子宫内膜癌患者外周血CD4.doc
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子宫内膜癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的变化情况
通信作者:
张维娜周芳麻娜
单位地址:
河北省望都县皮肤病防治院检验科
摘要：
目的：
研究子宫内膜癌患者外周血CD4+CD25+Treg的数量及与患者临床病理特征的关系。
方法：
用流式细胞分析方法检测80例子宫内膜癌患者外周血T淋巴细胞亚群及CD4+CD25+Treg比例变化。
结果：
子宫内膜癌患者外周血CD4+CD25+Treg比例高于对照组（6.63±1.61%&3.14±0.73%，P＜0.05）。
子宫内膜癌患者外周血CD4+CD25+Treg比例与年龄、临床分期和有无淋巴结转移有相关性，结论：
子宫内膜癌患者CD4+CD25+Treg数量异常与其病程进展和机体的免疫状况有关。
关键词:
“子宫内膜癌”“外周血”“CD4+CD25+Treg”
ThechangeofperipheralbloodCD4+CD25+TregofpatientswithEndometrialcancer
Abstract:
Purpose:
InvestigatetherelationshipbetweenthequantityofperipheralbloodCD4+CD25+TregofpatientswithEndometrialcancerandClinicalpathologicalfeatures.Method:
DetecttheproportionchangingofperipheralbloodT-lymphocytesubsetsandCD4+CD25+Tregamong80patientswithEndometrialcancerbyFlowcytometryanalysis.Result:
TheproportionofCD4+CD25+TregofpatientswithEndometrialcancerarehigherthanthecontrolgroup（6.63±1.61%&3.14±0.73%，P＜0.05）.TheproportionofCD4+CD25+TregofpatientswithEndometrialcancerhavecorrelationwithage、clinicalstagesandlymphaticmetastasis.Conclusion:
TheabnormityofthequantityofCD4+CD25+TregofpatientswithEndometrialcancerisrelatedtodiseaseProgressionandimmunestatusoftheorganism.
KeyWords:
Endometrialcance,peripheralblood,Treg
肿瘤的发生、发展与机体的免疫监视机能密切相关，CD4+CD25+Treg能抑制Ｔ细胞对外源和自体抗原的免疫反应，在维持对自身成分免疫耐受的同时,也可能阻止机体对自体同源肿瘤细胞的免疫。
而且肿瘤恶性程度越高，CD4+CD25+Treg水平越高，其预后也越差［1］.单克隆抗体抗诱导肿瘤免疫近来越来越多的研究致力于将肿瘤疫苗与封闭CD4+CD25+Treg结合起来作为肿瘤免疫治疗新途径。
本研究通过流式细胞技术检测子宫内膜癌患者外周血中的CD4+CD25+Treg变化情况，探讨CD4+CD25+Treg在子宫内膜癌患者外周血中的变化规律及临床意义，为子宫内膜癌的早期诊断及免疫治疗提供依据。
1、材料及方法
1.1子宫内膜癌组患者80例，均为河北大学附属医院妇科2009年1月到2011年1月的住院手术治疗的子宫内膜癌患者，年龄为39～67岁，平均年龄53.2岁。
实验标本均经病理切片证实。
按照1988年国际妇产科联盟（FIGO）的手术病理分期标准，I-Ⅱ期44例，Ⅲ-Ⅳ期36例；病理分级G1级36例，G2级30例，G3级14例。
其中14例伴淋巴结转移。
对照组门诊体检者40例（无糖尿病、甲状腺疾病、肾功能不良等疾病），年龄22-65岁，平均年龄48.39岁。
1.3实验步骤
1.3.1标本采集和处理子宫内膜癌组患者在确诊24h内采血2mlEDTA抗凝，对照组采2ml静脉血EDTA抗凝，送检。
具体实验步骤：
（1）取静脉全血100μL，分别加入CD4PE标记和CD25FITC标记的mAb试剂20μL，设相应的阴性同型对照，室温闭光反应30min，然后加2mL溶血剂，5min后离去上清，再加0.5~1.0mL的PBS液洗涤2次，流式细胞仪（BD公司，FACSCalibur）检测，Cellquest软件分析数据，记录阳性细胞百分率，减去非特异对照值，样品在6h内检测完毕.PE标记的鼠抗人CD4,FITC标记的鼠抗人CD25mAb及同型对照PE标记的鼠抗人IgG1,FITC标记的鼠抗人IgG1免疫球蛋白均购自法国A.COULTER公司，溶血剂为实验室自行配制.
1.3.2统计学处理
实验数据以x±s表示，使用SPSS12.0统计软件进行方差分析及两两比较，组内前后比较用配对t检验，P<0.05为有统计学意义.
2结果
2.1..子宫内膜癌患者外周血T淋巴细胞比例的比较：
子宫内膜癌患者CD3+CD8+、CD4+CD25+比例比对照组升高差异有显著性，P＜0.05.（表1）
表1子宫内膜癌患者外周血中淋巴细胞亚群比例（平均百分比）
组别
n
CD3+CD4+
CD3+CD8+
CD4+CD25+
病例组
80
46.91±3.94
35.16±4.57
6.63±1.61＊
对照组
40
46.77±3.21
33.16±5.16
3.14±0.73
t/t’
0.179
2.170
16.603
P
0.859
0.032
0.001
2.2子宫内膜癌患者外周血CD4+CD25+Treg与患者临床病理特征的关系：
子宫内膜癌患者外周血CD4+CD25+Treg水平与患者的FIGO分期、淋巴结转移及年龄的差异有显著性，P＜0.05.与患者的病理分期差异无显著性，P＞0.05.（表2）
表2子宫内膜癌患者外周血CD4+CD25+Treg
与患者临床病理特征的关系
临床病理特征
n
CD4+CD25+（%）
P值
FIGO分期
Ⅰ期-Ⅱ期
Ⅲ期-Ⅳ期’
病理分期
0.001
44
6.30±1.87
36
8.06±0.80
G1期
G2期
G3期
36
6.57±1.83
1.032
30
6.34±1.38
14
7.39±1.32
淋巴结转移
0.001
有转移
14
8.11±0.68
无转移
66
6.31±1.58
年龄（岁）
0.045
<50岁
20
33.17±3.04
≥50岁
60
35.66±5.15
3讨论
CD4+CD25+调节性T细胞是一具有免疫调节功能的T细胞亚群，Treg在机体免疫稳态维持、移植耐受、过敏反应、微生物感染及肿瘤免疫等方面的调节功能均得到了证实。
CD4+CD25+Treg能抑制Ｔ细胞对外源和自体抗原的免疫反应，在维持对自身成分免疫耐受的同时,也可能阻止机体对自体同源肿瘤细胞的免疫。
我们通过对80例子宫内膜癌患者外周血T淋巴亚群的检测，并与正常对照组进行了对比研究发现：
子宫内膜癌患者外周血CD3+CD4+比例与正常人无差异，CD3+CD8+、CD4+CD25+比例高于正常人。
正常人外周血CD4+CD25+细胞占CD4+比例为2.11%-4.36%，子宫内膜癌患者外周血CD4+CD25+细胞占CD4+比例为6.63%±1.61%.说明子宫内膜癌患者外周血存在T淋巴细胞亚群失衡。
有研究表明，CD4+CD25+Treg在许多肿瘤患者的外周血和肿瘤组织中均有增高［2，3］，提示肿瘤患者可能存在天然的免疫反应，肿瘤细胞可以产生一系列逃避抗肿瘤反应的机制，肿瘤患者体内CD4+CD25+Treg数量的增高即是抑制肿瘤免疫的机制之一［4］.CD4+CD25+Treg通过抑制效应T细胞功能，在维持自身免疫耐受中发挥重要作用［5］.
本结果同时显示，子宫内膜癌患者外周血中CD4+CD25+Treg的数量与病理类型无相关性（P>0.05），但与年龄、临床分期关系和有无淋巴结转移有相关性（≥50岁患者CD4+CD25+Treg数量高于<50岁患者，Ⅳ期患者CD4+CD25+Treg高于前三期，而伴有淋巴结转移者CD4+CD25+Treg数量高于无淋巴结转移患者）。
证明随着机体免疫状态的下降、肿瘤的进展，肿瘤细胞产生的CD4+CD25+Treg数量增多，使免疫细胞的活性被抑制，子宫内膜癌患者抗肿瘤免疫应答减弱，有利于肿瘤的生长与转移［6］。
进一步对子宫内膜癌患者外周血CD4+CD25+Treg与性激素水平进行相关性分析发现：
子宫内膜癌患者外周血CD4+CD25+Treg与血清中LH水平呈负相关，与E2、P水平呈正相关。
说明LH、E2、P对CD4+CD25+Treg的数量变化具有重要的意义.Polanczyk等[7]将雌二醇（E2）作用于自身免疫性脑脊髓炎的小鼠，发现在小鼠体内外都可以增加CD4+T细胞FOXP3的表达，从而影响调节性T细胞数目及功能。
CD4+CD25+Treg具有重要的免疫抑制作用,目前尚有许多问题有待于进一步研究,如肿瘤病人CD4+CD25+Treg升高的机制，多个机制共同参与？
哪一个更重要？
多个机制参与控制CD4+CD25+Treg免疫调节作用的强度？
CD4+CD25+Treg如何在肿瘤免疫逃逸中发挥作用等都需要我们深入的研究。
［1］SeoN,HayakawaS,TakigawaM,etal.Interleukin10expressatearlytumorsitesinducessubsequentgenerationofCD4+Tregulatorycellsandsystemiccollapesofantitumourimmunity［J］.Immunology,2001,103（4）:
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PossibleinvolvementofregulatoryTcellsindisease progression［J］.Cancer,2003,98（5）:
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380-384.
［6］LiyangeUK,MooreTT,JooHG,etal.PrevalenceofregulatoryTcellsisincreasedinperipheralbloodandtumormicroenvironmentofpatientswithpancreasorbreastadenocarcinoma［J］.Immunology,2002,169（5）:
2756-2761.
［7］PolanczykMJ,CarsonBD,SubramanianS,etal.Cuttingedge:
estrogendrivesexpansionoftheCD4+CD25+regulatoryTcellcompartment[J].JImmunol,2004,173（4）:
2227-2230.
作者：
张维娜1979年10月7日硕士研究生病原生物免疫方向主管检验师
单位：
河北省望都县皮肤病医院检验科邮编：
072450
联系电话：
13722201220
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