不同TgAb浓度对血清Tg放免法浓度测值影响的研究.docx

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不同TgAb浓度对血清Tg放免法浓度测值影响的研究

不同TgAb浓度对血清Tg放免法浓度测值影响的研究

　　[摘要]目的探讨不同浓度的抗甲状腺球蛋白抗体（TgAb）对甲状腺球蛋白（Tg）测量值的干扰。

方法通过混合Tg和TgAb标准品，混合患者的血清高Tg低TgAb和高TgAb低Tg产生实验样本，用放射免疫法测量Tg。

比较混合前后Tg浓度值。

结果Ⅰ组试验样本的变异系数为（4.21±3.51）%（0～14.82）（r=0.998）；Ⅱ组试验样本的变异系数为（2.83±2.23）%（0.87～11.21）（r=0.999）；Ⅰ组样本中，增加TgAb浓度，Tg的测量值呈比例下降，呈明显的直线负相关趋势（P均＜0.01）；Ⅱ组样本中，随着TgAb浓度增高，Tg的测量值呈比例下降，呈明显的直线负相关趋势（P均＜0.05）。

结论血清TgAb浓度过高，Tg的测定值显著会低于实际Tg浓度值，且TgAb的浓度越高，对Tg分析产生的干扰越大。

所以临床工作中，分析血清Tg测定值，需要结合血清TgAb测定值。

　　[关键词]甲状腺球蛋白；甲状腺球蛋白抗体；分化型甲状腺癌；放射免疫法

　　[中图分类号]R736.1   [文献标识码]A   [文章编号]2095-0616（2014）08-07-04

　　StudyofinfluenceofdifferentTgAbconcentrationsonradioimmunoassaymeasurementofserumTgconcentrations

　　HE Jian1,2  PAN Mingzhi2  HUANG Rui2  TANG Gongshun2

　　1.DepartmentofNuclearMedicine,ChengduSecondPeople'sHospital,Chengdu610017,China;2.DepartmentofNuclearMedicine,WestChinaHospitalofSichuanUniversity,Chengdu610041,China

　　[Abstract]ObjectiveToevaluatetheinterferenceofdifferentconcentrationsofanti-thyroglobulinantibodies（TgAb）onthemeasurementvaluesofthyroglobulin（Tg）.MethodsThroughblendingTgandTgAbstandards,thepatients'serumhighTgandlowTgAbandhighTgAbandlowTgwereblendedtoproduceexperimentalsamples.TheradioimmunoassaywasusedtomeasureTg.TheTgconcentrationvaluesbeforeandafterblendingwerecompared.ResultsThevariationcoefficientoftheexperimentsamplesingroupIwas（4.21±3.51）%（0-14.82）（r=0.998）;ThevariationcoefficientoftheexperimentsamplesingroupⅡwas（2.83±2.23）%（0.87-11.21）（r=0.999）.InthesamplesofgroupI,whenincreasingtheTgAbconcentration,theIgmeasurementvaluedroppedproportionally,presentingasignificantlinearnegativecorrelationtrend（P＜0.01forall）;InthesamplesofgroupⅡ,astheTgAbconcentrationincreased,theIgmeasurementvaluedroppedproportionally,presentingasignificantlinearnegativecorrelationtrend（P＜0.05forall）.ConclusionWhentheserumTgAbconcentrationisexcessivelyhigh,themeasurementvalueofTgissignificantlylowerthantheactualTgconcentrationvalue,andthehighertheTgAbconcentrationis,thelargertheinterferenceproducedbyTgis.Therefore,inclinicalwork,analysisofserumTgmeasurementvalueshouldcombineserumTgAbmeasurementvalue.

　　[Keywords]Thyroglobulin;Thyroglobulinantibodies;Differentiatedthyroidcancer;Radioimmunoassay

　　血清甲状腺球蛋白（thyroglobulin，Tg）是甲状腺滤泡上皮细胞合成的一种二聚体糖蛋白，贮存在细胞或者滤泡腔内，以胶体形式在细胞和腺腔内循环，仅微量Tg进入血液循环内。

分化型甲状腺癌（differentiatedthyroidcancer，DTC）患者经手术切除和131I清甲治疗后，血清Tg应小于1ng/mL或者检测不到，如血清Tg水平升高，提示有可能存在DTC临床复发或转移。

因此，准确检测血清Tg浓度是判断分化型甲状腺癌（DTC）患者有无复发和转移的一种特异性高的检查方法[1-3]。

血清Tg刺激产生甲状腺球蛋白抗体（thyroglobulinantibody，TgAb），由于TgAb的存在，干扰了血清Tg的测量[4]。

当TgAb存在时，测量TSH刺激状态的Tg浓度，将导致评判甲状腺癌复发或转移的失败。

有人认为TgAb对Tg影响的大小与TgAb浓度有关[5]。

为了评估TgAb对血清Tg的影响，作者在各种TgAb浓度下用放免法测量Tg的浓度。

　　1 资料与方法

　　1.1 标本收集

　　收集四川大学华西医院2012年9～11月期间，已行甲状腺全切术、中央区淋巴结清扫术、131I清甲

　　表2  Ⅱ组实验样本等体积混合后浓度，表示为Tg（Ⅱa）（ng/mL）-TgAb（Ⅱb）（IU/mL）

　　Tg（Ⅱa）-TgAb（Ⅱb）Tg（Ⅱa）-TgAb（Ⅱb）Tg（Ⅱa）-TgAb（Ⅱb）Tg（Ⅱa）-TgAb（Ⅱb）Tg（Ⅱa）-TgAb（Ⅱb）

　　4.7～3.54.7～5.24.7～18.84.7～643.04.7～930.0

　　18.5～3.518.5～5.218.5～18.818.5～643.018.5～930.0

　　111.0～3.5111.0～5.2111.0～18.8111.0～643.0111.0～930.0

　　246.0～3.5246.0～5.2246.0～18.8246.0～643.0246.0～930.0

　　表3  Ⅰ组样本Tg的测量值（）

　　已知的Tg浓度

　　（ng/mL）不同TgAb浓度条件下的Tg测值（ng/mL）相关系数P

　　10.0（U/mL）30.0（U/mL）100.0（U/mL）300.0（U/mL）1000.0（U/mL）

　　25.1±0.14.0±0.23.4±0.12.6±0.11.8±0.1-0.8440.000

　　12.511.0±0.58.8±0.48.2±0.77.0±0.35.9±0.3-0.8200.000

　　25.026.4±1.823.6±1.020.7±1.120.1±1.215.3±0.5-0.8980.000

　　100104.1±3.2103.7±2.088.2±1.076.7±2.565.5±3.0-0.8800.000

　　表4  Ⅱ组样本Tg的测量值（）

　　已知的Tg浓度

　　（ng/mL）不同TgAb浓度条件下的Tg测值（ng/mL）相关系数P

　　3.5（U/mL）5.2（U/mL）18.8（U/mL）643.0（U/mL）930.0（U/mL）

　　4.74.5±0.24.5±0.23.4±0.62.1±0.12.0±0.2-0.9230.000

　　18.517.6±0.318.7±0.411.3±0.49.1±0.96.7±0.6-0.8500.000

　　111.0102.3±5.1100.5±5.156.0±3.445.3±0.439.3±2.2-0.7930.000

　　246.0235.8±6.2234.8±4.2121.1±1.999.4±12.285.9±5.2-0.7800.001

　　治疗的DTC患者血清标本20例。

纳入标准为：

（1）均停服优甲乐3周，禁碘饮食3周。

（2）由四川大学华西医院检验科Roche公司MODULARE170电化学发光系统测定TSH、Tg及TgAb。

（3）TSH值（77.2±18.5）IU/L，高Tg浓度~TgAb浓度，高TgAb浓度~低Tg浓度。

排除标准：

（1）未手术，或未甲状腺全切，中央区淋巴结未清扫。

（2）未行131I清甲治疗。

（3）未停服优甲乐或停药后TSH值低于30IU/L。

　　1.2 试验样本准备

　　Ⅰ组：

Tg标准品浓度分别为10，25，50，100和200.0ng/mL，TgAb标准品浓度分别为30，100，300，1000和3000IU/mL。

等体积两两混合Tg和TgAb标准品，分别获得混合后不同浓度Tg和TgAb的样本（表1）。

Ⅱ组：

ⅡaDTC患者低水平TgAb（＜10U/mL），不同的Tg浓度（9.3，37.6，221.9和492.0ng/mL）的血清样本；ⅡbDTC患者低水平Tg（＜0.1ng/mL）不同的TgAb浓度（7.0，10.4，37.5，1286.0和1860.0IU/mL）的血清样本。

Ⅱa与Ⅱb等体积两两混合血清样本，分别获得不同浓度Tg和TgAb的血清标本。

见表2。

　　1.3 Tg和TgAb测量

　　Tg测量使用RIA法，试剂盒购自潍坊三维生

　　表1  Ⅰ组标准品等体积混合后浓度，表示为Tg（ng/mL）-TgAb（IU/mL）

　　Tg-TgAbTg-TgAbTg-TgAbTg-TgAbTg-TgAb

　　5.0～15.05.0～50.05.0～150.05.0～500.05.0～1500.0

　　12.5～15.012.5～50.012.5～150.012.5～500.012.5～1500.0

　　25.0～15.025.0～50.025.0～150.025.0～500.025.0～1500.0

　　100～15.0100～50.0100～150.0100～500.0100～1500.0

　　物工程集团有限公司，其检测低限为1μg/L，批内变异系数3.2%～6.8%，批间变异系数4.7～8.5%。

TgAb测量采用IRMA法，由自潍坊三维生物工程集团有限公司提供，其检测低限为3IU/mL，批内变异系数＜10%，批间变异系数＜15%。

Ⅰ组和Ⅱ组，每一浓度，一式三份，进行Tg的重复性测量。

　　1.4 统计学方法

　　将每一混合后样本作Tg含量测定，测定结果用四格表Kappa检验，SPSSversion11软件分析，进行Spearman相关分析，|r|＞0.95存在显著性相关；|r|≥0.8高度相关；0.5≤|r|<0.8中度相关；0.3≤|r|<0.5低度相关，以P＜0.05为差异有统计学意义。

评估样本中不同浓度TgAb对Tg测量的影响。

　　2 结果

　　2.1 Tg测量的重复性

　　Ⅰ组试验样本的变异系数为（4.21±3.51）%（0～14.82）（r=0.998）。

Ⅱ组试验样本的变异系数为（2.83±2.23）%（0.87～11.21）（r=0.999）。

　　2.2 TgAb对Tg的影响

　　Ⅰ组样本中，增加TgAb浓度，Tg的测量值呈比例下降，呈明显的直线负相关趋势（P均＜0.01）。

低浓度（10U/mL）的TgAb样本中，Tg浓度测量值高于已知的Tg浓度的样品（表3）；Ⅱ组样本中，随着TgAb浓度增高，Tg的测量值呈比例下降，呈明显的直线负相关趋势（P均＜0.05）。

见表4。

　　3 讨论

　　约10%~25%的DTC患者清甲治疗后有转移或复发[6-7]，而Tg被视为预测DTC转移或复发的敏感和特异性的肿瘤标志物。

TgAb与存留的抗原刺激相关，40%的DTC患者TgAb呈阳性，较正常人群增高[8，15]。

范群等[9]认为TgAb持续阳性可能表明病灶复发或转移，然而，其他的研究已经报道TgAb水平和病灶残留没有相关性[10]。

因此，血清高浓度的TgAb对Tg值的干扰，将影响DTC患者下一步的治疗决策。

内源性TgAb干扰Tg测量，因此我们可以在一定TgAb浓度下预测Tg浓度。

当存在TgAb时，即使TgAb的浓度很低，由放免测定Tg的值通常也低于其真实值[11]。

Tg测量值取决于TgAb浓度，其程度与TgAb的浓度呈正相关[12]。

在本文研究中，通过A组和B组的实验样品测试Tg，来评估TgAb对Tg测量的影响。

　　本研究发现，在高浓度的TgAb中，Tg已知值是的测量值的2倍多。

如表4中，Tg已知值为4.7ng/mL的血清，在含有1860IU/mLTgAb的样品中测得值仅为2ng/mL。

可以认为，当RIA测量值Tg为2.0ng/mL，而TgAb大于1860IU/mL的患者，其Tg值可能大于4.7ng/mL。

因此，当应用Tg值为2.0ng/mL来评估患者时，患者可能被错误归类为低风险患者[13]，而停止进一步治疗。

一个Tg已知值为18.5ng/mL的血清样本，当含有gAb浓度为1286IU/mL时，测量值为9.1ng/mL。

即TgAb大于1286IU/mL时，Tg值为18.5ng/mL的患者，Tg测定值可能低于10ng/mL。

因此，当Tg值为10ng/mL，而影像学检查无阳性发现时，患者可能被误认为未发生远处转移[14]。

相比早期诊断疾病复发或转移的患者，疾病的处理将被延迟，导致患者预后差。

　　在本研究中，我们使用从患者得到的人类TgAb血清，对Tg测量的影响进行评估，在已知的Tg浓度值范围内，验证人类TgAb的影响。

本研究的结果表明，在参考范围内，人类TgAb浓度可致Tg测值降低，高浓度的TgAb可以导致Tg值更低；因此，考虑到伴随TgAb浓度的高低，Tg测量方法的发展，将决定临床医生参考其临床意义。

与使用患者的血清的试验相反，低浓度的TgAb导致过高地估计的Tg，在本研究中没有进一步论证。

　　Tg测值的影响不只依赖分析方法类别，还有被患者TgAb的识别的Tg抗原决定簇类型。

因此，本次研究可能不适合应用到所有的检测方法和所有患者。

然而，研究预测的Tg值，比未考虑TgAb干扰测量的Tg值更最接近真实的Tg值。

对于DTC患者，可能在预测病灶复发或癌症复发上更有价值[16]。

本研究的可靠性有赖于医生在临床中进行临床实践。

　　本研究是有一定局限性。

首先，患者标本是依据电化学发光筛选的，而本研究运用的是放射免疫法，方法学上存在差异。

其次，尽管尽力规范实验室Tg测定操作，实验室之间的差异仍然存在，这可能与基因多态性相关，比如蛋白质一级结构变化的介导，可能会导致改变蛋白质加工、修改或交联糖基化途径[8]。

血清TgAb检测的结果因抗原决定部位而存在差异，尤其是在患者没有甲状腺炎的情况下[5]。

第三，用血清Tg、TgAb测量值，来估计的真实的Tg值，而真实的TgAb值应该是一个决定性因素。

纳入标准的标本，我们没有评估血清Tg对TgAb的影响力。

第四，在本研究中，我们只用四个浓度的血清Tg和五个浓度的TgAb，估算已知Tg浓度不是最准确的，还需要大样本进一步的研究真正的Tg浓度。

　　综上所述，用Tg和TgAb测量浓度预测真正的Tg浓度，用于评估DTC患者病灶复发或转移，将对DTC患者进一步临床治疗提供更多信息，可能比单纯放免法测量Tg更有价值。

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　　（下转第页）

　　（上接第页）

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　　（收稿日期：

2014-01-27）