膜衣片
浅黄色
P:
100
101
97
101
99
99
D:
P:
T:
100.3
100.8
97.1
与对照品比较没有差异
T:
93
94
90
92
95
92
2
浅绿色长条形薄膜衣片
浅黄色
P:
98
99
102
98
97
99
D:
P:
T:
99.8
99.1
96.4
与对照品比较没有差异
T:
95
93
96
92
96
94
3
浅绿色长条形薄膜衣片
浅黄色
P:
100
98
100
98
97
101
D:
P:
T:
100.5
99.3
96.7
与对照品比较没有差异
T:
94
95
93
92
96
92
（三）、室温留样考察结果
结果详见表9、表10和表11。
色谱检查分（降）解产物见照片9-1、9-2、10-1、10-2、11-1、11-2（附后）。
表9981020批号复方双氢青蒿素片室温留样观察结果
起始时间：
1998年10月25日
储存
条件
储存时
间（月）
外观
色泽
片芯
性状
溶出度
（标示量%）
含量
（标示量%）
色谱检查
分解产物
0
浅绿色长条形薄膜衣片
浅
黄
色
P:
99
99
99
97
97
96
D:
P:
T:
98.5
100.3
96.5
T:
94
94
94
93
96
91
28℃-12℃RH:
85%－50%
3
浅绿色长条形薄膜衣片
浅
黄
色
P:
97
100
96
99
101
99
D:
P:
T:
99.6
99.6
95.7
与对照品比较没有差异
T:
93
96
92
95
93
94
24℃-13℃RH:
100%－50%
6
浅绿色长条形薄膜衣片
浅
黄
色
P:
100
96
98
99
98
99
D:
P:
T:
100.4
101.2
96.5
与对照品比较没有差异
T:
95
96
94
92
95
95
12
18
24
36
表10981021批号复方双氢青蒿素片室温留样观察结果
起始时间：
1998年10月25日
储存
条件
储存时间（月）
外观
色泽
片芯
性状
溶出度
（标示量%）
含量
（标示量%）
色谱检查
分解产物
0
浅绿色长
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