铁皮石斛质量标准.docx

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铁皮石斛质量标准

铁皮石斛质量标准（总5页）

【石斛质量标准正文】

石斛

Shihu

CaulisDendrobi

本品为兰科植物金钗石斛DendrobiumnobileLindl.铁皮石斛DendrobiumcandidumWall.exLindl.或马鞭石斛DendrobiumfimbriatumHook.var.oculatumHook.的新鲜或干燥茎。

全年均可采收，鲜用者除去根及泥沙；干用者采收后，除去杂质，用开水略烫或烘软，再边搓边烘晒，至叶稍搓净，干燥。

铁皮石斛剪去部分须根后，边炒边扭成螺旋形或弹簧状，烘干，习称“铁皮枫斗（耳环石斛）”。

【性状】

鲜石斛呈圆柱形或扁圆柱形，长约30cm，直径0.4～1.2cm。

表面黄绿色，光滑或有纵纹，节明显，色较深，节上有膜质叶稍。

肉质，多汗，易折断。

气微，味微苦而回甜，嚼之有黏性。

金钗石斛呈扁圆柱形，长20～40cm，直径0.4～0.6cm，节间长2.5～3cm。

表面金黄色或黄中带绿色，有深纵沟。

质硬而脆，断面较平坦。

味苦。

铁皮枫斗呈螺旋形或弹簧状，一般为2～4个旋纹，茎拉直后长3.5～8cm，直径0.2～0.3cm。

表面黄绿色，有细纵皱纹，一端可见茎基部留下的短须根。

质坚实，易折断，断面平坦。

嚼之有黏性。

马鞭石斛呈长圆锥形，长40～120cm，直径0.5～0.8cm，节间长3～4.5cm。

表面黄色至暗黄色，有深纵槽。

质疏松，断面呈纤维性。

味微苦。

【鉴别】

横切面：

金钗石斛表皮细胞1列，扁平，外被鲜黄色角质层。

基本组织细胞大小较悬殊，有壁孔，散在多数外韧型维管束，排成7~8圈。

维管束外侧纤维束新月形或半圆形，其外侧薄壁细胞有的含类圆形硅质块，木质部有1~3个导管直径较大。

含草酸钙针晶细胞多见于维管束旁。

铁皮枫斗表皮细胞外壁及侧壁稍增厚、微木化。

维管束略排成4~5圈，外侧小型薄壁细胞种有的含硅质块。

含草酸钙针晶束细胞多见于近表皮处。

马鞭石斛表皮细胞扁圆形，外壁及侧壁增厚，木化，有层纹。

基本组织细胞大小相近，有壁孔，维管束略排成3~4圈。

【检查】

水分照水分测定法测定，不超过6.0%

总灰分不超过6.0%

灰屑不超过3.0%

败片率不超过1.0%

破碎率不超过3.0%

【含量测定】按照高效液相色谱法测定。

色谱条件：

色谱柱为KromasilRKR100-5C18（250mm×4.6mm,5μm）;流动相为乙腈（A）-0.4%磷酸溶液（B）进行线性梯度洗脱,0~5min3%A~10%A,5~12min10%A~15%A,12~25min15%A~22%A,25~40min22%A~35%A,40~50min35%A~55%A,50~60min55%A~60%A;体积流量:

1.0mL/min;检测波长270nm;柱温30℃;运行时间为60min

对照品溶液的制备精密称取石斛碱对照品15.45mg，置5mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得石斛碱对照品母液。

精密量取1mL，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液，备用（对照品溶液质量浓度：

123.6mg·L-1）。

对照液的制备

对照品溶液的制备取DextranT系列标准分子量葡聚糖用蒸馏水配成适当浓度的溶液，过微孔滤膜，即得标准溶液。

供试品溶液的制备取铁皮石斛药材,50℃干燥4h,粉碎,过60目筛。

取药材粉末1g,精密称定,置于索氏提取器中,加甲醇50mL水浴回流4h,提取液挥去部分溶剂,冷却,加甲醇定容至10mL,用0.45μm微孔滤膜滤过,滤液作为供试品溶液

测定法取标准溶液通过HPLC进行测定，以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲。

本品按干燥品计算，含多糖的量不得少于11.48%。

【炮制】干品除去残根，洗净，切段，干燥。

鲜品细净，切断。

酒炒。

【性味与归经】甘，微寒。

归胃、肾经。

【功能与主治】益胃生津，滋阴清热。

用于阴伤津亏，口干烦渴，食少干呕，病后虚热，目暗不明。

【用法与用量】6～12g，鲜品15～30g。

入复方宜先煎，单用可久煎。

【贮藏】干品置通风干燥处，防潮；鲜品置阴凉潮湿处，防冻。

【石斛质量标准起草说明】

（一）概述

石斛收载于《中国药典》（05年版），原标准中无定量方法，对铁皮石斛药材的质量控制仍停留在简单的性状鉴别[1],这远远不能实现对铁皮石斛药材进行全面的质量控制

根据药典会有关文件的要求，对该品种质量标准进行提高。

据文献报道，国际上传统药用石斛以金钗石斛为主，但近年来研究结果发现铁皮石斛的总多糖、水溶性多糖含量在三种石斛属植物中是最高的。

铁皮石斛主要有效成份是石斛多糖和石斛碱，铁皮石解多糖由D一木糖、L一阿拉伯糖和-D葡萄糖组成。

研究表明，多糖成分与铁皮石斛的药效，如增强肌体免疫机能、抗肿瘤、抗衰老、抗疲劳、降血糖等方面，有着密切的联系。

故采用石斛多糖作为铁皮石斛含量测定的指标。

（二）质量标准起草说明

1、来源

石斛属植物是我国重要的传统中药材，药用价值历代为人们所推崇。

而铁皮石斛为石斛之上品，因其特殊的生存环境和卓著的滋补功效而名列“中华九大仙草”之首。

铁皮石斛是多年野生植物，生是在岩石峭壁上，分布在我国的西南部，广西、云南、贵州等山区;中南地区的湖南、江西、广东以及福建浙江等省。

2、性状

《中国药典》（2005版）规定为嚼之有黏性，经实样比较，本品改为气微，味淡，嚼之有粘，汁多无渣较合适。

3、鉴别

（1）铁皮石斛的显微鉴别：

表皮细胞外壁及侧壁稍增厚、微木化。

维管束略排成4~5圈，外侧小型薄壁细胞种有的含硅质块。

含草酸钙针晶束细胞多见于近表皮处。

显微特征图如下：

（2）薄层色谱法鉴别：

原标准中无此鉴别方法。

在此添加此方法鉴别，方法如下：

供试品溶液制备:

取以上各样粗粉0.5g，分别置25mL带塞三角瓶中，各加浓氨水6滴，使粉末润湿，密塞放置15min，各加氯仿5mL冷浸过夜，再于50℃温浸6h，放冷滤过，滤液浓缩至干，加氯仿0.1mL溶解，做为供试品溶液。

取以上各样供试品溶液各10uL，点于0.5%CMC-Na硅胶G板上，置于氨蒸气饱和的氯仿-甲醇（10:

8）展开剂中展开，展距为10cm，取出，冷干，先置紫外光灯（365mm）下观察，各供试品在不同位置上均呈蓝色荧光斑点（见下图2）;然后喷改良碘化钛钾试液，各供试品在不同位置上均呈橙红色斑点（见下图2）。

（3）红外光谱鉴别：

将样品剪成粗粒混匀,于60℃下干燥至恒重,取2g,除去叶鞘,粉碎过200目筛,粉末放入洁净称量瓶并放入干燥器中备用。

精取样品4mg（使其最强吸收峰的透光率在10%以下）KBr200mg,在红外灯下混合研磨均匀,放入模具内,压强为9.8×10^8Pa,作用时间3min,取出,可得直径13mm,厚度0.5mm左右的供试片,立即放入样品架进行测量。

测定区域4000~400cm﹣1中速扫描。

为确保图谱的可比性,每次取样量必须相同。

实验结果重复3次,如其图谱稳定的情况下,将结果输入计算机检索红外光谱库。

铁皮石斛在1600cm-1~1480cm-1处有一强吸收峰并带有两个肩峰;1450cm-1~1100cm-1处有四重峰,中间二峰吸收强度较接近;1000cm-1~700cm-1处有一高笔架峰,两侧有肩峰。

铁皮石斛红外光谱图如下图所示

4、检查

水分照水分测定法测定，不超过6.0%

总灰分不超过6.0%

灰屑不超过3.0%

败片率不超过1.0%

破碎率不超过3.0%

5、含量测定

（1）仪器与试药Agilent1100液相色谱仪（美国惠普公司）,电子天平（MettlerToledoAG285）,乙腈（Tedia公司,色谱纯）,甲醇、磷酸（上海化学试剂有限公司,分析纯）。

10批铁皮石斛药材采集于云南思茅石膏井镇,经南京中医药大学药学院陆兔林教授鉴定为兰科植物

色谱条件色谱柱为KromasilKR100-5C18（250mm×4.6mm,5μm）;流动相为乙腈（A）-0.4%磷酸溶液（B）进行线性梯度洗脱,0~5min3%A~10%A,5~12min10%A~15%A,12~25min15%A~22%A,25~40min22%A~35%A,40~50min35%A~55%A,50~60min55%A~60%A;体积流量:

1.0mL/min;检测波长270nm;柱温30℃;运行时间为60min。

（2）条件的优化空白试验精密吸取空白溶液（甲醇）10μL,注入高效液相色谱仪,按规定的梯度条件进行洗脱。

结果表明空白不干扰测定。

最佳检测波长首先对铁皮石斛药材的供试品溶液在200~400nm进行了DAD全波长扫描,发现其在270nm处能体现较多的吸收峰且强度较大,故选择270nm作为检测波长。

（3）提取条件的优化

提取溶剂的优化在实验过程,考察了不同提取溶剂,包括石油醚、二氯甲烷、甲醇、乙醇、95%乙醇、70%乙醇、50%乙醇、70%甲醇、50%甲醇等对样品提取效果的影响,色谱图表明甲醇对铁皮石斛药材的提取效率较优。

提取方法的选择对加热回流、索氏提取、超声提取等提取方法进行了比较,结果表明索氏提取法能较好地将成分富集,因此确定索氏提取为样品的提取方法。

并进一步考察了提取时间,分别对药材索氏提取2、3、4、5h进行了考察,结果表明对大多数色谱峰而言,以4h提取效率最高,4、5h提取效率无明显差异,因此确定样品的索氏提取时间为4h。

提取时间的优化取铁皮石斛供试品溶液按要求进样,在洗脱60min后,再保持60%乙腈60min,经分析,铁皮石斛药材2h梯度洗脱图谱显示,保留时间60min后已无成分残留。

确定铁皮石斛指纹图谱的提取时间为60min。

（4）不同色谱柱的考察比较YWG-C18柱（250mm×4.6mm,5μm）、Kromasil-5C18（250mm×4.6mm,5μm）、LichrospherC18（250mm×4.6mm,5μm）3种色谱柱,相同色谱条件下,以Kromasil-5C18柱色谱行为较好,因此,选用Kromasil-5C18柱为指纹图谱分析用色谱柱。

（5）供试品溶液的制备取铁皮石斛药材,50℃干燥4h,粉碎,过60目筛。

取药材粉末1g,精密称定,置于索氏提取器中,加甲醇50mL水浴回流4h,提取液挥去部分溶剂,冷却,加甲醇定容至10mL,用0.45μm微孔滤膜滤过,滤液作为供试品溶液

（6）精密度试验取同一供试品溶液,连续进样5次,考察各色谱峰相似度的一致性,利用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004年A版进行相似度评价,相似度平均值为0.999,RSD为0.0%。

结果表明仪器精密度良好。

（7）重现性试验取同一批铁皮石斛药材分别提取制备5份供试品,进行检测,考察各色谱峰相似度的一致性,利用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004年A版进行相似度评价,相似度平均值为0.999,RSD为0.1%。

结果表明实验重现性良好。

（8）稳定性试验取同一供试品溶液,分别在0、1、4、7、12、16、24、29h检测,考察各色谱峰相似度的一致性,利用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004年A版进行相似度评价,相似度平均值为1,RSD为0.1%。

结果表明供试品在29h内稳定。