血液细胞化学染色技术在血液病诊断中的应用.docx

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血液细胞化学染色技术在血液病诊断中的应用

血液细胞化学染色技术在血液病诊断中的应用

细胞化学（或组织化学）是组织学的一个分支，是在细胞形态学的基础上研究细胞的生物化学成分、定位、定量及代谢功能状态的学科。

经典细胞化学从1830年问世以来已经逐步完善。

本世纪50年代哺乳动物和人白细胞的过氧化酶、碱性磷酸酶、酯酶、溶酶体等染色技术相继出现，并不断完善。

近代细胞化学则在此基础上，吸收并运用生物化学、免疫学、细胞生物学和分子生物学的基本原理与技术，从细胞分子水平研究细胞形态与功能的关系，发展了放射自显影、免疫荧光、免疫酶标等免疫组织化学新技术。

对研究核蛋白的合成、细胞动力学、细胞胞浆和表面免疫球蛋白合成、细胞分化抗原表达及癌变研究发挥了巨大的作用。

原位杂交细胞化学，通过染色体基因定位、核酸分子原位杂交、原位聚合酶链反应，洞察单个细胞内原癌基因的激活、扩增及表达变化等等，为探索癌变发生机制、肿瘤早期诊断、治疗、预后判断以及肿瘤防治展现美好前景。

急性白血病分型，形态学是基础，瑞氏染色准确率45.7%，细胞化学染色可将诊断提高到80%以上，国际上用MIC分型进一步提高了白血病的诊断率。

而现国际上又提出WHO分型，对细胞化学提出更高要求。

一．髓过氧化物酶（myeloperoxidase，POX）染色

（一）联苯胺染色法（Washburn）

[原理]粒细胞及分化较好的单核细胞胞质内颗粒中的过氧化物酶，分解过氧化氢后，释放初生态氧，使联苯胺氧化，氧化联苯胺与亚硝基铁氰化钠在细胞内结合,形成蓝色颗粒，经进一步氧化而成棕黑色，定位于胞质内。

[试剂配制]

1.0.3％复方联苯胺染液：

联苯胺0.3g加入90％乙醇99m1中，再加入36％亚硝基铁氰化钠1m1，混匀。

此染液在棕色瓶内可保存10个月。

2.过氧化氢溶液：

3％过氧化氢溶液1滴加入蒸馏水5m1中，混匀。

每次用前需新鲜配制。

[操作步骤]

1.在新鲜干燥的血或骨髓涂片上滴加0.3％复方联苯胺染液6～10滴，使之盖满涂膜，作用1分钟。

2.不将联苯胺倾去，即加等量的过氧化氢溶液，与上液充分混匀，作用4分钟。

3.自来水冲洗，晾干。

4.瑞氏染液复染（比常规瑞氏染色时间稍长）。

[结果判断]阳性结果为胞质内出现蓝黑色颗粒。

[阳性程度参考标准]：

（-）无蓝黑色颗粒；（±）颗粒细小，弥散分布；（+）颗粒较粗，局灶分布；（++）颗粒粗大密集，分布较广，约占胞质的l／2～2／3；（+++）颗粒粗大成团块，几乎布满胞质；（++++）颗粒成团块状，充满胞质，并覆盖胞核。

（二）二氨基联苯胺染色（DAB染色法）

1985年国际血液学标准化委员会推荐方法之一。

[原理]细胞颗粒中的过氧化酶，能将过氧化氢中的氧释放出来，氧化二氨基联苯胺（DAB），形成金黄色沉淀而定位于过氧化酶活性的部位。

[试剂配制]

1.3%戊二醛60%丙酮固定液：

60ml丙酮加入40ml蒸馏水中，再加入4.3ml70%的戊二醛（或12ml25%戊二醛），保存于冰箱的冰盒内。

2.0.5MpH7.6Tris-HCL缓冲液。

3.底物：

3.3’-二氨基联苯胺。

4.稀释H2O2。

（现用现配）：

50ml蒸馏水加2～3滴30%H2O2。

5.作用液：

称取10mg3.3’-二氨基联苯胺放入三角烧瓶中，加入40mlTris-HCL缓冲液，充分混匀，用力振荡混合液2～3分钟，仍可能留有一些黑色颗粒,迅速过滤到棕色瓶中。

6.Maryer’s苏木素复染液：

苏木素0.1g，加入蒸馏水100ml，加热溶解，再加入5g钾明矾与20mg碘酸钠搅动直到钾明矾溶解,加入5g水合氯醛和0.1g枸橼酸，混合后煮沸5分钟，冷却后过滤备用。

7.0.5%氨水。

[操作步骤]

1.涂片冷固定1分钟，蒸馏水冲洗，晾干。

2.滴加作用液将血膜盖满，均匀滴加等量稀释H2O2，混匀，室温放置10分钟，水冲，

晾干。

3.Maryer’s苏木素复染5～10分钟，水冲，0.5%氨水返蓝，水冲，晾干。

4.镜检。

[结果判断]阳性物为金黄色。

[阳性程度参考标准]：

（-）胞浆内无阳性颗粒；（+）阳性物淡黄色弥散状分布胞浆，或阳性物颗粒粗大聚集，约占胞浆面积1/4；（++）阳性物黄色弥散状分布，有一定空隙，约占胞浆面积1/2；（+++）阳性物呈金黄色均匀分布于胞浆或阳性物聚集约占细胞浆面积3/4；（++++）阳性物呈棕黄色，充满整个胞浆没有空隙。

[阳性率及阳性指数计算法]

阳性率：

计数100个幼稚细胞，观察其阳性细胞的个数，即为阳性率。

阳性指数：

根据所观察不同阳性程度细胞个数乘以其阳性程度之和，即（+）×1+（++）×2+（+++）×3+（++++）×4。

[染色注意事项]

1.双氧水现用现配。

2.反应时注意室温,及时调节作用时间,天热可缩短作用时间,反之延长反应时间。

3.标本如不及时染色，放4℃冰箱干燥保存。

使用时将标本平衡到室温再取出，否则细胞溶解变形。

[正常参考结果]

1.粒细胞系：

原粒细胞呈阴性或弱阳性，阳性反应物为粗颗粒聚集状。

自早幼粒细胞及以后各阶段中性粒细胞均为阳性反应，并随细胞成熟程度其反应渐加强，但衰老的细胞因过氧化酶活性降低而反应减弱。

嗜酸粒细胞为强阳性反应。

嗜碱粒细胞呈阴性或弱阳性反应。

2.其它细胞：

成熟单核细胞、组织细胞呈阴性或弱阳性反应；幼红细胞、淋巴细胞、浆细胞、巨核细胞及血小板均为阴性反应。

[临床意义]

血细胞所含过氧化物酶主要为髓过氧化物酶（MPO），MPO是一类糖蛋白，相对分子质量约为150000，是人类中性粒细胞含量最多的蛋白质，约占细胞干重的3%～5%。

用MPOPHMPZE探针与正常人染色体中期细胞作原位杂交，证明MPO基因定位在染色体17q11～q22，MPO为单拷贝基因。

从AML原始细胞分离总RNA作Northern印迹杂交揭示有多个MPOmRNA条带，两个主带在3.1-3.3kb区域，另两个弱带在2.5kb和2.7kb区域。

表明存在MPO转录后修饰，其结果形成了多种不同大小的mRNA，如α1,α2,β1和β2，共同编码MPO主要由2个亚单位组成，一个小的亚单位相对分子质量为39000，另一大的亚单位相对分子质量为60000。

转录后修饰、多起始转录和终止位点在不同形式的MPO组装过程中起着重要作用。

对HL60细胞系中MPO的生物合成和加工过程研究发现，最初产生的MPO是分子量为89，000的前体，有大、小亚单位各一个，对内糖苷酶敏感，无MPO活性。

MPO前体还需进一步进入溶酶体，经蛋白切割后才能成熟并具有活性。

这提示MPO前体转录时或转录后的加工缺陷可产生异常的MPO，使后者在早幼粒细胞发育过程中不能包装到嗜苯胺蓝颗粒中。

用MPOcDNA探针作原位杂交，发现原始粒细胞、早幼粒细胞均表达较高水平的MPOmRNA，随着粒细胞的分化成熟，MPOmRNA表达水平逐渐下降。

在临床白血病研究中，用全长MPOcDNA作探针进行RNA印迹法杂交，或用MPOcDNA探针作反转录聚合酶链反应（RT-PCR）或原位杂交，证明AML表达MPOmRNA，但在ALL都无一表达MPOmRNA，而且用分子生物学方法检测MPOmRNA要比细胞化学染色显示MPO更加灵敏。

在早期原始细胞尚无颗粒时可在核膜、内质网上发现其阳性物，此时在光镜下则难以识别出来，用电镜或MPOmRNA探针作核酸分子原位杂交，可使部分细胞显示阳性。

由此可见，是否表达MPOmRNA是区别急淋与急非淋的重要标志，对鉴别有MPO表达的低分化的AML幼稚细胞提供了新工具。

髓过氧化物酶是嗜天青颗粒中一种溶酶体酶,主要存在于线粒体和溶酶体中，定位于中性粒细胞和单核细胞嗜天青颗粒中。

主要功能是破坏生物氧化过程中有巨毒的过氧化物，使其放出氧，参加细胞内氧化还原过程，是一种与生物氧化有关的重要酶类。

在形成过程中出现任何问题都可造成MPO缺乏。

急性白血病MPO反应强弱顺序：

M3>M2b>M2a>M6（粒）>M4>M1>M5>HAL>ALL

（1）ALL和ANLL的鉴别

50年代至今有人主张MPO>3%，Haspos主张MPO>5%为ANLL，随着免疫技术的发展，检测手段增多。

提示MPO低阳性率时，多为急性混合型白血病。

①急性淋巴细胞白血病MPO阴性。

CLLMPO阴性。

②急性髓系白血病MPO多为阳性。

（2）髓系白血病鉴别

①粒系：

原粒细胞MPO阴性或弱阳性反应（+～++），阳性反应物颗粒粗大，聚集。

早幼粒细胞以下阶段随着细胞分化成熟而增强，中幼粒和晚幼粒细胞阳性物充满胞浆，少部分盖在细胞核上，（++～++++）。

M2b中90%以上染色体表现为T8.21移位，90%Aml1（CBFα）/ETO融合基因阳性，WHO特别命名为AML伴有t（8;21）（q22;q22）.AML1（CBFα）/ETO，此病以异常中幼粒细胞增生为主，MPO表现为强阳性，部分M2b中异常中幼粒细胞MPO阳性物在细胞核的凹陷处聚集成团，呈团块状反应。

急性早幼粒细胞白血病（APL）是一种在临床、形态和细胞遗传学方面有明显特征的AML亚型，WHO命名为AML伴有t（15;17）（q22;q11-12）及其变体PML/RARα白血病。

MPO呈强阳性反应（+++）～（++++）。

阳性物深棕黄色充满胞浆，细胞外浆一般为阴性。

细胞遗传学分析表明70%～90%M3存在15和17号染色体易位，M3的MPO显著高水平提示可能与这一易位相关。

用MPO探针与M3患者骨髓染色体中期细胞杂交结果表明MPO基因从17号染色体转位至15号染色体，t（15;17）其断裂点位于17q11.2，并且部分M3患者存在MPO基因分子水平重排，表明MPO基因转位、重排和形成断裂点对M3亚型的形成具有发病学意义。

嗜酸粒细胞MPO呈强阳性，对花青苷不敏感。

嗜碱性粒细胞阴性或弱阳性。

ANLL中Auer小体MPO可为阳性。

有些粒细胞白血病表现过氧化酶缺乏。

Nielsen等报道AML患者出现严重感染时中性粒细胞会出现MPO缺乏。

有个别M3也表现出阴性，可能由于在转录过程中出现异常。

如有部分细胞表现强阳性，这提示MPO基因的表达并不完全丧失，可能是由于部分转录（transcribed）或产生了不稳定的无效RNA所致。

②单核系：

原始单核细胞溶解度很小，缺乏MPO活性，阴性和弱阳性。

幼稚单核细胞MPO呈阴性或弱阳性反应，少数可见较强阳性。

阳性反应物颗粒细小，散在分布于细胞浆与细胞核上。

（3）原始及幼稚巨核细胞MPO阴性,浆细胞MPO阴性。

（4）网状细胞MPO阴性或弱阳性。

（5）高雪氏细胞、尼门匹克细胞和组织嗜碱细胞MPO阴性,海兰细胞MPO阴性或阳性。

（6）原红及幼红细胞MPO呈阴性，AL时偶见弱阳性反应。

二．苏丹黑B染色（SudanblackB，SBB）

苏丹黑燃料是脂溶性燃料，能溶解于脂类，将组织细胞内的脂类显示出来。

在苏丹燃料中，以苏丹黑B的染色力最强，即可显示大的脂肪滴，也可显示微细结构中的隐性脂类，不受标本陈旧的影响。

脂类包括中性脂肪和类脂（磷脂、糖脂和胆固醇等），脂类不仅在体内贮存热量和供给热量，而且构成细胞各种质膜的重要成分。

脂蛋白构成细胞的各种质膜，与细胞的生理功能有密切关系。

[原理]苏丹黑B可溶解于细胞质内的含脂结构，将胞质中的中性脂肪、磷脂、胆固醇等脂类染色呈棕黑色或深黑色颗粒，定位于胞质中。

此染色机制不完全清楚，有些报告根据血细胞苏丹黑染色特殊性，提示苏丹黑显示血

细胞中脂类的原理，它不是一般的物理溶解现象，而是细胞化学结合的结果，但多数学者认为是细胞内的脂类物质与苏丹黑B染料非化学性结合。

[试剂配制]

1.固定液：

甲醛蒸气。

2.1%苏丹黑B乙醇溶液：

1g苏丹黑B溶于100ml70%乙醇内，待溶解后过滤。

3.0.2%核固红复染液：

0.2g核固红放入10%硫酸铝[AL2（SO4）3·18H2O]100ml中,混匀，置37℃水浴加温1小时，时时振荡，使其充分溶解，过滤备用。

[操作步骤]

1.将新鲜干燥涂片放入甲醛蒸气中，固定5～10分钟。

2.自来水冲洗10分钟后，再用蒸馏水冲洗，晾干。

3.置1%苏丹黑B乙醇溶液中，于37℃温箱1～2小时。

4.浸入70%乙醇中充分脱色10分钟，晾干。

5.放入0.2%核固红复染液中20分钟，水洗，晾干。

6.镜检。

染色后应及时观察，长期保存易褪色。

此方法试剂配制简单，但细胞背景较脏，成熟红细胞易染成黑色。

可将1%苏丹黑B乙醇溶液改成：

A液：

0.3g苏丹黑B溶于100ml无水乙醇中，振荡溶解后过滤。

B液：

16g结晶酚溶于30ml无水乙醇中和100ml0.3%Na2HPO4·12H2O混匀。

使用时，A液：

B液为3：

2混合，过滤。

其作用时间和上面方法相同。

[结果判断]阳性结果为胞质中出现棕黑色或深黑色颗粒。

阳性程度参考标准同MPO染色。

[正常参考结果]

1.粒细胞系：

原粒细胞为阴性或弱阳性反应；自早幼粒细胞及以后各阶段中性粒细胞均呈阳性反应，且随细胞成熟程度阳性反应渐增强；嗜酸粒细胞SBB染色为嗜酸颗粒边缘深染而中央淡染或粗大圆球状棕黑色阳性反应；嗜碱粒细胞呈阴性或弱阳性反应，颗粒大小不一。

2.其它细胞：

单核细胞、网状细胞呈阴性或弱阳性反应；幼红细胞、淋巴细胞、巨核细胞以及血小板均为阴性。

[临床意义]

1.急性白血病类型的鉴别：

SBB染色比POX染色出现的早，反应强度更强。

急性白血病反应强弱顺序：

M3>M2b>M2a>M6（粒）>M4>M1>M5>HAL>ALL

（1）各阶段淋巴细胞SBB均呈阴性反应。

但国内外均有报道ALLSBB染色可见阳性,1984年StassSA报道350例ALL有6例阳性，占1.6%,SBB阳性率>5%，最高64%，而MPO和NAS-DCE均为阴性。

他认为①SBB除染初级颗粒外，还能染不同的脂类，包括中性脂肪、磷脂和胆固醇。

白血病细胞内脂类代谢异常可导致SBB阳性。

②这些病例可能代表淋巴系和髓系混合白血病，但可能性小，认为SBB阳性ALL是ALL的一个特殊的细胞化学亚类，并对治疗方案发生良好反应。

我院观察329例ALL，阳性15例，占4.6%，阳性率低，反应强度弱，阳性物颗粒细小，可能是线粒体磷脂。

（2）原始粒细胞SBB染色阴性，分化较好原始粒细胞在核周Golgi器开始出现弱阳性反应，阳性物颗粒粗大、聚集、浓缩；早幼粒及以下阶段粒细胞SBB为阳性，阳性强度（++～++++）。

M2b中分化不好的异常中幼粒细胞SBB在细胞核的凹陷处，呈团块状反应；发育好的异常中幼粒细胞阳性物充满胞浆，呈强阳性反应。

APL异常早幼粒细胞SBB反应最强，强度为（+++）～（++++）。

急性非淋巴细胞白血病（ANLL）细胞内的Auer小体表现强的嗜苏丹黑B染色

（3）原、幼单核细胞呈阴性或弱阳性,阳性物颗粒细小,散在分布于细胞浆与细胞核上。

（4）原始及幼稚巨核细胞MPO阴性,浆细胞MPO阴性。

（5）网状细胞MPO阴性或弱阳性。

（6）高雪氏细胞、尼门匹克细胞和组织嗜碱细胞MPO阴性,海兰细胞MPO阴性或阳性。

（7）原红及幼红细胞MPO呈阴性，AL时偶见弱阳性反应。

三．过碘酸-雪夫反应（periodicacid-schiff，PAS，又名糖原染色）

[原理]过碘酸能将血细胞内含有乙二醇基的多糖类物质氧化产生双醛基，后者与雪夫染液中无色品红结合，产生紫红色化合物，定位于含多糖类物质的胞质中。

阳性反应的强弱与细胞内乙二醇基的含量成正比。

[反应式]

⑴.醛基的生成：

⑵.碱性复红染液

⑶.2分子醛基与1分子的无色品红结合，形成新的化合物。

[试剂配制]

1.固定液：

95%乙醇。

2.1%过碘酸水溶液：

1g过碘酸加入100ml蒸馏水。

避光保存。

3.雪夫染液：

将100m1蒸馏水煮沸，缓缓加入碱性品红1g，待冷却至50～60℃时加入1mol/L盐酸20m1混匀，使之溶解，待冷却至25℃时加入重亚硫酸钠2g，立即加盖避光过夜。

次日加入优质活性炭0.1g，摇匀过滤，为无色透明溶液，置于4℃冰箱避光保存。

4.Maryer’s苏木精溶液复染液。

[操作步骤]

1.涂片在95％乙醇中固定10分钟，晾干。

2.放入1％过碘酸溶液中，37℃温箱氧化20分钟（暗处），水洗、吸干。

3.放入37℃温箱干燥1小时。

4.置于雪夫染液内，37℃温箱作用30分钟。

5.迅速用自来水冲冼，晾干。

6．Maryer’s苏木精溶液复染5～20分钟,水洗，晾干后镜检。

染色后应及时观察，长期保存易逐渐褪色。

[唾液消化实验]

糖原、粘多糖、糖蛋白、糖脂等过碘酸-碱性复红染色均呈阳性，为了鉴别糖原与其他多糖类物质，标本在经过过碘酸-碱性复红染色之前，先进行唾液消化，凡能被唾液消化的物质，可认为是糖原。

[试剂的比较及注意事项]：

1.固定剂的影响：

纯甲醇、95%乙醇、甲醛蒸气三种固定剂对染色的影响，以乙醇固定后糖原颗粒明显

经消化后无假阳性。

2.过碘酸对染色的影响：

过碘酸易潮解，应避光并置于干燥器中保存。

1%过碘酸水溶液为氧化剂，配置时间不

应太长，避光保存。

1%过碘酸水溶液和酒精溶液对染色的影响，结果发现水溶液的反应较

强，染色时间以20分钟为宜，避光，染3~4次换一次。

3.不同牌号的碱性品红对颜色的影响：

由于不同牌号的品红所含成分不同，配成的碱性副红染液的颜色亦异，染色的结果自然不相同，对比北京、天津、德国、英国等几种染料，结果以北京和天津（二级）碱性品红为最好。

4.雪夫试剂应避光，免受潮，遇水变红失效，所以试剂应减少与空气接触时间。

染缸磨

口应涂凡士林，片子要烤干后再染，否则，片子发红细胞易为假阳性，试剂使用时间短。

5.骨髓片应及时固定。

6.有核红细胞PAS复染时间短5～10分钟，白血病细胞复染时间长20分钟。

7.染色后标本应尽早观察，染色标本保存8天后会逐渐退色。

[结果判断]阳性结果为胞质内出现粉红色颗粒、珠状或块状，细胞核为蓝色。

PAS阳性物分布：

细颗粒弥散状；中粗颗粒、粗颗粒散在分布；呈裙边样反应；细颗粒弥散状基础上可见小珠；珠状、块状成冠。

[阳性程度参考标准]

1.粒细胞的分级标准

（-）胞浆无阳性物。

（+）胞浆为粉红色，颗粒不明显，有薄而透明的感觉或在胞浆边缘有极少的深红颗粒。

（++）胞浆为红色，厚而不透明，有颗粒，但数目较少，或在胞浆边缘有很深的颗粒。

（+++）胞浆为深红色，其中红色颗粒很多或糖原呈片状，颗粒虽然很密，但似有空隙，胞浆很厚。

（++++）胞浆呈紫红色，颗粒极密，无空隙。

2.有核红细胞的分级标准

（-）无阳性反应物。

（+）胞浆中有少数分散的红色细小颗粒或呈浅红色的物质。

（++）胞浆中有1～10个中等大小的红色颗粒或弥漫较多的细小颗粒。

（+++）胞浆中有11～20个中粗红色颗粒或弥散很多的有一定空隙的深红色细小颗粒。

（++++）胞浆中红色颗粒极多，粗且致密，或成紫红色的物质。

3.淋巴细胞的分级标准

（-）胞浆内无粉红色的物质或颗粒。

（+）胞浆内有10个以下的中粗颗粒或弥漫的浅红色物质。

（++）胞浆内有10个以上中粗颗粒至许多颗粒组成一环冠，或有半圈粗颗粒，或有一个小珠或一个大块者。

（+++）中粗颗粒组成两个环冠或由粗颗粒组成一个环冠或大块与珠组成半环。

（++++）粗颗粒组成两个环，块、珠绕核成一环。

4.巨核细胞的分级标准

（-）细胞内无糖原，但细胞浆内可有弥漫性着色，此系其它多糖类物质。

（+）含少量糖原者，即含有数小块或一大块糖原，糖原常定位与近核膜上。

（++）胞浆内含有中等量糖原，即含有许多小块或较多大块糖原。

（+++）胞浆内含有大量糖原，呈许多大块状，其总面积约占胞浆面积的1/5以上者。

[正常参考结果]

1.粒细胞系：

原粒细胞多呈弱阳性反应，少部分为阴性。

自早幼粒细胞以后随细胞的成熟程度阳性反应逐渐增强，至成熟阶段阳性最强。

嗜酸粒细胞颗粒本身不着色，但颗粒间的胞浆呈弥漫粉红色；嗜碱粒细胞为阳性，反应物呈粗颗粒、珠状和块状。

2.淋巴细胞系：

大多数淋巴细胞呈阴性反应，少数胞质内有少量红色颗粒。

B淋巴细胞PAS正常值为阳性率20%；阳性指数30。

3.红细胞系：

幼红细胞和成熟红细胞均呈阴性反应。

4.巨核细胞系和血小板：

巨核细胞及血小板PAS反应均为阳性，呈珠状或块状。

正常值：

成熟巨核细胞阳性指数为PAS107.4±13.8。

5.其它细胞：

单核细胞呈阳性反应，阳性反应物为细颗粒弥散状，中粗颗粒往往位于胞浆边缘；浆细胞大多呈阴性，少数为淡粉色，看不清颗粒；组织细胞为阳性或阴性反应；巨噬细胞可呈细颗粒的阳性反应。

[临床意义]

1.急性白血病类型的鉴别

（1）原、幼淋细胞PAS染色阴性或阳性，阳性反应物呈中粗颗粒、粗颗粒、珠状和块状

围绕核周。

成熟淋巴细胞为细颗粒、中粗颗粒、粗颗粒散在分布。

（2）原粒及早幼粒细胞呈阴性或弱阳性，阳性反应物多为细颗粒弥散状。

（3）APL：

异常早幼粒细胞的PAS反应呈强阳性，阳性反应物为密集的细颗粒弥散状，胞浆边缘及外浆处多分布粗大颗粒，部分病例细胞胞浆内易见柴束状结晶，少数病例在细颗粒弥散状基础上可见1～2个小珠。

（4）原、幼单核细胞PAS较粒细胞强，阳性反应呈细颗粒弥散状分布，部分夹杂中粗颗

粒、粗颗粒，胞质边缘及伪足处呈大粗颗粒，少部分在此基础上可见小珠，少数可见裙边样

反应。

M4EO异常嗜酸粒细胞PAS可见深粉红色小珠。

（5）ANLLAuer小体PAS阳性。

（6）微分化型AL（M0）PAS可为细颗粒、中粗颗粒散在分布；部分在此基础上可见小珠。

（7）原始巨核细胞PAS呈阴性或阳性反应，部分为强阳性，阳性反应物可呈细颗粒弥散状，可呈中粗颗粒、粗颗粒散在分布，部分可见小珠或块状。

小巨核细胞PAS呈细小颗粒弥散状，边缘处为粗颗粒及小珠。

（8）嗜碱粒细胞白血病的嗜碱粒细胞PAS为强阳性，阳性物多表现粗颗粒、珠状、块状。

与幼稚淋巴细胞PAS较难鉴别。

（9）浆细胞PAS弱阳性，一般呈淡粉色看不清颗粒，极少数病例可见粗颗粒和小珠。

（10）AHLPAS部分细胞呈细颗粒弥散状，部分细胞呈粗颗粒、珠状。

2．红细胞系统

阴性：

正常人和再生障碍性贫血。

强阳性：

各类急性AL、MDS、缺铁性贫血、重型地中海贫血。

弱阳性：

溶贫、ITP、CLL等。

巨幼细胞贫血大多数病例为阴性，但有少数可见弱阳性和中等强度阳性。

阳性反应物：

原、早红细胞为大粗颗粒、珠、块状，中、晚幼红细胞为细颗粒弥散状分

布，成熟红细胞有时亦可为阳性。

3.其它细胞的鉴别

高雪细胞呈强阳性反应；尼曼-匹克细胞PAS染色为阴性或弱阳性，空泡中心阴性。

用PAS染色鉴别高雪细胞和尼曼-匹克细胞。

非霍奇金淋巴瘤（NHL）细胞PAS呈阴性或阳性反应，阳性反应物为中粗颗粒、粗颗粒

散在分布；Reed-Sternberg细胞则为弱阳性或阴性反应。

骨髓转移瘤细胞PAS大部分呈强阳性；腺癌细胞PAS呈强阳性反应，表现为红色颗粒

或块状。

组织嗜碱细胞PAS强阳性，细颗粒弥散状，部分可见大粗颗粒。

四、氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色（naphtholAS-Dchloroacetateesterase，NAS-DCE）

CE通常被看成是粒细胞及肥大细胞的标志酶，能水解长链脂肪酸的酶。

分布局限，很多报道都强调了它对粒细胞有较强的特异性。